平喘宁调节IRE-1α-XBP-1s信号轴干预哮喘大鼠气道炎症的机制研究*

彭 帅，蔡 旻，程 悦，查君君，丁鹤影，刘晓莹，方向明

（安徽中医药大学中医学院，安徽 合肥 230038）

支气管哮喘（bronchial asthma，BA），简称哮喘，是一种常见的慢性呼吸系统疾病[1]。目前BA影响着全球3.5亿人，是儿童中最常见的慢性疾病，影响到欧洲至少3 000万儿童和年轻人[2]。我国最近哮喘患病率呈现逐年上升的趋势。最新的流行病学调查结果表明，成人（≥20岁）哮喘患病率达到4.2%，患病人数增加到4 570万[3]。目前我国哮喘总体控制水平尚不理想，根据全球哮喘管理和预防策略（GINA）定义的哮喘控制水平分级，我国城区哮喘总体控制率仅为28.5%[4]。GINA估计到2025年，全球将会有4亿哮喘患者[5]。BA是由多种细胞（嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与引起气道慢性炎症的疾病[6]。这种慢性炎症通常与气道高反应性相关，通常出现广泛而多变的可逆性呼气气流受限，导致反复发作的喘息气促、胸闷和（或）咳嗽等症状[7]。随着病程的延长及诊治不及时、不彻底，气道可产生不可逆性缩窄和气道重塑[8-9]。

平喘宁是本课题组长期用于临床治疗寒哮的有效方剂，由射干麻黄汤与三子养亲汤化裁而成，具有温肺化痰、止咳平喘之功效。本研究通过建立大鼠寒哮动物模型，观察平喘宁对哮喘大鼠肺组织中肌醇依赖酶1α（IRE-1α）、剪接型X-盒结合蛋白1（XBP-1s）、核转录因子kappa B（NF-κB） p65、Hgsnat、Pdgfrb、Scara3表达的影响，探究平喘宁对卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘大鼠气道炎症的防治作用及机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 6周龄SPF级雄性大鼠105只，体质量（165±15）g，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK（鲁）2019-0003。大鼠自由采食进水，温度为24℃，湿度为70%，12 h光照/12 h黑暗模拟昼夜，适应性饲养1周。本实验符合动物伦理学要求，动物实验伦理审查批准编号为AHUCM-rats-2022046。

1.2 药物与试剂 平喘宁方药组成：麻黄9 g，细辛3 g，紫苏子6 g，杏仁9 g，陈皮6 g，法半夏9 g，黄芪9 g，防风6 g，地龙6 g，浙贝母9 g，太子参9 g。上述药材均购于安徽中医药大学国医堂，均经鉴定符合2020年版《中华人民共和国药典》规定。将中药混合放入干净的中药锅中，加入蒸馏水浸泡，第1次用水浸泡1 h，中药饮片质量（g）与水的体积（mL）比为1∶10，煮沸后，煎煮30 min过滤。第2次煎煮30 min，中药饮片质量（g）与水的体积（mL）比为1∶8，合并2次滤液，浓缩，待冷却后，密封装瓶于4 ℃冰箱中，以待备用。醋酸地塞米松片（规格：0.75 mg/片，批准文号：国药准字H31020793）由上海信谊药业有限公司生产；桂龙咳喘宁片（规格：0.41 g/片，批准文号：国药准字Z20050134）由江西药都仁和制药有限公司生产；卵清蛋白（批号：AP0028）购于美国Sigma公司；氢氧化铝（批号：20190514）购于上海国药集团化学试剂公司；二甲苯（批号：20220418）购于天津市凯通化学公司；无水乙醇（批号：20210508）、异丙醇（批号：20220403）均购于上海广诺化学科技公司；苏木素染液（批号：02162211）、醇溶伊红染液（批号：03092215）、中性树胶（批号：02162210）、柠檬酸盐修复液（批号：06252117）均购于安徽Ebiogo公司；白介素-5（IL-5）ELISA检测试剂盒（批号：20220620）、白介素-17（IL-17）ELISA检测试剂盒（批号：20220620）均购于武汉基因美科技公司；三氯甲烷（批号：20190227）均购于上海苏懿化学试剂公司；Trizol（批号：380706）购于美国Life technogies公司；DEPC-H2O（批号：2112G20）购于上海Generay Biotech公司；荧光染料（批号：05229413）购于上海Novoprotein公司；反转录试剂盒（批号：AL50947A）购于大连TaKaRa公司；PBS缓冲液粉末（批号：19022401）、GAPDH（批号：210040421）、山羊抗兔IgG（批号：202700514）、山羊抗小鼠IgG（批号：140193）均购于北京Zsbio公司；NF-κB p65抗体（批号：10017763）购于美国Proteintech公司；IRE-1α抗体（货号：ab37117）购于英国Abcam公司；XBP-1s抗体（货号：bs-1668R）购于北京Bioss公司。

1.3 主要仪器 ZT-12M型生物组织自动脱水机、YT-7FB型生物组织摊烤片机、YB-7LF型生物组织包埋机（湖北亚光医用电子技术有限公司）；RM2016型徕卡切片机、Leica 819型切片刀（德国Leica公司）；DHG-9070型电热恒温鼓风干燥箱、GNP-9080型隔水式恒温培养箱、DNP-9052BS-Ⅲ型电热恒温箱（上海三发科学仪器有限公司）；B004型黏附载玻片（安徽Ebiogo公司）；CX41型显微镜（日本OLYMPUS公司）；JW-3021HR 型高速冷冻离心机、JW3021HR 型离心机、JW-3021HR型高速台式冷冻离心机（安徽嘉文仪器设备有限公司）；RT-6000型酶标仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司）；UV-1800型紫外可见分光光度计、FA2004N型电子天平（上海菁华科技仪器有限公司）；GL-88B型漩涡混合器、LX300型低速迷你离心机、LX 300型常温微量离心机、TS-1000型水平摇床（海门市其林贝尔仪器制造公司）；K960型普通PCR仪（杭州晶格科学仪器有限公司）；PIKOREAL 96型荧光定量PCR仪、10212432C型PIKO Plate Illuminator（美国Thermo Scientific公司）；MINI-P25型微孔板迷你离心机（杭州奥盛仪器有限公司）；OD1000+型超微量分光光度计（南京五义科技有限公司）；IMS-20型自动制冰机（常熟市雪科电器有限公司）；EPS300型电泳仪、VE-180型电泳槽、VE-186转膜仪（上海Tanon公司）；Master-S30 UF）型纯水机（上海和泰仪器有限公司）；JJ-79-1型磁力加热搅拌器（常州市人和仪器厂）；JS-1070P型自动曝光仪（上海培清科技有限公司）。

1.4 造模与分组 将105只SD大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组、平喘宁低剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁高剂量组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组，每组15只，适应性喂养7 d后进行实验。根据寒哮大鼠模型的设计要求和方法进行造模[10]，即采用腹腔注射致敏及雾化吸入的方法复制哮喘模型。除正常组外，其余各组大鼠分别在实验的第1天和第7天腹腔注射1 mL 10% OVA（含OVA 10 mg，氢氧化铝10 mg），实验第15天开始将致敏大鼠置于雾化箱中，雾化吸入1% OVA，每次30 min，然后将致敏大鼠放入0～2 ℃可调节的寒冷箱中，1次/d，每次1 h，持续14 d。大鼠出现精神萎靡，活动度下降，反应不灵敏，身体震颤、蜷缩，毛色晦暗，饮食量下降，大便稀，频频点头，呼吸急促时伴有腹部收缩等现象提示造模成功。正常组大鼠参照上述方法，在致敏及激发时采用等体积生理盐水替换卵清蛋白混悬液进行注射及雾化。

1.5 实验给药 第21天开始给药，根据《药理实验方法学》[11]，各组大鼠用药量按人与动物的体表面积换算，成人与大鼠间的系数是6.25（以成人体质量70 kg计）。平喘宁低、中、高剂量组大鼠灌胃给予平喘宁水煎液，3.645、7.289、14.578 g/（kg·d）。桂龙咳喘宁组：将桂龙咳喘宁片研碎后溶解于生理盐水，按0.405 g/（kg·d）剂量灌胃。地塞米松组：将地塞米松药片研碎后，溶解于生理盐水，按0.405 mg/（kg·d）剂量灌胃。正常组、模型组大鼠灌胃给予等容积生理盐水，1次/d，连续4周。

1.6 实验标本采集 末次灌胃禁食24 h后，进行哮喘激发试验（正常组大鼠用生理盐水进行雾化，其余各组大鼠用10%卵清蛋白混悬液进行雾化）。在激发试验后2 h内，用2%巴比妥钠（20 mg/100 g）腹腔注射将大鼠麻醉，待大鼠完全麻醉后，固定大鼠，按“V”形切开大鼠腹腔，充分暴露气管，气管作一横行切口，插入气管插管，将右主支气管结扎，随后经气管插管用生理盐水10 mL分3次灌洗左肺后，回收支气管肺泡灌洗液（BALF），离心，弃上清液。然后取肺组织，分离左右肺，取右肺，用10%甲醛固定；将左肺置于冻存管内，放在-80 ℃箱中冻存，备用。

1.7 观察指标

1.7.1 观察肺组织病理学改变情况 将固定好的左肺依次进行脱水、石蜡包埋、切片等步骤，再进行HE染色，光镜下观察肺组织的病理学变化。

1.7.2 检测BALF中IL-5、IL-17水平 使用ELISA测定试剂盒测定BALF中IL-5和IL-17的水平，严格按照说明书进行操作。

1.7.3 Real-time PCR法检测肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量 剪取新鲜肺组织，称重后使用Trizol法提取组织总RNA，按逆转录试剂盒说明书进行cDNA合成。以cDNA为模板，应用Real-time PCR仪检测各组大鼠肺组织中IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量，以β-actin作为内参，采用2-△△Ct法进行分析。各检测指标引物见表1。

表1 引物序列

1.7.4 Western blotting法检测肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量 剪取肺组织并称重，加入RIPA细胞裂解液裂解。收集上清液，提取组织总蛋白。在收集的蛋白样品中按照1∶4加入5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液；沸水浴15 min，待样品冷却到室温，把蛋白样品上样到SDS-PAGE胶加样孔内；转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的洗涤液中，漂洗5 min，以洗去膜上的转膜液。加入封闭液，在摇床上缓慢摇动，室温封闭2 h。IRE-1α抗体属性为兔抗1∶2 000稀释，XBP-1s抗体属性为兔抗1∶1 000稀释，NF-κB p65抗体属性为鼠抗1∶2 000稀释。按照1∶20 000用二抗稀释液稀释辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，室温孵育2 h，使用ECL发光试剂盒检测蛋白表达水平。

1.8 统计学方法 运用SPSS 23.0统计软件进行统计学处理，计量资料符合正态分布者以（±s）来表示，不符合正态分布者用中位数（四分位数）表示。各组间计量资料比较服从正态分布和方差齐时，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验；数据不服从正态性分布或方差不齐时，采用Kruskal-Wallis H检验，进一步两两比较采用Nemenyi法检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

寒哮模型建立及治疗过程中，由于各种因素导致大鼠死亡，每组存活在9只以上，为便于统计每组抽取9只大鼠，剩余大鼠进行后续其他实验。

2.1 各组大鼠肺组织病理学改变情况 正常组大鼠肺组织结构清晰，支气管管腔结构完整且无明显增厚现象，肺泡结构完整且无融合情况发生，肺大泡呈正常形态，周围炎症细胞浸润未见明显异常，管腔内无黏液物质。模型组大鼠支气管壁明显增厚、黏膜褶皱增加，管腔狭窄并可见大量黏液物质，肺泡周围间质可见明显的渗出性水肿，肺泡塌陷严重，在血管附近区域和支气管周围区域出现大量炎症细胞浸润。与模型组比较，各给药组大鼠肺组织病理情况都有不同程度的缓解，其中平喘宁低、中剂量组大鼠支气管壁增厚减轻、褶皱减少，管腔内黏液物质减少，肺泡结构较完整，但肺泡和间质肿胀依然明显，血管及支气管周边区域炎症细胞浸润程度依然较为显著；与平喘宁低、中剂量组比较，平喘宁高剂量组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组大鼠肺部病理损伤有进一步的改善。（见图1）

图1 各组大鼠肺组织病理切片图 （HE，×200）

2.2 各组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比较 与正常组比较，模型组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平明显降低（P＜0.01），且平喘宁具有剂量依赖性；平喘宁低、中剂量组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01）；平喘宁高剂量组大鼠BALF中IL-5水平明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01），而IL-17水平与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（见表2）

表2 各组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比较 （±s，pg/mL）

表2 各组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平比较 （±s，pg/mL）

注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01；与桂龙咳喘宁组比较，cP＜0.01；与地塞米松组比较，dP＜0.01。

组别 n 给药剂量 IL-5 IL-17正常组 9 65.57±3.17 383.14±57.28模型组 9 115.24±2.73a 628.39±20.78a平喘宁低剂量组 9 3.645 g/（kg·d） 103.94±2.88a b c d 562.50±15.16a b c d平喘宁中剂量组 9 7.289 g/（kg·d） 96.84±3.09a b c d 527.80±9.29a b c d平喘宁高剂量组 9 14.578 g/（kg·d） 79.07±4.21a b c d 460.71±26.97a b桂龙咳喘宁组 9 0.405 g/（kg·d） 71.09±2.61a b 473.12±15.27a b地塞米松组 9 0.405 mg/（kg·d） 72.95±4.27a b 457.02±39.83a b

2.3 各组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量比较 与正常组比较，模型组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显升高（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显降低（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显降低（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显升高（P＜0.01），且平喘宁具有剂量依赖性；平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01）；平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.05或P＜0.01），而IRE-1α mRNA相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；平喘宁高剂量组大鼠肺组织IRE-1α mRNA相对表达量明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01），Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组（P＜0.01），而Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量与桂龙咳喘宁组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Scara3 mRNA与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（见表3）

表3 各组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量比较 （±s）

表3 各组大鼠肺组织IRE-1α mRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量比较 （±s）

注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01；与桂龙咳喘宁组比较，cP＜0.01；与地塞米松组比较，dP＜0.05，eP＜0.01。

组别 n 给药剂量 IRE-1α mRNA XBP-1s mRNA NF-κB p65 mRNA Hgsnat mRNA Pdgfrb mRNA Scara3 mRNA正常组 9 1.00±0.23 1.02±0.20 1.00±0.04 1.00±0.05 1.00±0.06 1.00±0.08模型组 9 1.86±0.71a 4.32±0.38a 1.94±0.12a 0.34±0.03a 0.15±0.02a 0.55±0.03a平喘宁低剂量组 9 3.645 g/（kg·d） 1.55±0.51a b c e 3.39±0.39a b c e 1.66±0.05a b c e 0.55±0.04a b c e 0.28±0.02a bc e 0.60±0.02abcd平喘宁中剂量组 9 7.289 g/（kg·d） 1.33±0.45a b 2.58±0.23a b c e 1.52±0.06a b c e 0.69±0.03a bc e 0.45±0.05a b c e 0.70±0.03abcd平喘宁高剂量组 9 14.578 g/（kg·d） 1.21±0.60a b c e 1.62±0.18a b 1.14±0.06a b 0.79±0.04a b e 0.69±0.12a b e 0.83±0.08a b桂龙咳喘宁组 9 0.405 g/（kg·d） 1.34±0.40a b 1.80±0.26a b 1.18±0.10a b 0.77±0.05a b 0.64±0.09a b 0.81±0.05a b地塞米松组 9 0.405 mg/（kg·d） 1.38±0.45a b 1.86±0.28a b 1.19±0.07a b 0.73±0.02a b 0.59±0.06a b 0.78±0.03a b

2.4 各组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量比较 与正常组比较，模型组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显降低（P＜0.01），且平喘宁具有剂量依赖性；平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.01）；平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组（P＜0.05或P＜0.01），而IRE-1α蛋白相对表达量明显高于桂龙咳喘宁组（P＜0.05），IRE-1α蛋白相对表达量与地塞米松组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；平喘宁高剂量组大鼠肺组织而IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（见表4、图2）

图2 各组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白表达Western blotting 图

表4 各组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量比较 （±s）

表4 各组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量比较 （±s）

注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01；与桂龙咳喘宁组比较，cP＜0.05，dP＜0.01；与地塞米松组比较，eP＜0.01。

组别 n 给药剂量 IRE-1α XBP-1s NF-κB p65正常组 9 0.19±0.05 0.14±0.03 0.12±0.03模型组 9 0.82±0.06a 0.81±0.06a 0.80±0.08a平喘宁低剂量组 9 3.645 g/（kg·d） 0.63±0.05a b c e 0.62±0.07a b c e 0.64±0.03a b c e平喘宁中剂量组 9 7.289 g/（kg·d） 0.49±0.06a b c 0.46±0.04a b c e 0.51±0.01a b c e平喘宁高剂量组 9 14.578 g/（kg·d） 0.38±0.06a b 0.34±0.04a b 0.35±0.04a b桂龙咳喘宁组 9 0.405 g/（kg·d） 0.38±0.08a b 0.36±0.02a b 0.34±0.06a b地塞米松组 9 0.405 mg/（kg·d） 0.40±0.03a b 0.34±0.04a b 0.34±0.02a b

3 讨 论

慢性气道炎症是支气管哮喘发病机制的基础。它由多种炎症细胞介导，主要包括Th2淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和中性粒细胞[12]。嗜酸性粒细胞已被确定为气道炎症的主要驱动因素，它会破坏气道上皮细胞并通过释放各种白三烯和生长因子来促进气道重塑[13]。此外，有证据[14]表明，嗜酸性粒细胞有助于气道高反应性。本研究HE染色结果显示，模型组大鼠肺组织存在大量炎症细胞的浸润，此外在OVA致敏的大鼠中发现促炎性细胞因子的上调。这些结果表明，在OVA诱导的支气管哮喘模型大鼠中成功发展了气道炎症。14.578 g/kg平喘宁可有效缓解OVA诱导的支气管周围炎症细胞浸润，并减少炎症细胞因子（IL-5、IL-17)表达。这些发现证明了平喘宁可减轻OVA诱导的大鼠气道炎症。

在黏蛋白1样蛋白质3基因（ORMDL3）高表达为主的遗传背景下，各种环境因素（真菌、尘螨等）参与了内质网应激的诱导。内质网应激通过不同方式调节气道炎症、凋亡、黏液分泌、气道高反应和气道重塑，最终导致哮喘的发生。内质网应激所致的中性粒细胞占优势的哮喘也可能依赖于NF-κB的激活[15]。内质网的蛋白质质量控制系统激活3种不同的信号通路，称为未折叠蛋白反应（UPR），主要用以恢复内质网稳态[16]。在UPR传感器中，IRE-1是从酵母到哺乳动物进化上最保守的蛋白质。IRE-1α是IRE-1的一种亚型，具有激酶和核糖核酸内切酶（RNase）活性。激活的IRE-1α可通过非常规剪接诱导剪接形式的XBP-1 mRNA进入成熟形态[17]，剪接后的XBP-1 mRNA被转译为强效转录因子XBP-1s。该因子可以刺激炎症细胞因子IL-6的产生，从而激活NF-κB进而产生炎症反应[18]。此外，有研究表明，IRE-1α还识别出广泛的mRNA作为底物，并诱导这些mRNA的降解。这一过程[19]被称为调控IRE1依赖性衰变（RIDD）。RIDD反应产生单链κ片段（其中Hgsnat、Pdgfrb、Scara3作为RIDD反应的靶基因），进而通过核转录因子NF-κB途径引起细胞炎症反应[20]。有研究表明，NF-κB信号可通过促进嗜酸性细胞炎症和Th2细胞分化，在支气管哮喘的发病机制中发挥重要作用[21]。此外，研究还发现严重未控制哮喘患者外周血单核细胞中的NF-κB信号通路持续激活[22]。据报道，抑制NF-κB信号可以减轻卵清蛋白诱导的大鼠呼吸道炎症和气道高反应性[23-24]。本研究发现平喘宁可显著下调OVA致敏大鼠肺组织中IRE-1α、XBP-1的表达，上调肺组织中Hgsnat、Pdgfrb、Scara3的表达，下调肺组织中NF-κB的活性。这可能与平喘宁的抗炎作用有关。

Th2细胞分泌的IL-5是支气管哮喘发展过程中的主要炎症细胞因子，IL-5是负责嗜酸性粒细胞分化、生长、激活、存活和向气道招募的最重要的生物因素[25]。其与嗜酸性粒细胞炎症之间的密切致病联系已通过动物和人类哮喘实验模型得到了清楚的证明[26]。现在越来越多的证据表明，Th17细胞及其相关细胞因子也参与过敏性哮喘的病理生理学，IL-17在哮喘患者的肺、痰、BALF和血清中表达水平升高，且AHR的严重程度与IL-17表达水平呈正相关[27-28]。此外，在过敏性肺病的小鼠模型中，缺乏IL-17A的小鼠表现出对抗原致敏的Th2反应降低，而缺乏IL-17RA的小鼠表现出现嗜酸性粒细胞募集减少[29-30]。本研究中OVA致敏大鼠中促炎性细胞因子IL-5、IL-17水平上调，而平喘宁治疗有效降低了OVA致敏大鼠中促炎性细胞因子IL-5、IL-17的水平，验证了平喘宁对OVA诱导的大鼠气道炎症的抗炎作用。

综上所述，平喘宁可通过降低促炎性细胞因子IL-5、IL-17的表达水平，减轻卵清蛋白诱导的大鼠呼吸道炎症。这些抗炎作用可能是通过下调卵清蛋白致敏大鼠IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65和上调来Hgsnat、Pdgfrb、Scara3表达来实现的。这些结果提示，平喘宁可通过调节IRE-1α-XBP-1s信号轴改善OVA诱导的支气管哮喘大鼠气道炎症损伤。