不同产地玉叶金花质量比对研究*

陈 林，杨岩涛，滕 艳，陈 俊，姜金生，何小兰，李立霞，周 倩

（1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.三金集团湖南三金制药有限责任公司，湖南 常德 415000）

玉叶金花Mussaenda pubescens Ait.f，又名白纸扇，茜草科植物，常野生于丘陵、山坡、灌丛、林缘、沟谷、山野、路旁等地，广泛分布于我国长江以南各省区，其中广东、广西、湖南、贵州等地较为常见。其药用部位为干燥茎和根，味甘、性凉，具有清凉消暑、清热疏风、抗炎等功效[1-2]。此外，玉叶金花对流感病毒也有一定功效[3]。其作为主要原材料，广泛应用于多种中成药，如玉叶解毒颗粒、玉叶金花清热片、玉叶清火片等。玉叶金花分布广泛，《中华人民共和国药典》（2020年版）未收录其标准。目前各地制定了中药材玉叶金花地方标准，如《广东省中药材标准》（2019年版）[4]、《贵州省中药材民族药材质量标准》（2019年版）[5]、《湖南省中药材标准》（2009年版）[6]、《广西壮族自治区壮药质量标准》（2008年版）[7]。本实验收集了全国不同地区玉叶金花样品，通过状性鉴别、薄层鉴别、显微鉴别、理化鉴别、含量测定等方法来考察各地玉叶金花药材质量情况。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-20AT型高效液相色谱仪，配备紫外可见光检测器，购自日本株式会社岛津制造所；BSA124S型电子天平（一级）购自赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；XSR205型电子天平（一级）购自梅特勒-托利多有限公司；JM-3002电子天平（三级）购自诸暨市超泽衡器设备有限公司；9960D型超声仪购自天津科贝尔光电技术有限责任公司；药典筛（编号2，孔径0.85 mm）购自绍兴市上虞圣超仪器设备有限公司；ZF-2型紫外分析仪购自上海市安亭电子仪器厂；BPG-9156A精密鼓风干燥箱购自上海一恒科学仪器有限公司；QE-500克一斤摇摆式高速万能粉碎机购自浙江屹立工贸有限公司；Medium Touch-S400UVF型纯水机购自上海和泰仪器有限公司；徕卡DM750显微镜购自徕卡显微系统（上海）有限公司。

1.2 材料 液相色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Ultimate AQ-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），购自月旭科技（上海）股份有限公司；绿原酸对照品（批号：110753-202119，含量96.3%）购自中国食品药品检定研究院；8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品（批号：111872-201703，含量90.3%）购自中国食品药品检定研究院；玉叶金花对照药材（批号：121404-201502）购自中国食品药品检定研究院；甲醇（批号：A22T0315，含量>99.9%，HPLC级）购自美国阿斯顿化学技术有限公司；乙腈（批号：DW26E121201，含量>99.9%，HPLC级）购自湖北弗顿科学技术有限公司（磷酸，含量≥85.0%，HPLC级）购自天津市科密欧化学试剂有限公司；无水乙醇（批号：20220012，AR，含量≥99.7%）购自湖南汇虹试剂有限公司；香草醛（批号：V8020371，AR，含量99%）购自上海麦克林生化科技有限公司；硫酸（批号：202105172，AR，含量95.0%～98.0%）购自湖南汇虹试剂有限公司；乙酸乙酯（批号：20211019，AR，≥99.5%）购自湖南汇虹试剂有限公司；三氯甲烷（批号：202106102，AR，99.0%）购自湖南汇虹试剂有限公司；环己烷（批号：160214，AR，≥99.5%）购自天津市康科德科技有限公司；三氯化铁（批号：20180418，AR）购自上海沃凯生物技术有心公司；铁氰化钾（批号：20211206，AR，≥99.5%）购自天津市光复科技发展有限公司；丙酮（批号：20141031，AR，≥99.5%）购自衡阳市凯信化工试剂股份有限公司；乙醇（批号：202116253，AR，≥95.0%）购自湖南汇虹试剂有限公司；二氯甲烷（批号：151201，AR，≥99.5%）购自天津市康科德科技有限公司；硅胶G板（批号：20211107）购自青岛海洋化工厂分厂。

玉叶金花样品1来源：湖南桃源；玉叶金花样品2来源：广西玉林；玉叶金花样品3来源：广东茂名。以上玉叶金花样品经三金集团湖南三金制药有限责任公司副主任中药师陈开义鉴定为正品。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 2022年7月20日按《湖南省中药材标准》检验 依次取玉叶金花样品1、样品2、样品3粉末各4 g，加水100 mL，煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至2 mL，加无水乙醇50 mL，搅匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按照薄层色谱法（2020年版《中华人民共和国药典》附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）10 ℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛乙醇溶液-10%硫酸乙醇溶液（1∶1）的混合溶液（临用新配），在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（见图1）样品1、样品2、样品3在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，符合《湖南省中药材标准》要求。

图1 玉叶金花按《湖南省中药材标准》检验薄层鉴别图

2.1.2 2022年7月21日按《贵州省中药材民族药材质量标准》（2019年版第一册）检验 依次取玉叶金花样品1、样品2、样品3粉末各0.5 g，加乙酸乙酯5 mL，超声处理20 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取玉叶金花对照药材0.5 g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法（2020年版《中华人民共和国药典》四部 通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上以三氯甲烷-甲醇-水（85∶15∶15）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105 ℃下加热10 min，置紫外灯光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（见图2）样品1、样品2、样品3在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点，不符合《贵州省中药材民族药材质量标准》要求。

图2 玉叶金花按《贵州省中药材民族药材质量标准》检验薄层鉴别图

2.1.3 2022年7月23日按《广东省中药材标准》第三册（2019年版）检验 依次取玉叶金花样品1、样品2、样品3粉末各4 g，加乙醇20 mL，加热回流30 min，趁热滤过，取续滤液作为供试液。另取玉叶金花对照药材4 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（2020年版《中华人民共和国药典》通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4～6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（4∶2∶1）为展开剂，展开,取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（见图3）样品1、样品2、样品3在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，符合《广东省中药材标准》要求。

图3玉叶金花按《广东省中药材标准》检验薄层鉴别图

2.2 显微鉴别 本品粉末为棕褐色。非腺毛众多，成簇或单个散在，2～9个细胞，有的胞腔含有棕色物。上表皮细胞与叶肉栅栏组织多连接，上表皮细胞侧面观排列整齐，叶肉栅栏组织为3～4列细胞。下表皮垂周壁微弯曲或较平直，气孔不定式，副卫细胞4～6个，螺纹导管多见。样品1、样品2、样品3根据《广东省中药材标准》显微鉴别，符合要求。（见图4～7）

图4 按《广东省中药材标准》第三册标准进行显微鉴别检验

图5 样品1 玉叶金花粉末显微鉴别图

图6 样品2 玉叶金花粉末显微鉴别图

图7 样品3 玉叶金花粉末显微鉴别图

2.3 理化鉴别 样品按《广西壮族自治区壮药质量标准》进行理化鉴别检验，发现样品1、样品2、样品3符合《广西壮族自治区壮药质量标准》部分理化鉴别项目。具体如下。

2.3.1 理化鉴别（1） 取样品1、样品2、样品3粗粉10 g，加水100 mL，浸渍12 h，滤过，取滤液1 mL，加1%三氯化铁乙醇液，显蓝绿色，见图8。结论：颜色反应，符合标准。

图8 理化鉴别（1）结果图

2.3.2 理化鉴别（2） 取“2.3.1”项滤液3 mL，平均分置3支试管中，一管加入碘化铋钾试液1～2滴，产生棕红色沉淀，见图9。结论：颜色反应，符合标准。

图9 理化鉴别（2）结果图

2.3.3 理化鉴别（3） 取本品粗粉1 g，加乙醚10 mL，浸渍过夜，滤过、挥散乙醚，残渣加冰醋酸少量溶解，再加醋酐－硫酸（19∶2）数滴，溶液显绿色，见图10。结论：颜色反应，符合标准。

图10 理化鉴别（3）结果图

2.4 玉叶金花性状对比 样品1与样品2、样品3叶面有稍微差别，考虑到地理因素，样品2、品样3地理距离较近，而样品1相距较远（＞1 000 km）。（见表1）

表1 样品1、样品2、样品3 性状对比

2.5 含量测定 参考玉叶金花中相关成分含量检测方法[8-12]，制定新绿原酸等总含量内部检测方法，测定样品1、样品2、样品3 新绿原酸（C16H18O9）、绿原酸（C16H18O9）、隐绿原酸（C16H18O9）、异绿原酸A（C25H24O12）、异绿原酸B（C25H24O12）、异绿原酸C（C25H24O12）的总量，相关的检测图谱见图11～13，检验结果见表2。

表2 检验结果

图11 样品1 含量检测图谱

图12 样品2 含量检测图谱

图13 样品3 含量检测图谱

2.6 总结 三地的玉叶金花在其薄层鉴别、理化鉴别、显微鉴别方面差别不大，外观性状有些微差别，湖南桃源玉叶金花中的新绿原酸（C16H18O9）、绿原酸（C16H18O9）、隐绿原酸（C16H18O9）、异绿原酸A（C25H24O12）、异绿原酸B（C25H24O12）、异绿原酸C（C25H24O12）的总量最低，而广西玉林和广东茂名玉叶金花中这些成分总含量较高，数值也比较接近。三地玉叶金花药材质量对比见表3。

表3 三地玉叶金花药材质量对比表

3 讨 论

玉叶金花作为广东、广西、湖南等地所产药材，使用广泛，在多个中成药中作为原药材使用。同时，两广地区也使用玉叶金花作为凉茶清凉解表、清暑利湿由于过度采伐，野生玉叶金花中药材数量减少，培育种植玉叶金花是一项重要工作[13]。本研究选用的样品都是野生品种，对不同产地的玉叶金花质量情况进行比对，为掌握不同产地玉叶金花质量控制研究提供了参考[14-15]。玉叶金花质量受多种情况因素影响，包括选种、生长环境、采收时间、干燥储存等。不同地区玉叶金花在叶面上有区别，两广地区玉叶金花中的新绿原酸等总含量比湖南地区高。