丙型肝炎病毒疫苗的研究进展

吴甦潜，张欣欣

1. 上海交通大学医学院瑞金临床医学院医学系，上海 200025； 2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科，上海 200025

自1989年发现丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)以来，目前全球仍缺乏有效的治疗性或预防性HCV疫苗。由于宿主免疫应答极为复杂，HCV基因组高度变异，免疫逃避方式多样；同时，理想的组织培养模型和动物感染模型有限，疫苗研制障碍重重。近年来，假病毒颗粒模型、通过克隆感染者肝细胞内HCV全基因组构建的组织培养模型、HCV感染小鼠模型[1]的出现为研究提供了较理想的模型。

HCV为带包膜的单股正链RNA病毒，其基因组在宿主信号肽酶和自身编码蛋白酶的作用下生成3种结构蛋白(核心蛋白、E1、E2)和7种非结构蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。其中E1和E2为包膜糖蛋白，是中和抗体的主要靶抗原。HCV侵入人体后能引发多种途径的保护性免疫；与此同时，HCV也通过多种途径实现免疫逃避。因此，清除HCV感染需大量强大的并能产生广谱交叉反应的T细胞和中和抗体。部分患者可通过天然免疫清除HCV急性感染[2]，但人类依靠自身防护无法建立针对HCV的长久免疫。目前，一系列临床和临床前期试验提示，人类有望获得有效的HCV疫苗[3]。

1 处于临床前期试验阶段的疫苗研究计划

1.1 HCV类病毒颗粒疫苗

动物实验表明，类病毒颗粒(virus-like particle, VLP)不仅能诱发针对HCV结构蛋白的特异性细胞和体液免疫应答[4]，联合HCV中和抗体[5]，引发细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)免疫应答[4,6]，还促使人树突细胞(dendritic cell，DC)成熟[7]。同时，能在其表面的AR3蛋白上形成特异性中和表位，这也是一大特征。小鼠实验结果显示，有一种HCV的VLP疫苗能同时诱发特异性细胞免疫和体液免疫应答[5]，但其效力及相关免疫应答的持久性仍需进一步研究。

1.2 重组蛋白疫苗

有一种重组蛋白疫苗在小鼠实验获得了理想的结果。此疫苗由重组的HCV 核心蛋白-NS3-NS4-NS5a-NS5B多聚蛋白配以MF59佐剂制成。小鼠实验表明，它可诱发针对核心蛋白和NS蛋白的广泛CD4+T细胞及CD8+T细胞免疫应答[8]。此外，研究人员设计了一种将重组蛋白疫苗与减毒病毒颗粒联用的免疫计划，小鼠实验表明其能诱导E1/E2/NS3～5相关的细胞免疫应答及E1/E2相关的体液免疫应答，且作用广泛而强烈[9]。

1.3 合成肽疫苗

动物实验表明，合成肽若同时表达特异性主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ类表位及T辅助细胞(T helper cell, Th细胞)表位，可诱发CD8+T细胞产生免疫应答[10]。表达Th细胞及CD8+T细胞表位的高免疫原性合成肽还可促进DC成熟[11]。但由于合成肽疫苗只能表达有限的线性表位，因此未能诱发广泛的免疫应答[12]。有一种免疫原同时包含了表达数个潜在交叉中和表位、Th细胞表位的合成肽以及作为佐剂的脂质啉(lipid moiety)[13]，小鼠实验显示其能诱导出一种针对HCV的广泛交叉中和抗体，但该抗体效价相对偏低。

2 处于临床试验阶段的HCV疫苗

目前已进入临床试验阶段的HCV候选疫苗共有12种(表1)，其中1种疫苗因Ⅱ期临床试验结果不理想而停止了研制。

2.1 预防性疫苗

理想的预防性HCV疫苗应能使机体对HCV及其所有准种产生强烈的细胞和体液免疫应答，以达到抵制变异HCV侵袭的目的。但是，研究人员面临三大难题：①人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)Ⅰ的限制；②每个机体的T细胞应答层次各异；③研制出的疫苗带有的E1/E2蛋白表位须与HCV内相应表位构象一致。目前进入临床试验阶段的预防性疫苗共有2种，皆为重组蛋白疫苗，但无一能完全克服以上3个障碍[12]。

2.1.1 HCV E1E2 疫苗

该疫苗含有HCV的E1、E2蛋白，并配以MF59(水包油乳剂)。针对HCV阴性受试者的Ⅰ期临床试验(随机、安慰剂对照)结果显示，实验组与对照组在不良反应方面无明显差异，实验组能测到针对E1、E2的抗体存在。证明此疫苗总体耐受性良好且安全，并可产生一定程度的体液免疫应答[14]。

2.1.2 HCV核心蛋白 ISCOMATRIX 疫苗

此疫苗由HCV核心蛋白配以ISCOMATRIX佐剂制成。30名健康受试者的Ⅰ期临床试验结果显示，其中29人能测得相关抗体的存在，但只有2人体内发现有CD8+T细胞应答。此外，部分受试者出现了局部红肿、疼痛等反应[15]。

2.2 治疗性疫苗

相关研究显示，治疗性疫苗将会成为继2011年2种新型抗HCV药物之后丙型肝炎标准治疗的又一辅助方法，为对标准疗法无效的患者带来福音。

2.2.1合成肽疫苗目前处于临床试验阶段的针对HCV的合成肽疫苗共有3种，迄今为止就结果而言，这些药物耐受性良好，但总体效力不容乐观。

2.2.1.1IC41这种疫苗含有5种合成肽(来自1型和2型HCV核心抗原及NS3和NS4蛋白上的4个保守序列)，另外还带有4个已知的HLA-2A抗原表位及3个杂合CD4+T细胞表位，再配以多聚左旋精氨酸(poly-L-arginine, PLA)。随机、对照的Ⅰ期临床试验针对128例HLA-2A阳性受试者开展，受试者每4周接受皮下注射该疫苗1次，共4次。结果显示，耐受性良好且安全，并可诱导CD4+和CD8+T细胞增殖[16]。此后，针对60例同样HLA-2A阳性且标准治疗无效或治疗后复发的慢性丙型肝炎患者的Ⅱ期临床试验(随机、双盲)结果显示，IC41可诱导受试者的CTL和Th细胞免疫应答，但十分微弱；同时，受试者均有持续毒血症[17]。

表1已进入临床试验阶段的HCV候选疫苗

Tab.1HCVvaccinecandidatesinclinicaltrials

*Trials registered with clinicalTrials.gov; # Barnes E, Folgori A, Capone S, Aston S, Meyer J, Gantlett K, Smith KE, Huddart R, Brown AC, Kurioka A, Humphreys I, Harrison GLA, Kelly C, Ammendola V, Colloca S, Naddeo M, Siani L, Traboni C, Cortese R, Nicosia A, Klenerman P. Phase I trials of a highly immunogenic and durable T-cell vaccine for hepatitis C virus based on novel, rare, adenoviral vectors. The International Liver CongressTM, 2011, 2104.

此后，研究人员完成了针对35例HLA-2A阳性的1型丙型肝炎患者以IC41与丙型肝炎标准治疗联用的Ⅱ期临床试验。受试者在接受标准治疗的24～28周内接受了6次IC41注射，此后又重复了1个完整的标准治疗疗程。这种三联疗法似乎无法降低丙型肝炎复发率，但可在持续产生病毒反应的受试者体内诱导出强大的HCV相关免疫应答[18]。

2.2.1.2HCV核心区多肽疫苗日本研究者设计了一种源自HCV核心蛋白中一段序列(35～44)的疫苗，该序列在HCV多种亚型的核蛋白中均高度保守。Ⅰ期临床试验结果显示，此疫苗耐受性良好。25例慢性丙型肝炎受试者中，有15例外周血中发现CTL应答[19]。要检验此疫苗的有效性仍需进一步研究和试验。

2.2.1.3病毒颗粒疫苗一种构建于病毒颗粒上的合成肽疫苗(virosome-formulated vaccine)已完成Ⅰ期临床试验(clinicalTrials.gov注册码为NCT00445419)。目前未公布相关资料。

2.2.2 重组蛋白疫苗

2.2.2.1GI-5005GI-5005由加热灭活的酿酒酵母细胞(Saccharomycescerevisiae)改造而成，混合了NS3和核心蛋白。这样的设计使其能诱导强烈的CD4+T细胞及细胞毒性CD8+T细胞应答。Ⅰb期临床试验(随机、双盲)针对15例慢性丙型肝炎受试者开展，结果显示，试验组外周血内病毒载量减少约1.4 lg，而对照组减少量<0.75 lg；同时，两组皆未发现明显不良反应。这表明受试者对GI-5005有良好耐受性，且能诱发明显的特异性T细胞免疫应答[12]。

目前正在开展的Ⅱ期临床试验将GI-5005与标准疗法联用的患者与单用标准疗法的患者作对比，就治疗48周后的报道来看，采用三联疗法的受试者产生了更好的应答。此外，研究人员还发现，采用三联疗法的患者体内丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)趋于正常，肝功能好转[20]；同时，此三联疗法在白细胞介素28(interleukin 28，IL-28)基因位点为TT的受试者中也有明显应答[21]，而通常此类患者对标准疗法的敏感度较低[22]。

2.2.2.2HCVE1E2/MF59疫苗此疫苗含有HCV的E1、E2蛋白，配以MF59。目前已完成Ⅰb期临床试验，针对群体为78例1a/1b型丙型肝炎患者，其中32例标准治疗无效，16例标准治疗有部分反应，30例治疗后复发。所有受试者在第4、8、12、24、28、32、36周接受肌内注射，结果表明安全性良好，能引起中等程度免疫应答。对那些以前通过标准治疗方案已出现抗病毒反应的患者，它能增加病毒清除率[23]。

2.2.2.3HCVE1蛋白疫苗此疫苗在Ⅱ期临床试验中能引起针对E1蛋白的细胞免疫应答，但由于在纤维化相关评分上较Ⅰ期结果未有改善而于2007年停止研究[12]。

2.2.3 病毒载体疫苗

2.2.3.1TG4040TG4040由改造过的安卡拉牛痘病毒(modified vaccinia Ankara, MVA)的减毒载体再次改造而成，能表达NS3、NS4、NS5B等多种抗原。临床前期试验显示，它能诱导小鼠机体产生分泌γ干扰素(interferon γ，IFN-γ)的T细胞及CTL[24]。在针对15例初治慢性丙型肝炎患者的Ⅰ期临床试验(开放标签、多中心)中，给予其中6例每周1次的TG4040注射，连续3周，余下9例除3周外在第6个月给予第4次注射。结果显示，TG4040有良好的耐受性且安全，在人体内早期诱导产生能分泌IFN-γ的T细胞且持续至第6个月。15例受试者中，8例病毒载量减少(-0.52 lg～-1.24 lg)[25]。目前，研究人员已完成与标准疗法联用的Ⅱ期临床试验，相关资料尚未公布。

2.2.3.2重组腺病毒HCV载体疫苗重组腺病毒HCV载体的优势是其可包含全套HCV基因，从而表达HCV所有蛋白；同时，它可诱导CD8+T细胞的强烈应答[26]。这些特点使其有了疫苗研制前景。目前，有一种疫苗进入Ⅰ期临床试验。临床前期试验表明其能诱发黑猩猩广泛而强烈的T细胞免疫，且能排除腺病毒本身引起的免疫应答所带来的干扰[26]。临床Ⅰ期试验结果表明，这种疫苗安全、耐受，且能诱发强烈而广泛的T细胞应答。

2.2.4 核酸疫苗

2.2.4.1ChronVac-C®此种疫苗由HCV NS3和NS4A基因在巨细胞病毒启动子的控制下转录，然后合成细胞毒性CD8+T细胞。临床前期小鼠实验结果表明，这些T细胞能在小鼠体内有效清除表达NS3和NS4A的肝细胞[27]。目前正在进行针对病毒载量< 800 000 IU/ml的1型丙型肝炎患者的Ⅰ/Ⅱa期临床试验，结果显示，此疫苗安全性尚可，无明显不良反应。在肌内注射完毕后，使用配有4个电极的设备(Medpulser DDS; Inovio, CA, US)给予受试者60 ms脉冲的活体电穿孔。此后该疫苗能使相当一部分患者体内病毒载量减少[28]。同时，研究人员正在进行ChronVac-C®与标准疗法联用的Ⅱ期临床试验，相关资料尚未公布。

2.2.4.2CIGB-230CIGB-230融合了HCV核心蛋白及能表达HCV结构蛋白的质粒。临床前期小鼠实验表明此疫苗不会引起中毒反应[29]，此后针对标准治疗无效患者进行的Ⅰ期临床试验在4周内给予受试者6次疫苗注射。结果显示，CIGB-230安全且有较好的耐受性，绝大部分受试者体内能测出相关中和抗体及HCV核心蛋白特异性T细胞应答。同时，此疫苗不影响HCV疫苗的免疫应答[30]，能保护肝组织，但受试者自接种后体内长期存在HCV RNA[31]。

3 展望

虽然HCV有多种途径逃避宿主免疫应答，长期存在于患者体内，且以极快的速度产生大量准种，使得免疫清除困难，但人类仍有可能建立一套强大、健全的细胞和体液免疫应答机制来消除、预防感染。理想的HCV疫苗应诱导人体产生极其广泛的免疫应答来达到清除HCV的目的。随着对HCV相关免疫应答机制的深入了解，有望研制出相应的治疗性和预防性疫苗。

目前进入临床试验阶段的HCV疫苗数量不多，还没有一种疫苗成功进入Ⅲ期或以上临床试验阶段；相关资料也显示这些疫苗的有效性相当有限。但随着针对不同水平而出现的各类疫苗研制计划，越来越多研制中的疫苗将会进入临床试验阶段。此外，治疗性疫苗与标准疗法联用的治疗方式极有可能提高疗效。

[1] Dorner M, Horwitz JA, Robbins JB, Barry WT, Feng Q, Mu K, Jones CT, Schoggins JW, Catanese MT, Burton DR, Law M, Rice CM, Ploss A. A genetically humanized mouse model for hepatitis C virus infection [J] . Nature, 2011, 474(7350): 208-211.

[2] Pestka JM, Zeisel MB, Blāser E, Schürmann P, Bartosch B, Cosset FL, Patel AH, Meisel H, Baumert J, Viazov S, Rispeter K, Blum HE, Roggendorf M, Baumert TF. Rapid induction of virus-neutralizing antibodies and viral clearance in a single-source outbreak of hepatitis C [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(14): 6025-6030.

[3] Houghton M. Prospects for prophylactic and therapeutic vaccines against the hepatitis C viruses [J] . Immunol Rev, 2011, 239(1): 99-108.

[4] Thammanichanond D, Moneer S, Yotnda P, Aitken C, Earnest-Silveira L, Jackson D, Hellard M, McCluskey J, Torresi J, Bharadwaj M. Fiber-modified recombinant adenoviral constructs encoding hepatitis C virus proteins induce potent HCV-specific T cell response [J] . Clin Immunol, 2008, 128(3): 329-339.

[5] Murata K, Lechmann M, Qiao M, Gunji T, Alter HJ, Liang TJ. Immunization with hepatitis C virus-like particles protects mice from recombinant hepatitis C virus-vaccinia infection [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2003, 100(11): 6753-6758.

[6] Elmowalid GA, Qiao M, Jeong SH, Borg BB, Baumert TF, Sapp RK, Hu Z, Murthy K, Liang TJ. Immunization with hepatitis C virus-like particles results in control of hepatitis C virus infection in chimpanzees [J] . Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(20): 8427-8432.

[7] Barth H, Ulsenheimer A, Pape GR, Diepolder HM, Hoffmann M, Neumann-Haefelin C, Thimme R, Henneke P, Klein R, Paranhos-Baccalà G, Depla E, Liang TJ, Blum HE, Baumert TF. Uptake and presentation of hepatitis C virus-like particles by human dendritic cells [J] . Blood, 2005, 105(9): 3605-3614.

[8] Vajdy M, Selby M, Medina-Selby A, Coit D, Hall J, Tandeske L, Chien D, Hu C, Rosa D, Singh M, Kazzaz J, Nguyen S, Coates S, Ng P, Abrignani S, Lin YL, Houghton M, O’Hagan DT. Hepatitis C virus polyprotein vaccine formulations capable of inducing broad antibody and cellular immune responses [J] . J Gen Virol, 2006, 87(Pt 8): 2253-2262.

[9] Lin Y, Kwon T, Polo J, Zhu YF, Coates S, Crawford K, Dong C, Wininger M, Hall J, Selby M, Coit D, Medina-Selby A, McCoin C, Ng P, Drane D, Chien D, Han J, Vajdy M, Houghton M. Induction of broad CD4+and CD8+T-cell responses and cross-neutralizing antibodies against hepatitis C virus by vaccination with Th1-adjuvanted polypeptides followed by defective alpha viral particles expressing envelope glycoproteins gpE1 and gpE2 and nonstructural proteins 3, 4, and 5 [J]. J Virol, 2008, 82(15): 7492-7503.

[10] Oseroff C, Sette A, Wentworth P, Celis E, Maewal A, Dahlberg C, Fikes J, Kubo RT, Chesnut RW, Grey HM, Alexander J. Pools of lipidated HTL-CTL constructs prime for multiple HBV and HCV CTL epitope responses [J] . Vaccine, 1998, 16(8): 823-833.

[11] Zeng W, Ghosh S, Lau YF, Brown LE, Jackson DC. Highly immunogenic and totally synthetic lipopeptides as self-adjuvanting immunocontraceptive vaccines [J]. J Immunol, 2002, 169(9): 4905-4912.

[12] Torresi J, Johnson D, Wedemeyer H. Progress in the development of preventive and therapeutic vaccines for hepatitis C virus [J] . J Hepatol, 2011, 54(6): 1273-1285.

[13] Torresi J, Stock OM, Fischer AE, Grollo L, Drummer H, Boo I, Zeng W, Earnest-Silveira L, Jackson DC. A self-adjuvanting multiepitope immunogen that induces a broadly cross-reactive antibody to hepatitis C virus [J]. Hepatology， 2007, 45(4): 911-920.

[14] Frey SE, Houghton M, Coates S, Abrignani S, Chien D, Rosa D, Pileri P, Ray R, Di Bisceglie AM, Rinella P, Hill H, Wolff MC, Schultze V, Han JH, Scharschmidt B, Belshe RB. Safety and immunogenicity of HCV E1E2 vaccine adjuvanted with MF59 administered to healthy adults [J]. Vaccine, 2010, 28(38): 6367-6373.

[15] Drane D, Maraskovsky E, Gibson R, Mitchell S, Barnden M, Moskwa A, Shaw D, Gervase B, Coates S, Houghton M, Basser R. Priming of CD4+and CD8+T cell responses using a HCV core ISCOMATRIX vaccine: a phase I study in healthy volunteers [J]. Hum Vaccin, 2009, 5(3): 151-157.

[16] Firbas C, Jilma B, Tauber E, Buerger V, Jelovcan S, Lingnau K, Buschle M, Frisch J, Klade CS. Immunogenicity and safety of a novel therapeutic hepatitis C virus (HCV) peptide vaccine: a randomized, placebo controlled trial for dose optimization in 128 healthy subjects [J]. Vaccine, 2006, 24(20): 4343-4353.

[17] Klade CS, Wedemeyer H, Berg T, Hinrichsen H, Cholewinska G, Zeuzem S, Blum H, Buschle M, Jelovcan S, Buerger V, Tauber E, Frisch J, Manns MP. Therapeutic vaccination of chronic hepatitis C nonresponder patients with the peptide vaccine IC41 [J]. Gastroenterology, 2008, 134(5): 1385-1395.

[18] Wedemeyer H, Schuller E, Schlaphoff V, Stauber RE, Wiegand J, Schiefke I, Firbas C, Jilma B, Thursz M, Zeuzem S, Hofmann WP, Hinrichsen H, Tauber E, Manns MP, Klade CS. Therapeutic vaccine IC41 as late add-on to standard treatment in patients with chronic hepatitis C [J] . Vaccine, 2009, 27(37): 5142-5151.

[19] Yutani S, Komatsu N, Shichijo S, Yoshida K, Takedatsu H, Itou M, Kuromatu R, Ide T, Tanaka M, Sata M, Yamada A, Itoh K. Phase I clinical study of a peptide vaccination for hepatitis C virus-infected patients with different human leukocyte antigen-class I-A alleles [J] . Cancer Sci, 2009, 100(10): 1935-1942.

[20] Jacobson IM, McHutchison JG, Boyer TD, Schiff ER, Everson GT, Pockros PJ, Chasen RM, Vierling JM, Lawitz EJ, Kugelmas M, Tsai NC, Shiffman ML, Buynak RJ, Sheikh AM, Armstrong B, Rodell TC, Apelian D. GI-5005 therapeutic vaccine plus PEG-IFN/ribavirin significantly improves virologic response and ALT normalization at end-of-treatment and improves SVR24 compared to PEG-IFN/ribavirin in genotype-1 chronic HCV patients [J] . J Hepatol, 2010, 52: S465-S466

[21] McHutchison JG, Thompson AJ, Jacobson IM, Boyer TD, Schiff ER, Everson GT, Vierling JM, Shiffman ML, Brown RS, Di Bisceglie AM, Gordon SC, Lee WM, Guo Z, King TH, Armstrong B, Rodell TC, Apelian D. Pharmacogenomic analysis reveals improved virologic response in all IL-28B genotypes in naive genotype 1 chronic HCV patients treated with GI-5005 therapeutic vaccine plus PEG-IFN/ribavirin [J] . J Hepatol, 2010, 52: S457.

[22] Sugiyama M, Tanaka Y, Nakanishi M, Mizokami M. Novel findings for the development of drug therapy for various liver diseases: Genetic variation in IL-28B is associated with response to the therapy for chronic hepatitis C [J] . J Pharmacol Sci, 2011, 115(3): 263-269.

[23] Colombatto P, Brunetto MR, Maina AM, Romagnoli V, CraxìA, Almasio P, Madonia S, Rumi MG, Colombo M, Fargion S, Ascione A, Pinzello G, Mondelli M, Muzzi A, Bianchi F, Barnaba V, Sarracino M, Rappuoli R, Rosa D, Montigiani S, Abrignani S, Houghton M, Bonino F. The candidate HCV E1E2MF59 vaccine is safe in chronic hepatitis C patients and accelerates the second phase viral decline upon primary response to pegylated interferon-2A/ribavirin therapy [J] . J Hepatol, 2009, 50: S22.

[24] Fournillier A, Gerossier E, Evlashev A, Schmitt D, Simon B, Chatel L, Martin P, Silvestre N, Balloul JM, Barry R, Inchauspé G. An accelerated vaccine schedule with a poly-antigenic hepatitis C virus MVA-based candidate vaccine induces potent, long lasting and in vivo cross-reactive T cell responses [J] . Vaccine, 2007, 25(42): 7339-7353.

[25] Habersetzer F, Honnet G, Bain C, Maynard-Muet M, Leroy V, Zarski JP, Feray C, Baumert TF, Bronowicki JP, Doffoēl M, Trépo C, Agathon D, Toh ML, Baudin M, Bonnefoy JY, Limacher JM, Inchauspé G. A poxvirus vaccine is safe, induces T-Cell responses, and decreases viral load in patients with chronic hepatitis C [J] . Gastroenterology, 2011, 141(3): 890-899.

[26] Steinmann D, Barth H, Gissler B, Schürmann P, Adah MI, Gerlach JT, Pape GR, Depla E, Jacobs D, Maertens G, Patel AH, Inchauspé G, Liang TJ, Blum HE, Baumert TF. Inhibition of hepatitis C virus-like particle binding to target cells by antiviral antibodies in acute and chronic hepatitis C [J] . J Virol, 2004, 78(17): 9030-9040.

[27] Ahlen G, Nystrom J, Pult I, Frelin L, Hultgren C, Sallberg M. In vivo clearance of hepatitis C virus nonstructural 3/4A-expressing hepatocytes by DNA vaccine-primed cytotoxic T lymphocytes [J] . J Infect Dis, 2005, 192(12): 2112-2116.

[28] Sallberg M, Frelin L, Diepolder H, Jung MC, Mathiesen I, Fons M, Hultcrantz R, Carlsson T, Weiland O. A first clinical trial of therapeutic vaccination using naked DNA delivered by in vivo electroportation shows antiviral effects in patients with chronic hepatitis C [J] . J Hepatol, 2009, 50: S18.

[29] Bacardí D, Amador-Caizares Y, Cosme K, Urquiza D, Suárez J, Marante J, Via A, Vázquez A, Concepción J, Pupo M, Aldana L, Soria Y, Romero J, Madrigal R, Martínez L, Hernández L, González I, Dueas-Carrera S. Toxicology and biodistribution study of CIGB-230, a DNA vaccine against hepatitis C virus [J]. Hum Exp Toxicol, 2009, 28(8): 479-491.

[30] Castellanos M, Cinza Z, Dorta Z, Veliz G, Vega H, Lorenzo I, Ojeda S, Dueas-Carrera S, Alvarez-Lajonchere L, Martínez G, Ferrer E, Limonta M, Linares M, Ruiz O, Acevedo B, Torres D, Márquez G, Herrera L, Arús E. Immunization with a DNA vaccine candidate in chronic hepatitis C patients is safe, well tolerated and does not impair immune response induction after anti-hepatitis B vaccination [J]. J Gene Med, 2010, 12(1): 107-116.

[31] Alvarez-Lajonchere L, Shoukry NH, Grá B, Amador-Caizares Y, Helle F, Bédard N, Guerra I, Drouin C, Dubuisson J, González-Horta EE, Martínez G, Marante J, Cinza Z, Castellanos M, Dueas-Carrera S. Immunogenicity of CIGB-230, a therapeutic DNA vaccine preparation, in HCV-chronically infected individuals in a phase I clinical trial [J]. J Viral Hepat, 2009, 16(3): 156-167.