乳腺癌组织FHIT表达及与ER和PR表达的相关性分析

李林卿，庄文欣，李鹏程，孙学军

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。在我国，乳腺癌仅次于宫颈癌而居女性恶性肿瘤的第二位，其发病率占全身各种恶性肿瘤的7%~10%。近年来，乳腺癌的发病率有不断上升的趋势。脆性组氨酸三联体 （fragile histidine triad，FHIT） 基因是Ohta等[1]利用外显子捕获法在人类染色体3p14.2区域克隆的一种抑癌基因，跨越了3号染色体脆性位点FRA3B部位，后者是肿瘤染色体重排的部位，因此易导致纯合性或杂合性缺失及5’端CPG岛多甲基化等。

FHIT基因的异常改变见于多种肿瘤。Sozzi等[2]研究发现80%小细胞肺癌和40%的非小细胞肺癌存在FHIT基因转录异常；Vecchione等[3]检测发现FHIT表达缺失发生在宫颈癌变早期；Huiping等[4]观察到84%胃癌患者存在FHIT基因缺失，王萍等[5]也发现FHIT在胃癌组织中表达减弱或消失，提示FHIT与胃癌的发生、发展有关；Hao等[6]报道正常结肠上皮呈FHIT强表达，而FHIT低表达与分化程度降低及远处转移有关；另有研究发现FHIT在不典型增生、原位癌及浸润性食管鳞癌中的表达缺失或降低，认为FHIT基因表达缺失在食管癌的发生发展中有一定的作用[7]。FHIT在多种肿瘤组织或肿瘤细胞系中出现表达的减弱或缺失，使人们开始关注FHIT基因的功能及其与各种肿瘤发生发展的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择笔者所在医院2007-03~2009-11资料完整、诊断明确的乳腺癌根治术标本50例（浸润性导管癌48例，导管原位癌2例），分别取肿瘤组织和距离肿瘤5 cm以外的相对正常乳腺组织进行FHIT表达的对照分析。50例均经病理证实，所有患者术前均未经放、化疗。50例均为女性患者，年龄32~69岁，平均42岁。组织学分级：Ⅰ级21例，Ⅱ级17例，Ⅲ级12例；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期27例，Ⅲ期18例。肿瘤直径≤2 cm者28例，＞2 cm者22例。平均每例查检淋巴结13枚，有淋巴结转移者27例，无转移者23例。

1.2 主要试剂 兔抗人FHIT、PR单克隆抗体，鼠抗人ER单克隆抗体，SP法免疫组化检测试剂盒，DAB显色试剂盒，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 实验方法 所有常规石蜡包埋的组织标本，4 μm连续切片，进行免疫组化及常规HE染色。以试剂盒自带的阳性片为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判定 FHIT阳性反应定位于胞浆上，ER及PR阳性反应定位于胞核上，胞质染成棕黄色为阳性细胞。每张切片观察5个具有代表性的高倍视野，计数500个细胞中的阳性细胞。依据1996-05北京举办的“全国免疫组织化学技术及诊断标准化专题研讨会”标准，按阳性细胞所占比例数进行分级：≤25%为 （－），26%～50%为 （+），51%～74%为（++），≥75%为（+++）。

1.5 统计学分析 运用 SPSS12.0统计软件包作统计学处理。对相关资料进行卡方检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1 FHIT在乳腺癌和相对正常乳腺组织的表达检测发现FHIT表达在上皮细胞的胞浆内，表达物为棕黄色颗粒（图1、2）。用PBS代替一抗作阴性对照，未见FHIT的表达。相对正常乳腺组织50例中有44例FHIT阳性表达，总阳性率为88.0%；50例乳腺癌组织中有16例呈阳性表达，总阳性率为32.0%。对两组乳腺组织的表达阳性率进行分析，经卡方检验，有显著性差异（P<0.01），表明FHIT在乳腺癌组织中的表达阳性率明显低于相对正常乳腺组织。

2.2 乳腺癌和相对正常乳腺组织中FHIT表达与肿瘤临床病理特征的关系 见表1。

图1 乳腺浸润性导管癌中FHIT的表达 IHC×100

图2 乳腺黏液型腺癌组织中FHIT的表达 IHC×100

表1 FHIT表达与肿瘤临床病理特征的关系

2.3 乳腺癌组织中FHIT表达与ER、PR表达的相关性 检测发现ER、PR阳性细胞的细胞核呈棕黄色 （图3、4）。16例FHIT表达阳性乳腺癌组织中，ER表达阳性13例，阴性3例，阳性表达率为81.3%；34例FHIT表达阴性的乳腺癌组织中，ER表达阳性16例，阴性18例，阳性表达率为47.6%；FHIT与ER一致表达者共31例，占62.0%。通过线性相关性分析得出FHIT和ER在乳腺癌组织的表达相关（χ2=5.221，P<0.05，r=0.307）；FHIT表达阳性乳腺癌组织中，PR表达阳性12例，阴性4例，阳性表达率为75.0%；FHIT表达阴性的乳腺癌组织中，PR表达阳性13例，阴性21例，阳性表达率为38.2%；FHIT与PR一致表达者共33例，占66.0%。通过相关性分析得出FHIT表达与PR表达相关（χ2=6.127，P<0.05，r=0.330）。

图3 乳腺浸润性导管癌组织中ER的表达 IHC×200

图4 乳腺浸润性导管癌组织中PR的表达 IHC×400

3 讨 论

基因变异是肿瘤侵袭性生长的一个显著标志，若能将脆性位点上发生的断裂与基因的变异联系起来，则可将脆性位点与肿瘤联系起来。FHIT就是第一个将脆性位点和肿瘤联系起来的抑癌基因，并且FHIT基因异常是肿瘤发生和发展过程中的早期事件。FHIT基因在多种肿瘤中，包括食管癌、胃癌、结肠癌、肺癌、肝癌、宫颈癌中，均有改变，以缺失为主，包括外显子和（或）内含子的缺失，还可有外源序列的插入。

本研究采用免疫组化SP法检测50例乳腺癌及相对正常乳腺组织中FHIT的表达，结果显示，FHIT在乳腺癌组织中的阳性率明显低于其在相对正常乳腺组织中的阳性率，表明乳腺癌组织中存在FHIT表达缺失或降低，与邵霞等[8]的研究结果相似。提示由于FHIT表达降低，其抑癌作用减弱，失去了对乳腺上皮增生癌变的抑制作用，因此FHIT基因表达减少与乳腺癌的发生发展有关。FHIT基因缺失与肿瘤的大小、临床分期及组织学分级无关。本文结果显示，乳腺癌有淋巴结转移组的FHIT表达阳性率为44.4%，与无淋巴结转移组比较，有统计学差异（P＜0.05）。此结果与Yang等[9]的观点相似，即FHIT表达与乳腺癌的侵袭转移有关。

ER、PR的表达是乳腺癌重要的预后因素和预测激素治疗反应的参数。ER、PR的表达和乳腺癌组织学分级、临床病理分期有着密切关系，同时可指导临床应用内分泌治疗。本文结果表明，FHIT表达与ER、PR表达存在相关性（P＜0.05）。有研究表明，3p14.2区域的杂合性缺失与ER、PR表达缺失高度相关，与本文结果一致，提示在乳腺癌的进展和转移过程中，包括有FHIT基因的3p14.2区的某种特异基因改变或FHIT表达缺失与雌激素失调之间存在一定的联系。提示同时检测乳腺癌中FHIT基因与ER表达状况更有助于对乳腺癌的侵袭性和雌激素抵抗的预测。

综上所述，乳腺癌中FHIT表达明显降低，提示FHIT表达异常在乳腺癌的发生、发展中可能起着重要的作用，FHIT和ER、PR一样可用免疫组化方法检测，所以可以对乳腺癌高危人群的乳腺活检组织进行FHIT的检测，在对乳腺癌高危人群的筛选方面具有一定的意义。FHIT与ER、PR之间有相关性，联合检测对于乳腺癌诊断及恶性程度判定有一定的意义。

[1]Ohta M,Inoue H,Cotticelli MG,et al.The FHIT gene,spanning the chromosome 3p14.2 fragile site and renal carcinoma associatedt(3;8)break point is abnormal in digestive tract cancer[J].Cell,1996,84(4):587-597.

[2]Sozzi G,Veronese ML,Negrini M,et al.The FHIT gene at 3p14.2 is abnormal in lung cancer[J].Cell,1996,85(1):17-26.

[3]Vecchione A,Zanesi N,Trombetta G,et al.Gervical dysptasia,ploidy and human papillomavirus status correlate with loss of FHIT expression[J].Clin Cancer Res,2001,7(5):1306-1312.

[4]Huiping C,Kristjansdottir S,Bergthorsson JT,et al.High frequency of LOH,MSI and abnormal expression of FHIT in gastric cancer[J].Eur J Cancer,2002(38):728-735.

[5]王 萍,刘德纯,姚 敏,等.脆性组氨酸三联体基因蛋白表达与胃癌临床关系[J].临床消化病杂志,2002,14(2):57-59.

[6]Hao XP,Willis JE,Pretlow TG,et al.Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesions[J].Cancer Res,2000,60(1):18-21.

[7]Kitamura A,Yashima K,Okamoto E,et al.Reduced FHIT expression occurs in the early stage of esophageal tumor rigenesis:nocorrelation with p53 expression and apoptosis[J].Oncology,2001,61(3):205-211.

[8]邵 霞，王修珍.抑癌基因FHIT在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].苏州大学学报（医学版），2008，28(4)：614-616.

[9]Yong Q,Nakamura M,Nakamura Y,et al.Two-hit inactivation of FHIT by loss of heteroygosity and hypermethylation in breast cancer[J].Clinical Cancer Res,2002,8(9):2890-2893.