不同滤材对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响

张碧珊

（广州市药品检验所，广东 广州 510160）

盐酸小檗碱（Berberine Hydrochloride），CAS 号为633-65-8，为5,6-二氢-9,10-二甲氧苯并[g]-1,3-苯并二氧戊环[5,6-α]喹嗪盐酸盐二水合物，为黄色结晶性粉末，无臭。现行《中国药典》2020 年版收载的相关制剂有盐酸小檗碱胶囊和盐酸小檗碱片[1]。其中，盐酸小檗碱片作为抗菌药，临床上主要用于治疗胃肠炎和痢疾杆菌、大肠杆菌引起的肠道感染[2-3]。同时，盐酸小檗碱具有降低尿酸水平和缓解关节红肿热痛等症状的作用，临床上也常作为联合用药用于治疗痛风[4]。经查阅文献发现，盐酸小檗碱还有抑制炎症反应、抗氧化、抗内皮损伤、抗肿瘤、抗高血压、降血糖和降血脂等确切的药理作用[5]。

过滤是样品进行液相色谱分析前的主要处理手段之一，其目的在于：一是获得澄清液体，除去样品中不溶颗粒，以免堵塞液相色谱系统管路和液相色谱柱；二是避免因颗粒物引起摩擦，导致液相色谱基线的波动，造成系统重复性差；三是除去样品中的气泡，避免造成仪器压力波动和引入系统干扰，以确保样品测定的准确性。

目前，已有多篇文献研究报道，过滤材质对部分药物存在吸附作用。经查阅文献发现，滤膜对部分药物，包含利福平、阿司匹林、吡罗昔康、格列齐特、罗红霉素、阿奇霉素、非洛地平缓释片、克拉霉素片和黄芩苷等在内，均存在一定的吸附作用，严重影响样品测定结果的准确性和可靠性[6-9]。本文主要是考察双圈滤纸、Whatman 滤纸和滤膜（孔径0.8 μm）三种不同滤材对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响。

1 仪器与试剂

仪器：Agilent 1260 高效液相色谱仪，梅特勒XS105 DualRange 天平，Eppendorf Centrifuge 5810R 高速离心机，超声波清洗机。

试剂：盐酸小檗碱（来源：中检院，批号：110713-202015，含量：85.9%），盐酸小檗碱片（厂家A，来源：广东华南药业集团有限公司，批号：200602，规格：100 mg/片），盐酸小檗碱片（厂家B，来源：东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：2200511，规格：100 mg/片），盐酸小檗碱片（厂家C，来源：四川森科制药有限公司，批号：210202，规格：100 mg/片），超纯水，三乙胺和磷酸二氢钾购于广州化学试剂厂，庚烷磺酸钠购于上海安谱实验科技股份有限公司。

过滤材质：双圈定量滤纸[来源：通用电气生物科技（杭州）有限公司，型号：中速202，规格：12.5 cm，批号：16998173]（下文简称双圈滤纸）， Grade 2V 滤纸（来源：Whatman 公司，型号：Grade 2V 1202-185，规格：18.5 cm，孔径8 μm，批号：A10103604）（下文简称Whatman 滤纸），津腾滤膜（来源：津腾，型号：MICROPES 聚醚砜，规格：孔径0.8 μm）（下文简称滤膜0.8 μm）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

按照《中国药典》（2020 年版）盐酸小檗碱片含量测定方法，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为磷酸盐缓冲液[0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液和0.05 mol/L 庚烷磺酸钠溶液（1:1），含0.2%三乙胺，用磷酸调节pH 值至3.0]-乙腈（60:40），使用紫外检测器，检测波长263 nm，进样体积为20 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品约20 mg，置500 mL 容量瓶中，加沸水，立即超声处理5 分钟，放冷，加水稀释制成每1 mL中约含盐酸小檗碱40 μg的溶液，摇匀即得。

2.3 空白溶液

取沸水放冷，作为空白溶液。

2.4 供试品溶液的制备

取厂家A、厂家B、厂家C 的供试品各4 片，分别置1000 mL 容量瓶中，加沸水，立即超声处理30 分钟，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取50 mL，置500 mL 容量瓶中，加水稀释制成每1 mL 中约含盐酸小檗碱40 μg 的溶液，摇匀，作为厂家A 供试品溶液、厂家B 供试品溶液和厂家C 供试品溶液。

创新是企业成功的关键，企业经营的最佳策略就是抢在别人之前淘汰自己的产品，这种把创新与市场营销有机的结合就是创新营销观念，包括营销产品的创新、营销组织的创新和营销技术的创新，要做到这一点，市场营销者就必须随时保持思维模式的弹性，让自己成为新思维的开创者，创新营销的意义就在于先人一步，而不仅在于别人没有，一旦发现是一种新技术，新的需求，就要及时捕捉。

2.5 系统适用性试验

取2.2 和2.4 中对照品溶液和供试品溶液，分别进样20 μL，均满足《中国药典》（2020 年版）中盐酸小檗碱片含量测定的系统适用性要求：（1）对照品溶液和供试品溶液中盐酸小檗碱峰理论塔板数分别为15 439 和15 350（规定：应不低于3000）；（2）对照品溶液和供试品溶液中盐酸小檗碱峰与相邻杂质峰分离度分别为2.2和2.1（规定：应不低于1.5）。

2.6 专属性试验

取2.3 中空白溶液，分别使用滤膜（0.8 μm）、双圈滤纸和Whatman 滤纸滤过，分别弃去0 mL、10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL 和100 mL 的初滤液，取续滤液测定，记录盐酸小檗碱峰面积。结果显示，空白溶液通过不同滤材，所得续滤液，盐酸小檗碱含量测定结果均为0，对本次试验结果无干扰。

2.7 精密度试验

取2.2中对照品溶液，连续重复进样6 次，记录盐酸小檗碱峰面积，RSD（n=6）为0.1%。

2.8 重复性试验

取厂家A 的供试品按照2.4中供试品溶液的制备方法，平行配制6 份供试品溶液，离心，取上清液进样，记录盐酸小檗碱峰面积，RSD（n=6）为0.2%。

2.9 稳定性试验

取2.4中室温条件下保存的厂家A供试品溶液，离心，取上清液，分别在0 小时、1 小时、2 小时、4 小时、8小时和24 小时进样20 μL。结果显示，记录的盐酸小檗碱峰面积无明显变化，RSD（n=6）为0.1%，说明供试品溶液在24 小时内稳定，本次试验所有溶液均在24 小时内进样。

2.10 不同滤材对盐酸小檗碱对照品溶液的吸附作用

取2.2中对照品溶液，分别使用滤膜（0.8 μm）、双圈滤纸和Whatman 滤纸滤过，分别弃去0 mL、10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL和100 mL的初滤液，取续滤液测定，记录盐酸小檗碱峰面积。同时，取同一对照品溶液，离心，测定，记录盐酸小檗碱峰面积。按下列公式计算，得到不同滤材对盐酸小檗碱的吸附率，结果见图1。

图1 不同滤材对盐酸小檗碱的吸附率结果

式中，A 为对照品溶液，经离心处理后，记录所得盐酸小檗碱峰面积；B 为对照品溶液，经不同滤材过滤后，取续滤液，记录所得盐酸小檗碱峰面积。

2.11 不同滤材对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响

取2.2中对照品溶液，进样20 μL，记录盐酸小檗碱峰面积，计算得出盐酸小檗碱的校正因子（以浓度除以峰面积计算所得）。取2.4中厂家A 供试品溶液、厂家B 供试品溶液和厂家C 供试品溶液，分别使用离心、滤膜（0.8 μm）过滤、双圈滤纸过滤和Whatman 滤纸过滤四种方式处理供试品溶液。其中使用滤膜（0.8 μm）、双圈滤纸和Whatman 滤纸过滤时，分别弃去0 mL、10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL 和100 mL 的初滤液，取续滤液直接测定，记录盐酸小檗碱峰面积，以外标百分比法，计算盐酸小檗碱片的含量测定结果。三个厂家的含量测定结果曲线图见图2。

图2 不同滤材对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响

3 讨论

3.1 耐用性考察

3.2 供试品溶液制备方法的选择

本次试验前期，分别采用两种溶液制备方法进行预试验，（1）取本品4 片，置1000 mL 容量瓶中，加水400 mL，置磁力搅拌器上（120 转/分钟），搅拌45 分钟，加水稀释至刻度，精密量取50 mL，置500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。（2）取本品4 片，置1000 mL容量瓶中，加沸水，立即超声处理30 分钟，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取50 mL，置500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。结果发现，不同厂家采用第一种溶液制备方法测得盐酸小檗碱含量结果均低于第二种，最终，试验拟定第二种供试品溶液制备方法。

3.3 滤材的选择

按《中国药典》（2020 年版）方法，盐酸小檗碱片含量测定供试品溶液需采用过滤的方式，除去供试品溶液中不溶颗粒以得到澄清溶液后，进行液相色谱分析。在日常检验中，在含量测定供试品溶液过滤时，首选定量滤纸进行过滤，然而，多次实验发现，滤纸对于盐酸小檗碱可能存在吸附作用，经常造成含量测定结果偏低甚至低于规定限度。因此，为了保证日常检验数据结果的准确性和可重现性，笔者拟定试验方案，以此验证不同滤材对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响。

过滤材质主要有滤纸和滤膜两种。滤纸按灰分含量区分为定性滤纸和定量滤纸（又称为无灰滤纸），按孔隙大小又可区分为快速滤纸（孔径80 ～120 μm）、中速滤纸（孔径30 ～50 μm）和慢速滤纸（1 ～3 μm）。滤膜按材质主要区分为亲水性滤膜和疏水性滤膜，孔径包含0.1 μm ～75 μm。

滤材初选实验室常用双圈滤纸、Whatman 滤纸和不同规格滤膜若干（孔径包含0.22 μm、0.45 μm 和0.8 μm），试验初期发现，0.22 μm 和0.45 μm 滤膜过滤溶液不到10 mL时，已无法继续过滤溶液，达不到试验设计方案要求。考虑到试验开展的可行性和成本，最终选择双圈滤纸、Whatman 滤纸和滤膜（0.8 μm），考察对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响。

3.4 结果分析

从图1 的三维柱形图中可得到以下结论：（1）三种不同滤材中，对盐酸小檗碱的吸附率（以最高计），Whatman 滤纸＞双圈滤纸＞滤膜（0.8 μm）。（2）Whatman滤纸和双圈滤纸对盐酸小檗碱的吸附率变化趋势相同，随着弃去初滤液体积增大，可降低吸附率。但当弃去初滤液体积高达100 mL 时，吸附率仍不符合相关要求，远大于2%。（3）滤膜（0.8 μm）对盐酸小檗碱的吸附率，基本维持在1%～2%之间，符合《中国药品检验标准操作规范》[10]中对滤膜的要求。

按2.11 试验，以离心结果作为参照，从图2 可知，三个厂家的滤膜（0.8 μm）结果基本与离心结果一致，含量测定结果可靠性较高。而双圈滤纸结果和Whatman滤纸结果，当弃去初滤液体积低于60 mL 时，含量测定结果均低于93.0%（《中国药典》要求含量测定限度为93.0%～107.0%）；当弃去初滤液体积达到100 mL 时，其含量测定结果仍低于离心结果。

3.5 后期展望

因实验室滤材资源所限，本次试验仅考察三种不同滤材，数据样本相对较少。同一滤材不同规格，对盐酸小檗碱片含量测定结果的影响，尚有待后续验证。过滤材质的材料、孔径、颗粒保留度等参数是否与吸附率存在一定的相关性，是后期试验的重要考察内容[10-14]。筛选出适合的滤材参数，可为今后盐酸小檗碱片含量测定滤材选择提供参考。

3.6 结论

综上所述，不同滤材对盐酸小檗碱的吸附率差异显著，导致使用不同滤材时，盐酸小檗碱片的含量测定结果差异较大，甚至会导致测定结果低于《中国药典》（2020年版）规定限度。日常检验中，盐酸小檗碱片含量测定项使用的滤材，建议应进行吸附率考察，选择合适的滤材处理样品，保证检验结果的准确性和可靠性。