山羊口蹄疫、小反刍兽疫疫苗不同免疫剂量同步分点注射免疫效果比较

高丽艳，杨晓燕，台晓媛，喻永福，张俊雄，李继明，段 纲，李本能，李学德，陈关雄

（1. 石林彝族自治县动物疫病预防控制中心，云南石林 652200；2. 云南鑫德顺畜牧有限公司，云南石林 652200；3. 云南农业大学动物医学院，云南昆明 650201；4. 会泽县待补镇农业农村综合服务中心，云南会泽 654216）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）和小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）被我国列为一类动物疫病，被世界动物卫生组织（World Organization for Animal Health，WOAH）列为须通报动物疫病[1-2]，是危害山羊养殖业发展的主要疫病。FMD 是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，也是可快速远距离传播的动物疫病[3]。FMDV 有7 个血清型，包括O 型、A 型、C 型、亚洲I 型以及南非1～3 型[4]。目前，FMDV 在我国以O 型和A 型流行为主，不同血清型间无交叉免疫保护[5]。PPR 是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一种急性接触性传染病，山羊、绵羊和其他野生小反刍动物对其均易感[6]，其中山羊对其高度易感，而幼龄山羊以及哺乳期山羊易感程度更高，发病率可达80%～90%，病死率可达50%～100%[7-9]。我国对FMD 和PPR 的综合防控措施以扑杀和免疫为主，在《国家动物疫病强制免疫指导意见（2022—2025年）》中，二者均被列为强制免疫疫病。在基层动物防疫过程中，FMD 和PPR 免疫工作主要集中于春、秋两季，分2 个阶段进行。春、秋两季是母羊配种及分娩的主要时期，完成两种疫苗免疫需耗时半个月至1 个月，严重影响着能繁母羊的配种工作，且因免疫工作量大、免疫过程繁琐、山羊应激大等问题，基层动物防疫员和养殖户对两种疫病免疫的接受程度低。

为探究一种适合基层同时开展山羊FMD 和PPR 免疫的方法和剂量，解决基层免疫工作量大、工作效率低、过程繁琐、周期较长以及接受程度低等问题，使山羊在免疫保护期内维持较高的抗体水平，尽量降低疫苗接种对羊群生产性能的影响，本研究将FMD和PPR疫苗进行一次性同步分点注射，通过比较不同免疫剂量疫苗接种后的抗体水平，寻找FMD 和PPR 疫苗一次性分点同步注射的最佳免疫剂量，以期为基层开展免疫工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 4 月龄左右、断奶2 周以上的山羊64 只，由云南鑫德顺畜牧有限公司自繁自养，且FMDV、PPRV 抗体和核酸检测均为阴性。

1.1.2 疫苗 FMD O 型、A 型二价灭活疫苗（OHM/02 株+AKT-Ⅲ株，批号2022049）、PPR活疫苗（Clonge9 株，批号2021034-2）和疫苗稀释液（批号100/2022014），均为新疆天康生物制药有限公司产品。

1.1.3 主要试剂及仪器 FMDV O 型竞争ELISA 抗体检测试剂盒（ 批号20092301）、FMDV A 型竞争ELISA 抗体检测试剂盒（批号20072206）、PPRV 阻断ELISA 抗体检测试剂盒（批号20172214），均购自青岛立见生物科技有限公司。酶标仪（型号ELX-800）、洗板机（型号50TS），为美国伯腾仪器有限公司产品；恒温培养箱（型号GSP-9080MBE），购自上海博迅实业有限公司医疗设备厂；移液器，为德国Epprndorf公司产品；电动离心机（型号TDL-80-28），购自上海安亭科学仪器厂。

1.1.4 试验场地及时间 本试验在云南省石林县云南鑫德顺畜牧有限公司进行，试验时间为2023年3—8 月。

1.2 免疫方案

本试验共分4 个组，每组试验山羊16 只。

第1 组：对照组（常规免疫组）。先在试验山羊左侧颈部肌肉注射FMD O 型、A 型二价灭活疫苗1.0 头份（1.0 mL），2 周后于左侧颈静脉采血检测FMDV 抗体，同时在右侧颈部皮下注射用疫苗稀释液稀释的PPR 活疫苗1.0 头份（1.0 mL）。

第2～4组为试验组，即1.0、1.2、1.5头份剂量组。于对照组山羊FMD 疫苗接种当日，在不同试验组山羊左侧颈部肌肉分别注射FMD O 型、A 型二价灭活疫苗1.0、1. 2、1.5 头份（1.0、1.2、1.5 mL），同时在右侧颈部皮下注射用疫苗稀释液稀释的PPR活疫苗1.0、1.2、1.5 头份（1.0、1.2、1.5 mL）。

1.3 试验观察

免疫注射结束后，对各组试验山羊观察48 h，主要观察体温、精神状态、饮食状况和排泄情况等有无异常。

1.4 血液样品采集

分别于各疫苗接种后14、28、42、56、70、100 和160 d，对各组山羊采血，分离血清后检测FMDV O 型、A 型和PPRV 抗体情况。

1.5 抗体检测

分别采用FMDV O 型、A 型竞争ELISA 抗体检测试剂盒以及PPRV 阻断ELISA 抗体检测试剂盒，对采集的血液样品进行检测。

1.6 数据分析

对检测结果数据用SPSS19 软件进行χ2检验，统计分析各组检测结果的差异性。P＞0.05 为差异无统计学意义，P≤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 试验山羊健康情况及免疫应激反应

所有试验山羊（64 只）在疫苗接种后48 h 内均未出现体温升高、精神沉郁、厌食情况，采食和排泄均正常，未出现免疫应激反应。接种后36 d，第4 组1 只山羊死亡，其余各组山羊在试验期间均未出现异常情况。

2.2 FMDV O 型抗体检测

结果（表1）显示：接种后14 d，各组山羊FMDV O 型抗体阳性率可达87.50%以上，分别为100%、87.50%、100%、93.75%；接种后28 d，各组山羊FMDV O 型抗体阳性率均达到100%，并维持至接种后56 d；接种后70 d，第2 组有1 只山羊抗体转阴；接种后100 d，第2 组有2 只山羊抗体转阴，第3 组有1 只山羊抗体转阴。经统计学分析，各组山羊在接种后14、28、42、56、70、100、160 d 之间的检测数据差异无统计学意义（χ2= 1，P＞0.05）。

表1 FMDV O 型抗体检测结果

2.3 FMDV A 型抗体检测

结果（表2）显示：接种后14 d，第1 组山羊FMDV A 型抗体阳性率为87.50%，其余各组均可达到100%，并维持至接种后100 d；接种后160 d，除第2 组抗体阳性率降至93.75%外，其余3 组均仍保持在100%。经统计学分析，各组山羊在接种后14、28、42、56、70、100、160 d 之间的检测数据差异无统计学意义（χ2= 1，P＞0.05）。

表2 FMDV A 型抗体检测结果

2.4 PPRV 抗体检测

结果（表3）显示，接种后14 d，各组山羊PPRV 抗体阳性率即达到100%，且一直保持至接种后160 d。经统计学分析，各组山羊在接种后14、28、42、56、70、100、160 d 之间的检测数据差异无统计学意义（χ2= 1，P＞0.05）。

表3 PPRV 抗体检测结果

3 讨论

FMD 和PPR 均属于我国一类动物疫病，严重危害我国养殖业的发展[10]，而预防接种是有效防控二者的重要措施之一[11-12]。本研究通过将不同免疫剂量的FMD 和PPR 疫苗一次性同步分点分组接种山羊，在接种后持续48 h 观察试验山羊的体温、精神状态、采食、排泄等体征，发现各组山羊在接种两种疫苗后均未表现出免疫应激反应，表明在试验免疫剂量范围内可开展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分点同步免疫接种工作。

本试验将不同接种方式和不同接种剂量的两种疫苗，分别采用常规免疫和一次性分点同步接种方式接种山羊，探究疫苗免疫后抗体阳性率变化情况，寻找FMD 和PPR 疫苗一次性分点同步注射的最佳免疫剂量。结果显示：FMD 和PPR 疫苗在接种后14、28、42、56、70、100、160 d 各组的抗体检测数据差异均无统计学意义（P＞0.05）。但是接种后14 d，1.0 头份剂量组（第2 组）山羊FMDV O 型抗体阳性率仅为87.50%，1.5 头份剂量组（第4 组）为93.75%，均低于1.2 头份剂量组（第3 组）的100%；对照组（第1 组）山羊FMDV A型免疫抗体阳性率为87.50%，低于其他免疫剂量试验组；接种后70 d，1.0 头份剂量组（第2 组）有1 只山羊FMDV O 型抗体转阴；接种后100 d，1.0 头份剂量组（第2 组）有2 只山羊FMDV O型抗体转阴，1.2 头份剂量组（第3 组）有1 只山羊FMDV O 型抗体转阴；接种后160 d，1.0 头份剂量组（第2 组）有1 只山羊FMDV A 型抗体转阴；其余不同剂量组山羊免疫抗体阳性率均保持在100%。分析以上数据发现，在免疫后14 d，1.5 头份剂量组FMDV O 型抗体阳性率反而没有1.2 头份剂量组高，推测这可能与山羊个体差异或接种大剂量疫苗抑制了机体前期的免疫反应有关，需进一步研究分析；采用一次性分点同步注射免疫方法以不同的疫苗剂量接种山羊后，在前期1.2 头份剂量组山羊免疫抗体阳性率较高，而后期1.5 头份剂量组抗体阳性率维持时间较长；常规免疫方法与一次性分点同步注射免疫方法在免疫抗体产生及维持时间上无差异。此外，各组PPRV 抗体阳性率均在接种后14 d 达到100%，并持续保持至接种后160 d，表明PPR 疫苗免疫源性好、免疫效期长。

本试验结果显示，将FMD 和PPR 疫苗以不同剂量一次性分点同步接种山羊，虽然接种后检测数据的差异无统计学意义，但前期FMD 疫苗1.2头份剂量组免疫抗体阳性率高于1.0 和1.5 头份剂量组。因此，基层在开展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分点同步免疫时，建议FMD疫苗使用1.2头份，PPR 疫苗使用1.0 头份，且于接种后14 d 开展免疫效果监测为佳。