双探针显色原位杂交技术在乳腺癌HER2基因检测中的应用

张可星

（广西医科大学基础医学院 广西南宁 530021）

双探针显色原位杂交技术在乳腺癌HER2基因检测中的应用

张可星

（广西医科大学基础医学院 广西南宁 530021）

目的：通过双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的状态，评估双探针显色原位杂交技术的临床应用价值。方法：选取存档蜡块82例，分别用免疫组化及双探针显色原位杂交两种方法对Her-2基因及蛋白进行检测，并采用四格表卡方检验、配对卡方检验及Kappa检验作相关统计学分析。结果： 两种方法检测结果不存在显著性差异（P＞0.05）；就两种方法检测结果的一致性分析而言，两种方法所得出的检测结果存在较好的一致性（P＜0.05）。结论：双探针显色原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因扩增结果与免疫组化检测HER2蛋白过表达结果高度相似，可作为检测HER2基因状态的有效方法。

乳腺癌 双探针显色原位杂交技术 免疫组织化学法 HER2基因

世界卫生组织的数据显示：全世界每年约有140万妇女罹患乳腺癌,有40万妇女死于乳腺癌。在我国,乳腺癌已居女性恶性肿瘤死亡率的首位。在所有乳腺癌患者中,约有20～30%的患者会出现HER2（人类表皮生长因子受体2）阳性现象。目前美国FAD公认的有两种检测方法,分别为HER2蛋白的免疫组化（ICH）和HER2基因扩增的荧光原位杂交（FISH）,因ICH操作简单,价廉、快速等特点,被广泛运用［1］。显色原位杂交技术（CISH）分为两种单探针和双探针两种方法。本研究采用ICH和双探针CISH检测HER2蛋白表达和基因扩增的状态,根据2014年乳腺癌HER2检测指南,探讨双探针CISH技术检测乳腺癌HER2基因的优越性。

1 材料及方法

1.1 主要材料及试剂

82例乳腺癌组织存档蜡块及临床资料收集于广西医科大学附属肿瘤医院。HER2基因双探针CISH 试剂盒（德国ZytoVision公司）。免疫组化S-P试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 免疫组化染色及结果判定

免疫组化S-P法检测乳腺癌组织切片Her-2蛋白表达试验操作严格按照说明书进行。结果判定标准：光镜下观察阳性信号,镜下所见棕黄色颗粒为阳性反应物, 位于细胞膜。

1.2.2 显色原位杂交检测

①严格按照CISH操作步骤进行。组织玻片变性、脱蜡,乙醇梯度脱水, 98℃恒温处理也中浸泡15分钟,蒸馏水冲洗后加蛋白酶在湿盒中消化6分钟,随后的操作步骤按说明书进行。最后盖盖玻片后封片,空气中干燥后光镜下观察。

1.2.3 统计学分析方法

将两种方法得出的结果进行配对计数资料的卡方检验和Kappa检验,进行两组结果一致性的比较,检验水准α=0.05,P＜0.05时则说明差异有统计学意义。

表1 两种方法检测结果一致性分析

2 结果

82例乳腺癌标本的免疫组化检测结果显示：就两种方法独立的检测结果而言,两者之间不存在显著性差异（X2=0.672,P=0.512）,但免疫组化的方法阳性率稍高（68.29% VS 62.20%）；而对于两种方法的一致性分析结果发现,两种方法得出的检测结果具有较好的一致性（Kappa=0.705；P=0.001）,且存在统计学意义（见下表）。

3 讨论

目前,免疫组织化学染色方法是临床上最常用的检测乳腺癌中Her-2蛋白表达的方法［2］,本方法具有以下优势：操作简单、成本低廉、重复性好、对实验室条件及实验材料的要求低等。但是由于蛋白质在固定标本的过程中,极易变性或遭受不可逆性破坏,从而影响检测结果,以及不同试验技术人员的主观判断差异,都使该项技术难以用一项统计的标准来规定检验结果,因此在检测中不可避免的出现各种假阴性和假阳性［3］。

免疫杂交技术是分子遗传学常用技术,其不仅可以进行异常染色体的检测,同样可以用于检测目标基因的扩增情况,是目前国际上公认的基因表达检测的金标准；与蛋白表达的检测相比,基因的检测具有稳定性更高、准确性及重复性更好、灵敏度更好等优势［3］。本研究中对82例乳腺癌标本的检测,两种方法独立检测结果显示无统计学差异（X2=0.672,P=0.512）；而就两种方法检测结果的一致性来看,可以认为两者的检验结果基本一致（Kappa=0.705；P=0.001）,结果有统计学意义,与文章中报道的Kappa=0.640基本相符。

综上所述,免疫组化技术由于其操作简单、成本低廉的优势可以进行Her-2表达的初步检测,然而我们并不能拘泥于该方法的简单廉价,其假阴性和假阳性才是我们应该重视的问题,尤其是对于一些Her-2基因表达阴性的患者而言,为临床提供更加准确、可靠的信息,对患者进行有效的治疗、尽可能的降低其的痛苦及经济负担,促使免疫杂交技术登上现代医学的舞台。

［1］白燕峰，任国平，滕理送，等.双探针显色原位杂交技术检测HER2基因的应用［J］.临床与实验病理学杂志，2010，26（5）：627-9.

［3］显色原位杂交（CISH）技术在检测乳腺癌HER-2/neu 基因状态中的应用［J］.实验与检验医学，2010，28（6）：593-595.

R655

A

1674-2060（2016）03-0104-01