2014—2021 年云南省普洱市兽医系统实验室检测能力比对

张容萍，鲁富有，马娜，付航，杨子江，陈景仙，张海楠

（普洱市动物疫病预防控制中心，云南普洱 665000）

动物疫病预防控制机构负责动物疫病防控策略与技术措施的制定和实施[1]，是法定的承担动物疫病诊断、监测、流行病学调查等职能的兽医机构。依托动物疫病预防控制机构的兽医系统实验室作为开展具体工作的技术支撑机构，其技术水平的高低直接影响辖区内动物疫病的防控效果，关系畜牧业的发展。因此提升兽医系统实验室检测能力，对脱贫攻坚、乡村振兴以及维护公共卫生安全具有重要意义。

兽医系统实验室检测能力比对是农业农村部加强各级实验室建设和管理的重要抓手，是加强实验室质量控制的有效方法之一[2]。按照农业农村部和云南省农业农村厅相关要求，普洱市动物疫病预防控制中心积极组织各级兽医系统实验室参加检测能力比对工作。本文分析了2014—2021 年普洱市各级兽医系统实验室检测能力比对结果，以期为进一步提高实验室检测能力，提升兽医系统实验室综合水平奠定基础[3]。

1 材料与方法

1.1 比对范围

2014—2021 年，普洱市参加实验室检测能力比对的市级动物疫病预防控制机构实验室、边境动物疫情监测站实验室以及县（区）级动物疫病预防控制机构实验室（通过考核验收）数量见表1。

表1 2014—2021 年参比实验室数量 单位：个

1.2 比对项目、方法和标准

每年设置3～5 个比对项目，涉及非洲猪瘟、口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、小反刍兽疫、猪伪狂犬病、布鲁氏菌病和马传染性贫血等动物疫病的病原核酸和抗体检测。检测方法有聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、血凝和血凝抑制试验（HA-HI）、虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、琼脂扩散试验（AGID）等。检测程序均依照国家标准或国家参考实验室推荐方法（表2）进行。

1.3 比对样品和试剂

比对样品由云南省动物疫病预防控制中心统一制备、质控、编号、分装和发放。每个比对项目设置5～6 份盲样（2017 年每个比对项目设置5 份盲样），每管分装量为单次试验量的3～4 倍，每份盲样容量一致，在外观上无差异。普洱市动物疫病预防控制中心每年派专人在规定时间内统一领取全市参比实验室的比对盲样和试剂，置于有冰袋的冷藏箱中，并在12 h 内送达参比实验室。

表2 2014—2021 年普洱市兽医系统实验室参比项目、方法和标准

1.4 结果判定

以云南省动物疫病预防控制中心提供的检测结果为判定标准。

1.5 比对结果报送

参加比对的兽医系统实验室在收到样品3 d 内完成检测，并将检测结果报至云南省动物疫病预防控制中心。

2 结果

2.1 市级动物疫病预防控制机构实验室

2014—2021 年市级动物疫病预防控制机构实验室共参加了25 个比对项目，检测147 份比对样品。结果（表3～4）显示：检测正确样品143份，平均正确率为97.3%；2014—2021 年正确率分别为100%、100%、100%、100%、94.4%、100%、91.7%、94.4%；不同检测方法正确率分别为ELISA 100%、SAT 100%、AGID 100%、PCR/qPCR 94.4%、HA-HI 93.6%；不同比对项目正确率分别为新城疫病毒抗体检测100%、O 型口蹄疫病毒抗体检测100%、小反刍兽疫病毒抗体检测100%、猪伪狂犬病毒抗体检测100%、布鲁氏菌抗体检测100%、马传染性贫血病毒抗体检测100%、非洲猪瘟病毒核酸检测94.4%、H5/H7/H9亚型禽流感病毒抗体检测92.8%。

2.2 边境动物疫情监测站实验室

2014—2021 年3 个边境动物疫情监测站实验室共参加了25 个比对项目，检测423 份比对样品。结果（表5～6）显示：检测正确样品405份，平均正确率为95.7%；2014—2021 年正确率分别为94.4%、94.4%、94.4%、93.3%、98.1%、98.1%、98.1%、94.4%；不同检测方法正确率分别 为SAT 100%、ELISA 98.1%、HA-HI 94.3%、AGID 88.9%、PCR/qPCR 83.3%；不同比对项目正确率分别为猪伪狂犬病毒抗体检测100%、布鲁氏菌抗体检测100%、猪瘟病毒抗体检测100%、小反刍兽疫病毒抗体检测98.3%、O 型口蹄疫病毒抗体检测96.9%、H5/H7/H9 亚型禽流感病毒抗体检测94.4%、新城疫病毒抗体检测94.4%、马传染性贫血病毒抗体检测88.9%、非洲猪瘟病毒核酸检测83.3%。

表3 2014—2021 年市级动物疫病预防控制机构实验室不同检测方法比对结果

表4 2014—2021 年市级动物疫病预防控制机构实验室不同比对项目正确率统计 单位：%

2.3 县（区）级动物疫病预防控制机构实验室

普洱市共有7 个县（区）级动物疫病预防控制机构实验室，有6 个通过兽医系统实验室考核验收，于2018 年开始参加能力比对。2018—2021年县（区）级动物疫病预防控制机构实验室共参加了12 个比对项目，检测270 份比对样品。结果（表7～8）显示：检测正确样品259 份，平均正确率为95.9%；2018—2021 年正确率分别为91.7%、93.1%、100%、100%；不同检测方法正确率分别为ELISA 100%、SAT 95.0%、HA-HI 91.1%；不同比对项目正确率分别为O 型口蹄疫病毒抗体检测100%、猪伪狂犬病毒抗体检测100%、小反刍兽疫病毒抗体检测100%、猪瘟病毒抗体检测100%、布鲁氏菌抗体检测95.0%、H5/H9 亚型禽流感病毒抗体检测91.1%。

表5 2014—2021 年边境动物疫情监测站实验室不同检测方法比对结果

表6 2014—2021 年边境动物疫情监测站实验室不同比对项目正确率统计 单位：%

3 分析与讨论

3.1 兽医系统实验室以考促建成效明显

按照云南省农业农村厅要求，考核验收合格的兽医系统实验室方可参加能力比对。市级实验室和3 个边境动物疫情监测站实验室均于2012 年通过了兽医系统实验室考核，思茅、宁洱、景东、镇沅4 个县（区）级动物疫病预防控制机构实验室于2017 年通过了考核，墨江和景谷2 个县级动物疫病预防控制机构实验室于2018 年通过了考核。截至2021 年，全市共有10 个兽医系统实验室通过考核验收。8 年间，参比实验室范围覆盖了所有通过考核验收的10 个兽医系统实验室。市级、边境动物疫情监测站、县（区）级实验室的检测平均正确率分别为97.3%、95.7%、95.9%，整体检测水平较高。能力比对促进了各级实验室的建设与升级，参比项目在原来常规的HA-HI、ELISA、SAT、AGID 等血清学项目基础上增加了PCR 和qPCR 方法，各级实验室检测能力和水平得到稳步提升。

表7 2018—2021 年县（区）级动物疫病预防控制机构实验室不同检测方法比对结果

3.2 HA-HI 检测能力薄弱

HA-HI 作为禽流感病毒抗体检测的常规方法，是每个实验室必须过关的检测项目，但各级实验室的HA-HI 检测正确率偏低，且年度间正确率表现不稳定。2014—2021 年，市级实验室HA-HI平均正确率为93.6%，其中只有5 年的正确率为100%；边境动物疫情监测站实验室年均正确率为94.3%，只有1 年所有参比实验室正确率均为100%；县（区）级动物疫病预防控制机构实验室年均正确率为91.1%，只有2 年所有参比实验室均为100%。以上数据说明各实验室对HA-HI 检测方法的掌握和运用能力依然有所欠缺。究其原因，可能是HA-HI 属于定量试验，对试剂（1%鸡红细胞悬液等）、环境（温度等）、耗材（反应板质量等）、仪器（移液器校准等）等要求较高，以致试验正确率难以保证。

表8 2018—2021 年县（区）级动物疫病预防控制机构实验室不同比对项目正确率统计 单位：%

3.3 病原学检测能力不足

在普洱市的11 个兽医系统实验室中，目前只有市级、澜沧县和孟连县3 个实验室可开展病原学检测，其余实验室均因未配备相关设施设备而无法开展此项工作。主要原因是，普洱市位于我国西南边陲，经济发展水平不高，本级财政不具备充分支持县（区）级建立分子生物学实验室的能力，导致病原学检测能力大大不足，无法满足动物疫病防控需求。

4 建议

经过持续8 年开展检测能力比对工作，普洱市兽医系统实验室检测水平有了很大提升，以考促建卓有成效。但普洱市地处边境一带，边境线长（480 km），境外动物疫情传入压力大、防控难度高，实验室的检测能力和设施建设还有待加强。为了进一步提升实验室综合水平，更好地为动物疫病防控和维护公共卫生安全提供技术支撑，提出如下建议。

4.1 培养专业素质强的实验工作人员

当前基层兽医系统实验室面临工作人员少，平均年龄大，理论知识过于落后，操作仪器设备不熟练，优秀人才激励政策过于单一等问题。有关部门应重视基层队伍的发展建设，通过政策倾斜，职称评定等鼓励措施调动工作人员积极性，通过招聘、培养高校毕业生，实现团队梯度建设和人才储备。业务部门需加强实验室人员技术培训，开展相关法律法规、实验室生物安全、技术标准和实验操作等专题培训，加强与上下级、平级单位间的学习交流，建立一支业务专、素养高的实验室检测人才队伍。

4.2 加大实验室工作经费投入力度

普洱市地处我国西南边陲，经济发展水平不高，部分县（区）未把监测经费纳入财政预算，导致实验室无固定监测经费或经费不足。应提高对基层实验室的重视，加大对动物疫病监测资金的投入，按照实际情况，根据畜禽养殖比例确认资金份额，每年归纳至各级政府的财政预算；同时，畜牧兽医主管部门制定针对性监督措施，保证监测资金在基层专款专用，落实到实处，避免资金被占用或挪用。

4.3 加快兽医系统实验室的管理体系建设

大多数基层实验室缺乏完善的管理体系或不能按体系有效运行。应根据实际工作条件，不断完善实验室质量管理体系，实现对仪器设备、检验人员、培训考核、档案资料、纠正与预防、质量保障、试剂耗材等的全面规范化管理；同时，加快完善生物安全管理体系，优化《实验室废弃物及污染物无害化处理制度》《仪器设备使用管理制度》《药品试剂使用管理制度》《实验室生物安全管理制度》《菌（毒）种管理制度》等管理制度，并严格按照技术标准、实验室管理规范开展实验室工作。