L-选择素、异黏蛋白mRNA在胃癌中的表达及意义

马卫军，刘继微，石建芹，齐洁敏

(承德医学院，河北承德 067000)

基础医学

L-选择素、异黏蛋白mRNA在胃癌中的表达及意义

马卫军，刘继微，石建芹，齐洁敏

(承德医学院，河北承德 067000)

目的:在基因水平检测胃癌组织L-选择素和异黏蛋白(metadherin，MTDH)的表达情况，并分析二者与胃癌临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR法检测90例胃癌组织和55例癌旁正常组织L-选择素和MTDH mRNA的表达。结果:胃癌组织L-选择素和MTDH mRNA的相对表达量明显高于癌旁正常组织(P＜0.05)。L-选择素、MTDH mRNA的表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴转移、TNM分期有关(P＜0.05)，与性别、年龄无关(P＞0.05)。胃癌组织L-选择素、MTDH mRNA的表达呈正相关(r=0.369，P＜0.05)。结论:L-选择素和MTDH与胃癌的发生、发展密切相关，可作为评估恶性肿瘤转移潜能和预后的指标。

胃癌;L-选择素;异粘蛋白;逆转录-聚合酶链反应

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其浸润、转移严重影响了患者预后，如何控制胃癌的浸润、转移成为当今胃癌研究的重点和热点。胃癌的浸润、转移是癌细胞和宿主细胞之间相互作用的过程，包括细胞之间粘附力的改变，基底膜和细胞外基质的降解等。因此，作为细胞黏附分子的L-选择素以及能够调控该过程的异黏蛋白(MTDH)可能在胃癌的浸润、转移中发挥重要作用。为此，本研究采用RT-PCR法检测了L-选择素和MTDH在胃癌组织中的表达情况，探讨了二者在胃癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2012年10月至2014年1月承德市多家医院手术切除并经病理诊断确诊为胃癌的新鲜组织90例，癌灶＞10cm处癌旁新鲜正常组织55例，且患者临床资料完整，术前未行放、化疗。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂:逆转录反应试剂盒和DL1000 DNA Marker购于Takara公司，所有引物序列由上海Invitrogen公司合成。

1.2.2 总RNA的提取及目的片段的合成:按照Trizol试剂说明书抽提组织的总RNA，分光光度计检测RNA的浓度及纯度，并逆转录为cDNA。PCR引物序列:内参β-actin的上游引物:5’- CCTGTGGCATCCACGAAACT-3’，下游引物:5’-GAAGCATTTG- -CGGTGGACGAT-3’，片段长度为315bp;L-选择素上游引物:5’-CATCATGGAACCGACT GCT-3’，下游引物:5’-ATGGCCACTGCATGACCA-3’，片段长度为408bp;MTDH上游引物:5′-TGTTTCTGCTGGG CTACGG-3′，下游引物:5′-GTTCTCGCTCCGGAGATT-3′，片段长度为150bp。PCR反应条件为:94℃预变性2min，94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环;最后72℃延伸5min，4℃结束反应。

1.2.3 检测及分析:以β-actin为内参照，将PCR产物行2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统采集图像后分析mRNA的相对表达量:采用Quantity One 4.6.2软件分析各条带的灰度值，再分别计算L-选择素、MTDH条带与β-actin条带的灰度值之比，即为目的基因mRNA的相对表达量。

2 结果

2.1 L-选择素、MTDH mRNA的表达情况 胃癌组织L-选择素、MTDH mRNA的相对表达量均明显高于癌旁正常组织，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1:

表1 胃癌组织和癌旁正常组织L-选择素和MTDH mRNA的表达(±s)

表1 胃癌组织和癌旁正常组织L-选择素和MTDH mRNA的表达(±s)

项目和组织 n mRNA表达量 t P L-选择素 胃癌组织 90 0.509±0.187 10.353 ＜0.05癌旁正常组织 55 0.214±0.024 MTDH 胃癌组织 90 0.693±0.106 14.148 ＜0.05癌旁正常组织 55 0.489±0.024

2.2 L-选择素、MTDH mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系 L-选择素、MTDH mRNA的表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴转移、TNM分期有关(P＜0.05)，与性别、年龄无关(P＞0.05)。见表2:

表2 L-选择素和MTDH mRNA的表达与胃癌临床病理参数的关系

2.3 胃癌组织L-选择素、MTDH mRNA表达的相关性 胃癌组织L-选择素、MTDH mRNA的表达呈正相关(r=0.369，P＜0.05)。见表3:

表3 胃癌组织L-选择素与MTDH mRNA表达的相关性(n)

3 讨论

恶性肿瘤发生、发展的过程需要多因素参与，该过程主要包括细胞黏附、基质降解和肿瘤细胞转移3个步骤。在此过程中细胞黏附分子及能够促进肿瘤发展的相关蛋白发挥了重要作用，在基因水平对其检测能更进一步阐明它们在肿瘤发生、发展中的重要性。

选择素家族是细胞黏附分子家族成员之一，其中L-选择素在肿瘤细胞淋巴转移过程中具有关键作用。刘敏等[1]的研究采用体外黏附抑制实验证实，L-选择素可协助肝癌细胞与冰冻淋巴结切片的黏附，且该黏附可被L-选择素的抗体抑制;李坤等[2]的研究发现，大肠癌组织L-选择素的表达水平显著高于癌旁正常组织，有淋巴结转移者阳性率高于无淋巴结转移者。上述研究显示，L-选择素与癌细胞的淋巴结转移关系密切，但关于L-选择素在胃癌中的研究尚未见报道。本研究采用RT-PCR法进行研究发现，胃癌组织L-选择素mRNA的相对表达量明显高于癌旁正常组织，且在胃癌组织的表达与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴转移和TNM分期有关，说明L-选择素在胃癌的发生、发展中具有重要作用。

MTDH已被证实是一种原癌基因，功能主要是调节与肿瘤发生发展密切相关的信号途径，如PI3K/Akt、Wnt/β-catenin等，从而参与肿瘤的浸润、转移、血管再生等。有研究发现，MTDH蛋白在多种人类肿瘤中都呈过表达，如卵巢癌、膀胱癌等[3-4];另外，Song等[4]的研究发现，MTDH在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜癌组织中的表达率逐渐增高，且在子宫内膜癌中的表达与临床分期、浸润深度、淋巴结转移等密切相关。本研究在基因水平进行了检测，证实了胃癌组织MTDH mRNA的表达明显高于癌旁正常组织，并与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关。

本研究还发现，胃癌组织L-选择素、MTDH mRNA的表达呈正相关，说明二者在胃癌的发生、发展中可能起协同作用，可作为判断胃癌进展的分子标志。本研究提示，深入研究L-选择素、MTDH与胃癌临床病理特征的相关性，将为指导临床胃癌的治疗和评估预后提供新的理论依据，但L-选择素、MTDH在胃癌发生发展过程中具体的作用机制，有待进一步详细研究。

[1]刘敏，王莉芬，朱杰，等.L-选择蛋白可能介导小鼠肝癌HCa-F细胞经淋巴道转移的研究[J].解剖学报，2004，35(5):502-508.

[2]李坤，金春亭，张果.CCR7和L-选择素在大肠癌组织中的表达及意义[J].山东医药，2012，52(7):35-37.

[3]Li C, Liu J, Lu R, et al. AEG-1overexpression: a novel indicator for peritoneal dissemination and lymph node metastasis in epithelial ovarian cancers [J]. Int J Gynecol Cancer,2011,21(4): 602-608.

[4]周健，王增军，殷长军，等.膀胱移行细胞癌中MTDH和Ki-67的表达及临床意义[J].江苏医药，2012，38(11):1282-1284.

[5]Song H, Li C, Li R, et al. Prognostic significance of AEG-1 expression in colorectal carcinoma[J].Colorectal Dis, 2010, 25(10): 1201-1209.

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF L-SELECTIN AND MTDH IN GASTRIC CARCINOMA

MA Wei-jun, LIU Ji-wei, SHI Jian-qin, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To detect the expression of L-selectin and metadherin (MTDH) at genetic level in gastric carcinoma and analyze the relationship between their expression and clinical pathological characteristics of gastric carcinoma.Methods:The expression of L-selectin and MTDH mRNA in 90 cases gastric carcinoma and 55 cases corresponding nontumor normal tissues were detected by RT-PCR.Results:The relative expression of L-selectin and MTDH mRNA in gastric carcinoma were all obviously higher than that in corresponding non-tumor normal tissues (P＜0.05). The expression of L-selectin and MTDH mRNA in gastric carcinoma were related to differentiation degree, inf i ltration depth, lymph node metastasis and TNM stage (P＜0.05); but no related to age and sex (P＞0.05). In gastric carcinoma, the MTDH mRNA expression was positively related to L-selectin (P＜0.05).Conclusions:L-selectin and MTDH is closely related to development of gastric carcinoma, and can be acted as index for evaluating the metastatic potential of malignant tumor and prognosis.

Gastric carcinoma; L-selectin; MTDH; RT-PCR

R735.2

A

1004-6879(2014)05-0371-03

2014-04-14)