沉香叶化学成分研究

王三炜 谢言青 周志宏 刘 录

云南云中营养与健康研究院/云南中医药大学，云南 昆明 650500

沉香叶是瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg含有树脂木材沉香的叶子，也称为白木香叶[1]。沉香叶一年采收两季，来源广，资源较为丰富。沉香叶作为非药用部位，往往被丢弃，一方面造成沉香资源的浪费，另一方面叶对环境产生了一定的破坏，如何能够有效利用沉香叶成为了一个新的研究热点。

沉香叶中含有黄酮、三萜、挥发油、苷类、醌类等多种化学成分[2]；现代药理研究表明，沉香叶具有抗炎[3]、镇痛[4]、抗菌[5]、降糖[6]等生物活性。然而，目前有关沉香叶的化学成分研究较少，为了进一步挖掘沉香叶中的化学成分，本文利用现代分离技术对沉香叶醇提物进行了提取分离，并对分离得到的化合物进行了结构鉴定，从中得到18个化合物，在一定程度上为沉香叶的进一步研究奠定了基础，也为沉香的资源开发利用提供了理论依据。

1 材料

ESI-MS和HRESI-MS由API QSTAR Pular-1型质谱仪上测定；核磁共振谱[1H-NMR、13C-NMR]用Brucker AM-400、DRX-500或BRUKER AV Ⅲ 600型超导核磁共振仪测定；所用试剂为氘代试剂；高效液相HPLC为Agilent 1600 液相色谱；半制备柱为Ultimate XB-C18(10 mm×250 mm，5 μm)、柱材料为RP-18和硅胶(80目、200目)；旋转蒸发仪；暗箱三用紫外分析仪；电子天平；电热鼓风干燥箱；青岛谱科化工有限公司薄层色谱硅胶板；Sephadex LH-20为Mistsubishi Co，Ltd生产(25～100 μm)；显色剂10%硫酸-乙醇溶液。

沉香叶药材购买于昆明市螺蛳湾药材市场，由云南中医药大学刘录教授鉴定为瑞香科植物、沉香属白木香[Aquilariasinensis(Lour.)Gilg ]的叶。

2 提取分离

取沉香叶粉末3.5 kg，用11倍量的70%乙醇回流提取3次，每次3 h，收集两次滤液、减压蒸馏得到沉香叶浸膏480 g。

480 g沉香叶浸膏分别用乙酸乙酯、石油醚各萃取7～9次，收集萃取液，对各部分进行减压浓缩，得到石油醚相150.0 g、乙酸乙酯相 120.0 g。

取乙酸乙酯相 120.0 g，经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(60∶1～10∶1)作为流动相进行反复洗脱，，得到4个馏分，A(18.6 g)、B(19.1 g)、C(17.4 g)、D(45.8 g)。组分A用硅胶柱(160～200目)进行分离，以石油醚-丙酮(15∶1～2∶1)为洗脱剂反复洗脱分离纯化，得到化合物1(1.40 g)、2(1.48 g)、3(537 mg)和A-1(7.9 g)；组分A-1先以石油醚-丙酮(20∶1～5∶1)为洗脱剂进行洗脱，再经过HPLC纯化，流动相为甲醇-水(85∶15)，得到化合物4(122 mg)、5(103 mg)、6(57 mg)、7(73 mg)。组分B用硅胶柱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯(25∶1～15∶1)为洗脱剂进行梯度洗脱，得到8(63 mg)、9(56 mg)、10(47 mg)和组分B-1(6.7 g)，组分B-1先经过100%甲醇Sephadex LH-20柱色谱后、再经过HPLC(90%甲醇)分离纯化，得到11(34 mg)、12(28 mg)、13(36 mg)、14(30 mg)。组分C以石油醚：乙酸乙酯(15∶1～1∶1)为流动相进行硅胶柱层析，再用HPLC(75%甲醇)纯化得到15(12 mg)、16(22 mg)、17(17 mg)、18(15 mg)。

3 结构鉴定

化合物1白色粉末(CHCl3)，分子式：C30H52O。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：5.36 (1H，brd，J=4.8 Hz，H-6)，3.53(1H，tq，J=9.6，4.8 Hz，H-3)，1.02 (3H，d，J= 7.9 Hz，H-21)，0.93 (3H，d，J= 6.4 Hz，H-29)，0.86 (3H，d，J= 6.9 Hz，H-27)，0.84 (3H，s，H-19)，0.82 (3H，d，J= 6.9 Hz，H-26)，0.69 (3H，s，H-18)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：140.7 (C-5)，121.6 (C-6)，71.7 (C-3)，56.7 (C-14)，56.0 (C-17)，50.0 (C-9)，45.7 (C-24)，42.2 (C-13)，42.2 (C-4)，39.7 (C-12)，37.2 (C-1)，36.4 (C-10)，36.1 (C-20)，33.8 (C-22)，31.8 (C-2)，31.8 (C-8)，31.6 (C-7)，29.6 (C-23)，29.0 (C-25)，28.2 (C-16)，26.0 (C-23a)，24.2 (C-15)，23.0 (C-28)，21.0 (C-11)，19.7 (C-27)，19.3 (C-19)，19.1 (C-26)，18.7 (C-21)，12.1 (C-29)，11.8 (C-18)。以上数据与文献[7]报道数据基本一致，故鉴定化合物1为Homostigmast-5-en-3β-ol。

化合物2白色粉末(CHCl3)，分子式：C30H52O。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：3.74 (1H，brd，J= 2.8 Hz，H-3)，1.91 (1H，dt，J= 9.6，2.7 Hz，H-2a)，1.74 (1H，dt，J= 13.1，3.3 Hz，H-6a)，1.16，1.01，0.99，0.99，0.97，0.95 and 0.87 (each 3H，s，H-24～30)，0.95 (3H，d，J= 7.6 Hz，H-23)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：72.6 (C-3)，61.2 (C-10)，53.1 (C-8)，49.1 (C-4)，42.7 (C-18)，41.6 (C-6)，39.6 (C-14)，39.2 (C-22)，38.3 (C-9)，37.7 (C-13)，37.2 (C-5)，36.2 (C-16)，35.7 (C-19)，35.5 (C-11)，35.4 (C-2)，35.2 (C-29)，32.8 (C-21)，32.3 (C-15)，32.4 (C-30)，31.7 (C-28)，30.8 (C-12)，30.2 (C-17)，28.4 (C-20)，20.3 (C-27)，18.6 (C-26)，18.4 (C-25)，17.5 (C-7)，16.5 (C-24)，15.7 (C-1)，11.6 (C-23)。以上数据与文献[8]报道数据基本一致，故鉴定化合物2为表木栓醇。

化合物3白色粉末(CHCl3)，分子式：C30H52O。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：2.38 (1H，m，H-2a)，2.32～2.24 (2H，m，H-2b，H-4)，1.96 (1H，m，H-1a)，1.76 (1H，m，H-6a)，1.66 (1H，m，H-1b)，1.19，1.06，1.02，1.01，0.96，0.88 and 0.73 (each 3H，s，H-22～30)，0.87 (3H，d，J= 6.9 Hz，H-23)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：213.4 (C-3)，59.6 (C-10)，58.3 (C-4)，53.2 (C-8)，42.7 (C-18)，42.3 (C-5)，41.6 (C-2)，41.4 (C-6)，39.8 (C-13)，39.4 (C-22)，38.4 (C-14)，37.5 (C-9)，36.2 (C-16)，35.7 (C-11)，35.4 (C-19)，35.2 (C-29)，32.7 (C-21)，32.3 (C-15)，32.2 (C-28)，31.7 (C-30)，30.6 (C-12)，30.2 (C-17)，28.4 (C-20)，22.4 (C-1)，20.4 (C-26)，18.8 (C-27)，18.3 (C-7)，18.1 (C-25)，14.9 (C-24)，6.7 (C-23)。以上数据与文献[9]报道数据基本一致，故鉴定化合物3为木栓酮。

化合物4白色粉末(CHCl3)，分子式：C30H52O。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：5.32 (1H，s，H-7)，4.85，4.68 (1H，s，H-29a，29b)，2.76 (1H，td，J= 14.5，5.6 Hz，H-2a)，1.11，1.05，1.03，1.01 and 0.83 (each 3H，s，H-18，19，30～32)，1.06 (9H，s，H-26～28)，0.92 (3H，d，J= 6.5 Hz，H-21)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：217.1 (C-3)，159.1 (C-24)，146.1 (C-8)，117.7 (C-7)，105.7 (C-29)，53.1 (C-17)，52.5 (C-5)，51.3 (C-14)，48.6 (C-9)，47.8 (C-4)，43.6 (C-13)，38.5 (C-1)，36.6 (C-20)，36.4 (C-25)，36.3 (C-2)，35.1 (C-22)，35.1 (C-10)，34.2 (C-15)，33.8 (C-12)，29.5 (C-26～28)，28.4 (C-11)，28.4 (C-16)，27.6 (C-32)，24.7 (C-31)，24.5 (C-6)，22.1 (C-18)，21.5 (C-30)，18.56 (C-21)，18.4 (C-23)，12.7 (C-19)。以上数据与文献[10]报道数据基本一致，故鉴定化合物4为wallenone。

化合物5白色粉末(CHCl3)，分子式：C30H52O。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：0.56 (1H，d，J= 4.0 Hz，H-19)，0.76 (1H，d，J= 4.0 Hz，H-19)，0.85 (3H，d，J= 8.0 Hz，21-CH3)，0.87 (3H，s，30-CH3)，0.96 (3H，s，18-CH3)，0.98 (3H，s，31-CH3)，1.02 (3H，s，32-CH3)，1.04 (3H，s，28-CH3)，1.08 (3H，s，29- CH3)，1.65 (3H，s，27-CH3)，2.26 (1H，m，H-2b)，2.67 (1H，m，H-2a)，4.64 (1H，brs，H-26)，4.68 (1H，brs，H-26)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：217.1 (C-3)，152.5 (C-25)，109.4 (C-26)，52.2 (C-17)，50.4 (C-4)，48.6 (C-14)，48.6 (C-5)，47.8 (C-8)，38.6 (C-24)，37.6 (C-23)，37.5 (C-2)，36.7 (C-20)，35.7 (C-12)，33.6 (C-1)，32.7 (C-15)，30.6 (C-22)，29.7 (C-19)，28.2 (C-7)，27.7 (C-32)，27.4 (C-3)，26.6 (C-16)，26.1 (C-10)，25.8 (C-11)，22.3 (C-28)，21.2 (C-9)，21.6 (C-6)，20.7 (C-29)。以上数据与文献[11]报道数据基本一致，故鉴定化合物5为cyclobalanone。

化合物6白色粉末(CHCl3),分子式C30H50O2。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：0.78 (s，3H)，0.97 (s，3H)，1.01 (s，3H)，1.03 (s，3H)，1.08 (s，3H)，1.17 (s，3H).13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：39.5 (C-1)，34.1 (C-2)，218.1 (C-3)，47.3 (C-4)，54.8 (C-5)，19.7 (C-6)，32.6 (C-7)，41.9 (C-8)，50.0 (C-9)，36.8 (C-10)，21.5 (C-11)，24.1 (C-12)，49.6 (C-13)，41.6 (C-14)，34.4 (C-15)，21.9 (C-16)，53.9 (C-17)，44.0 (C-18)，41.2 (C-19)，26.5 (C-20)，51.0 (C-21)，73.9 (C-22)，26.5 (C-23)，21.1 (C-24)，15.7 (C-25)，16.4 (C-26)，16.8 (C-27)，16.2 (C-28)，28.7 (C-29)，30.8 (C-30)。以上与文献[12]报道数据基本一致，故鉴定化合物6为羟基何帕酮。

化合物7经石油醚-醋酸乙酯(4∶1)、石油醚-丙酮(12∶1)、二氯甲烷-醋酸乙酯(50∶1)与对照品β-谷甾醇3个体系对比Rf值和显色之后，故鉴定化合物7为β-谷甾醇。

化合物8淡黄色粉末(CHCl3)，分子式C17H14O6。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.77 (1H，s，5-OH)，7.48 (1H，dd，J= 8.3，2.0 Hz，H-6’)，7.34 (1H，d，J= 2.0 Hz，H-2’)，7.04 (1H，d，J= 8.4 Hz，H-5’)，6.58 (1H，s，H-3)，6.48 (1H，d，J= 2.3 Hz，H-8)，6.38 (1H，d，J= 2.3 Hz，H-6)，4.01 (3H，s，3’-OCH3)，3.87 (3H，s，7-OCH3)；13C-NMR (150 MHz，CDCl3)δ：182.7 (C-4)，165.7 (C-7)，164.3 (C-2)，162.4 (C-5)，157.7 (C-8a)，149.5 (C-4’)，147.1 (C-3’)，123.2 (C-1’)，120.8 (C-6’)，115.3 (C-5’)，108.6 (C-2’)，105.6 (C-4a)，104.5 (C-3)，98.3 (C-6)，92.7 (C-8)，56.5 (3’-OCH3)，56.1 (7-OCH3)。以上与文献[13]报道数据一致，故鉴定化合物8为5，3’-二羟基-7，4’-二甲氧基黄酮。

化合物9淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C18H16O6。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.81 (1H，s，OH)，7.54 (1H，dd，J= 8.5，2.1 Hz，H-6’)，7.36 (1H，d，J= 2.1 Hz，H-2’)，6.97 (1H，d，J= 8.5 Hz，H-5’)，6.58 (1H，s，H-3)，6.51 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-8)，6.37 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-6)，3.99 (3H，s，7-OCH3)，3.98 (3H，s，4’-OCH3)，3.87 (3H，s，3’-OCH3)；13C-NMR (250 MHz，CDCl3)δ：182.5 (C-4)，165.4 (C-2)，164.1 (C-7)，162.3 (C-8a)，152.4 (C-3’)，149.4 (C-4’)，123.7 (C-1’)，120.2 (C-6’)，111.3 (C-5’)，108.7 (C-2’)，105.7 (C-4a)，104.6 (C-3)，98.2 (C-6)，92.8 (C-8)，56.2 (3’-OCH3，4’-OCH3)，55.9 (7-OCH3)。以上与文献[14]报道数据一致，故鉴定化合物9为木犀草素-7，3’，4’-三甲醚。

化合物10淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C17H14O6。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.97 (1H，s，-OH)，10.04 (1H，brs，-OH)，7.58 (2H，overlapped，H-2，6)，6.94 (2H，overlapped，H-3，5)，6.77 (1H，d，J= 0.8 Hz，H-8)，6.35(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，3.88 (3H，s，-OCH3)，3.87 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (75 MHz，CDCl3)δ：181.8 (C=O)，165.1 (C-7)，163.8 (C-2)，161.2 (C-5)，157.2 (C-9)，150.7 (C-4)，148.1 (C-3)，121.3 (C-1)，120.5 (C-6)，115.6(C-5)，110.2 (C-2)，104.7 (C-10)，103.3 (C-3)，97.8 (C-6)，92.7 (C-8)，56.1 (-OCH3)，55.8 (-OCH3)。以上与文献[15]报道数据一致，故鉴定化合物10为 5，4’-二羟基-7，3’-二甲氧基黄酮。

化合物11淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C17H14O6。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.96 (1H，s，-OH)，7.95 (2H，d，J= 8.8 Hz，H-2’，6’)，6.96(2H，d，J= 8.8 Hz，H-3’，5)，6.83 (1H，s，H-3)，6.74 (1H，d，J= 2.1 Hz，H-8)，6.36 (1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)，3.86 (3H，s，-OCH3)；以上与文献[16]报道数据一致，故鉴定化合物11为芫花素。

化合物12淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C17H16O5。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.83 (1H，s，4’-OH)，7.86 (2H，d，J= 8.8 Hz，H-2’，6’)，7.07 (2H，d，J= 8.6 Hz，H-3’，5’)，6.57 (1H，s，H-3)，6.48 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-8)，6.38 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-6)，3.91 (3H，s，7-OCH3)，3.88(3H，s，5-OCH3)；13C-NMR (151 MHz，CDCl3)δ：196.2 (C-4)，168.0 (C-7)，164.2 (C-2)，162.8(C-4’)，156.4(C-8a)，127.8 (C-2’，C-6’)，115.8(C-3’，C-5’)，103.2 (C-3)，95.2 (C-6)，94.3 (C-8)，55.8 (7-OCH3)，50.8 (5-OCH3)，43.3 (C-3)。以上与文献[17]报道数据一致，故鉴定化合物12为5，7-二甲氧基-4’-羟基二氢黄酮。

化合物13淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C17H14O5。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：7.86 (2H，d，J= 8.9 Hz，H-2’，6’)，7.03 (2H，d，J= 8.9 Hz，H-3’，5’)，6.59 (1H，s，H-3)，6.49 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-8)，6.38 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-6)，3.91 (3H，s，7-OCH3)，3.89(3H，s，4’-OCH3)；13C-NMR (250 MHz，CDCl3)δ：182.6 (C-4)，165.5 (C-7)，164.1 (C-2)，162.7 (C-5)，162.3 (C-4’ )，157.8 (C-8a)，128.2 (C-2’，C-6’)，123.7 (C-1’)，114.6 (C-3’，C-5’)，106.7 (C-4a)，104.5 (C-3)，98.1 (C-6)，92.7 (C-8)，55.9 (7-OCH3)，55.7 (4’-OCH3)。以上与文献[18]报道数据一致，故鉴定化合物13为洋芹素-7，4’-二甲醚。

化合物14淡黄色粉末(CHCl3)，分子式：C17H14O5。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：12.83 (1H，s，4’-OH)，7.86 (2H，d，J= 8.8 Hz，H-2’，6’)，7.08 (2H，d，J= 8.6 Hz，H-3’，5’)，6.57(1H，s，H-3)，6.48(1H，d，J= 2.2 Hz，H-8)，6.38 (1H，d，J= 2.2 Hz，H-6)，3.91 (3H，s，7-OCH3)，3.88 (3H，s，5-OCH3)；13C-NMR (250 MHz，CDCl3)δ：182.6 (C-4)，165.5 (C-7)，164.1 (C-2)，162.7 (C-4’)，162.3 (C-5)，157.8 (C-8a)，128.2 (C-2’，C-6’)，123.7 (C-1’)，114.6 (C-3’，C-5’)，105.7 (C-4a)，104.5 (C-3)，98.1 (C-6)，92.7 (C-8)，55.6 (5-OCH3)，55.7 (7-OCH3)。以上与文献[19]报道数据一致，故鉴定化合物14为4’-羟基-5，7-二甲氧基黄酮。

化合物15无色无定形粉末(CHCl3)，分子式：C26H22O8。1H-NMR (400 MHz，CD3COCD3)δ：6.69 (4H，s，H-2’，6’，2’’，6’’)，4.68 (2H，d，J=3.8 Hz，H-4，8)，4.24 (2H，m，H-2a，6a)，3.86 (2H，m，H-2b，6b)，3.83 (12H，s，4-OCH3)，3.11 (2H，m，H-1，5)；13C-NMR (100 MHz，CD3COCD3)δ：147.7 (C-3’，5’，3’’，5’’)，135.4 (C-4’，4’’)，132.4 (C-1’，1’’)，103.7 (C-2’，6’，2’’，6’’)，85.8 (C-4，8)，71.6 (C-2，6)，55.7 (OCH3)，54.5 (C-1，5)。以上与文献[20]报道数据基本一致，故鉴定化合物15为丁香脂素。

化合物16黄色无定形粉末(CHCl3)，分子式：C8H8O4。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：5.78 (2H，s，Ar-H)，3.74 (6H，s，1-OCH3，6-OCH3)；13C-NMR (150MHz，CDCl3)δ：186.8 (C-4)，176.6 (C-1)，157.4 (C-2，6)，107.5 (C-3，5)，56.6 (2-OCH3，6-OCH3)。以上与文献[21]报道数据基本一致，故鉴定化合物16为 2，6-二甲氧基对苯醌。

化合物17黄色无定形粉末(CHCl3)，分子式：C8H8O4。1H-NMR (400 MHz，CDCl3)δ：5.87 (2H，s，H-3，6)，3.83 (6H，s，2×OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CDCl3)δ：186.8 (C-1，4)，157.7 (C-2，5)，107.5 (C-3，6)，56.8 (OCH3)。以上与文献[22]报道数据基本一致，故鉴定化合物17为2，5-二甲氧基对苯醌。

化合物18无色无定形粉末(CHCl3)，分子式：C9H12O3。1H-NMR (600 MHz，CDCl3)δ：5.87 (3H，s，Ar-H)，3.87(9H，s，1-OCH3，3-OCH3，5-OCH3)；13C-NMR (CDCl3，125MHz)δ：157.4 (C-1，3，5)，107.5 (C-2，4，6)，56.6 (1-OCH3，3-OCH3，5-OCH3)。以上与文献[23]报道数据基本一致，故鉴定化合物18为1，3，5-三甲氧基苯。

4 结果与讨论

本文对沉香叶醇提物的化学成分进行了研究，利用现代分离技术和波谱解析方法，从沉香叶乙醇提取物中共分离得到18个化合物并对其进行了结构鉴定，分别为7个三萜类化合物、7个黄酮类化合物、2个醌类化合物和1个倍半萜类化合物，并且首次从瑞香科沉香属植物中发现了homostigmast-5-en-3β-ol(1)、wallenone(4)、cyclobalanone(5)、这3个三萜类化合物和5，7-二甲氧基-4’-羟基二氢黄酮(12)、4-羟基-5，7-二甲氧基黄酮(14)这2个黄酮类化合物。本实验对这18个化合物进行了细胞毒性实验研究，结果显示18个化合物均未表现出细胞毒性，此外查阅文献发现，化合物2[24]、化合物3[25]、化合物4[26]、化合物7[24]、化合物11[27]均表现出了良好的镇痛抗炎活性，

查阅文献可知，沉香叶中主要的化学成分为黄酮类和三萜类化合物[28-29]，本实验结果也表明沉香叶中含有大量的黄酮和三萜类成分。通过本实验对沉香叶的化学成分进行的研究，进一步挖掘了沉香叶的物质基础，为沉香叶关于抗炎镇痛的药用价值提供依据，也为沉香叶的开发利用提供了理论依据。