基于网络药理学探讨酸枣仁汤抗抑郁的作用机制

李 艳 巴文强 李多聪

（1.吉安市第三人民医院精神科，江西 吉安 343000；2.吉安市中心人民医院药剂科，江西 吉安 343000）

抑郁症是多种原因引起的情感障碍，临床常表现为心境低落、兴趣和愉快感的丧失、活动减少、精力减退等，多数患者还伴有注意力障碍及思维迟钝［1］，严重危害人类身心健康，给家庭和社会带来巨大的精神和经济负担［2］。酸枣仁汤源自汉代张仲景的《金匮要略》，由酸枣仁、茯苓、知母、川芎、甘草5 味药组成。现代药理研究［3］发现，酸枣仁汤具有抗抑郁、镇静催眠等作用。多项临床研究［4］表明，酸枣仁汤治疗抑郁症效果显著，不良反应小。但酸枣仁汤治疗抑郁症的作用机制仍需进一步阐明。网络药理学是一种以系统生物学和多向药理学为理论基础，用于分析药物作用机制的新研究方法。本研究采用网络药理学方法，探讨酸枣仁汤抗抑郁的可能作用机制，为抑郁症的治疗提供思路和参考。

1 材料与方法

1.1 活性成分的筛选及靶点挖掘通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php）获取酸枣仁汤的化学成分，以口服生物利用度（OB）≥30%和类药性（DL）≥0.18 为筛选标准［5］，获得活性成分及其对应靶点。利用UniProt（https：//www.uni⁃prot.org）数据库将活性成分靶点名称统一转换成对应基因名称，限定物种为“Homo-Sapiens”。

1.2 疾病靶点的获取以“depression”“depressive dis⁃order”“depressive”为 关 键 词，检 索 GeneCards（https：//www.genecards.org）、OMIM （https：//www.omim.org/）及DRUGBANK（https：//www.drugbank.ca）数据库中与抑郁症相关的靶点并摘录。

1.3 蛋白互作（PPI）网络的构建及核心靶点筛选将药物靶点与疾病靶点分别删重后，输入VENNY 2.1 在线作图工具（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny），取交集，将交集靶点上传至STRING 11.0 数据库（https：//www.string-db.org），构建PPI 网络。同时，运用Cyto⁃scape 3.7.1 软件的“Network Analyzer”进行拓扑分析筛选核心靶点。

1.4 基因本体论（GO）富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析将交集靶点导入DAVID 数据库（https：//david.ncifcrf.gov）进行GO 富集和KEGG 通路分析，其中GO 富集包括生物过程（Biological process，BP）、细胞组成（Cellular component，CC）及分子功能（Molecular function，MF）。保留伪发现率（FDR）＜0.01的条目，保存数据并利用微生信（http：//www.bioinfor⁃matics.com.cn）在线作图工具对数据进行可视化。

1.5 酸枣仁汤-成分-靶点-通路网络的构建运用Cyto⁃scape 3.7.1软件构建“酸枣仁汤-成分-靶点-通路”网络图，并进行拓扑分析，筛选核心成分。

2 结果

2.1 活性成分及其靶点的筛选通过TCMSP 数据库共检索出酸枣仁汤化学成分617 个，经OB≥30%和DL≥0.18筛选得到活性成分138 个，对应1578 个靶点，删重后共得到228个靶点。

2.2 疾病靶点筛选通过GeneCards 数据库检索到抑郁相关靶点36 270 个，设定Relevance score 大于中位数的目 标 靶 点 为 抑 郁 的 潜 在 靶 点［6］，结 合OMIM 及DRUGBANK 数据库补充相关靶点，共得到与抑郁相关靶点5414个，删重后得到5186个靶点。

2.3 PPI的构建及核心靶点筛选将活性成分靶点与疾病靶点输入VENNY2.1 在线作图工具取交集，得到177个交集靶点，见图1。将交集靶点导入STRING 数据中，构建PPI网络。拓扑参数显示，PPI网络中度值、介数的平均值分别为8.9571、0.0128，度值、介数均大于平均值的靶点有32 个，见图2。其中，节点颜色根据度值排序，度值越大，节点颜色越深。这32个靶点很可能是酸枣仁汤抗抑郁的核心靶点。

图1 酸枣仁汤-抑郁共有靶点韦恩图

图2 核心靶点蛋白互作网络图

2.4 富集分析将177 个交集靶点输入至DAVID 数据库进行GO 富集和KEGG 通路分析（FDR＜0.01）。GO富集的条目共276 个，BP 主要涉及药物反应、RNA 聚合酶II 启动子转录的正调控、基因表达的正调控等；CC 主要涉及细胞外间隙、膜筏、质膜、细胞质等；MF 主要涉及酶结合、蛋白质同源二聚活性、蛋白质异二聚活性等。选取前10 个BP、CC、MF 的条目作气泡图，见图3。KEGG 通路富集得到114 个信号通路，主要涉及肿瘤坏死因子信号通路、HIF-1 信号通路、Toll样受体信号通路、催乳激素信号通路、PI3K-Akt 信号通路、VEGF 信号通路、ErbB 信号通路、MAPK 信号通路、FoxO 信号通路等。选取前30 个条目作气泡图，见图3。

图3 GO与KEGG富集分析气泡图

2.5 酸枣仁汤-成分-靶点-通路网络的构建将酸枣仁汤的116个活性成分，177个交集靶点和KEGG 富集分析前30条通路运用Cytoscape 3.7.1软件构建“酸枣仁汤-成分-靶点-通路”网络图，见图4。拓扑分析显示，成分类各节点度值及介数的平均值分别为12.06和0.0069，度值和介数均大于平均值的成分有15 个，推测这15 个成分很可能是酸枣仁汤抗抑郁的核心成分。见表1。

表1 酸枣仁汤抗抑郁的核心成分信息

图4 酸枣仁汤-成分-靶点-通路网络

3 讨论

本研究筛选出酸枣仁汤抗抑郁15 个核心成分，包括槲皮素、山柰酚、柚皮素等。Khan K 等［7］研究发现，槲皮素通过抗氧化、抗炎、降低细胞毒性和增加5-羟色胺（5-HT）水平而产生抗抑郁作用。柚皮素可通过调节氧化炎性损伤和核因子-κB/脑源性神经营养因子（NF-κB/BDNF）的表达，改善缺氧应激小鼠的抑郁和焦虑样行为［8］。PPI 网络显示，酸枣仁汤抗抑郁的核心靶点共32 个，包括STAT3、AKT1、MAPK1 等。小胶质细胞中STAT3 可通过调节神经元巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）介导的突触活性改善抑郁样行为，表明小胶质细胞STAT3 可能是治疗抑郁症的一种新靶标［9］。AKT1 基因多态性与多民族人群的抑郁症严重程度和抗抑郁治疗反应有关［10］。MAPK1 也称为ERK2，有研究［11］发现，在大鼠强迫游泳试验中，成年雄性Sprague Dawley 大鼠海马体中ERK2 的上调会诱导产生抗抑郁样行为。

KEGG 通路富集分析表明，酸枣仁汤通过调控PI3K-Akt、MAPK、TNF 等信号通路产生抗抑郁效果。PI3K-Akt 信号通路可调节机体内细胞存活、分化及凋亡，其与抑郁症是明确相关的，也是目前许多抗抑郁药物发挥作用的通路之一［12］。MAPK 信号通路与细胞增殖、分化、凋亡密切相关，Zhang H 等［13］研究发现，帕罗西汀联合氟尿嘧啶能够抑制白介素-22（IL-22）的表达来调节MAPK 信号通路，进而改善结直肠癌伴抑郁模型小鼠的抑郁行为和生存状态。

综上，网络药理学研究显示，酸枣仁汤抗抑郁的主要活性成分包括槲皮素、山柰酚、柚皮素等；涉及的核心靶点包括STAT3、AKT1、MAPK1 等；可通过调控PI3K-Akt、MAPK、TNF 等信号通路发挥协同抗抑郁作用。这体现了酸枣仁汤多成分、多靶点、多通路的作用特点，为酸枣仁汤治疗抑郁症提供了新的思路及参考。