重症肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ水平及临床意义

黄小霏，林业辉，江润昌，周 杏，李国伟，高豆豆

重症肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ水平及临床意义

黄小霏，林业辉，江润昌，周 杏，李国伟，高豆豆

重症肺炎支原体肺炎；肺泡灌洗液；细胞因子；儿童

肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）感染作为小儿下呼吸道感染的一个不可忽视的问题，已受到临床越来越多的重视。MP感染可引起重症肺炎，如坏死性肺炎，肺大叶实变，中至大量胸腔积液，合并闭塞性支气管炎等表现［1］。目前认为，MP 感染除了对机体细胞直接产生损害外，其所引起的免疫反应在肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）的发生、发展过程中起重要作用。该研究通过检测重症MPP患者支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞介素-4（IL-4）及干扰素-γ（IFN-γ），研究Th1/Th2细胞免疫应答的状况及其临床意义，以期为MPP的诊治提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 观察组 （重症MPP组）：2014年8月—2016年6月笔者所在医院住院治疗的重症MPP患者 30例，年龄 1～11岁，平均 4.4岁；男 11例，女19例；均符合《诸福堂实用儿科学》MPP的诊断标准［2］并符合以下 1 条或以上［1］：（1）坏死性肺炎改变；（2）肺大叶实变伴中至大量胸腔积液；（3）影响呼吸功能或合并其他系统功能障碍；（4）合并闭塞性支气管炎；（5）合并全身炎症反应综合征；（6）起病急、症状重、肺大叶实变，对单一大环内酯类抗生素治疗反应不佳。以非MPP和支气管异物患者作为对照组：（1）非MPP组。30例均符合《诸福棠实用儿科学》肺炎诊断标准［2］，影像学提示有肺大叶实变，但病原学为非肺炎支原体；年龄10月至9岁，平均4.25岁；男17例，女13例。（2）支气管异物组。同期收治的确诊为支气管异物患者20例；年龄1.1～8岁，平均3.6岁；男 11例，女9例；病程在2 d以内；无发热，外周血白细胞计数及C反应蛋白均正常，并排除过敏性疾病及免疫相关性疾病。重症MPP组与非MPP组及支气管异物组年龄比较，差异无统计学意义。所有患者均未使用过肾上腺皮质激素及人血免疫球蛋白、胸腺素等免疫抑制药和免疫调节药。患者家属均知情同意，并报该院伦理委员会批准。

1.2 研究方法

1.2 ．1 标本的采集 （1）BALF的采集。所有患者行纤维支气管镜检查（治疗）。支气管肺泡灌洗按照中华医学会呼吸病学分会支气管肺泡灌洗液细胞学检测技术规范（草案）［3］中操作方法进行。用37℃灭菌生理盐水10～15 ml分3次灌洗患侧支气管肺段（观察组、对照组）或一侧支气管（对照组），收集肺泡灌洗液5 ml，将回收的灌洗液立即用双层无菌纱布过滤除去黏液，后装入塑料离心管内，在4℃下以1200 r/min离心10 min，取上清液－70℃储存，用作可溶性成分的检测。（2）血样的采集。所有病例均于入院第2天清晨采取空腹静脉血2 ml；重症MPP组及非MPP组患者于住院第7天清晨再次采血2 ml，以2500 r/min的速度离心5 min取血清，置－30℃保存待测。

1．2．2 IL－4 及 IFN－γ 的测定 采用双抗体夹心ELISA方法检测患者BALF和血清中IL－4及IFN－γ的浓度。人细胞因子ELISA试剂盒由美国ADL公司生产，具体步骤严格按试剂盒中的说明书进行。根据吸光度 （A）值及标准曲线方程算出IL－4和IFN－γ的含量。

1．3 统计学分析 采用SPSS 13．0软件包进行统计学分析。实验结果采用均值±标准差（x±s）表示，多组间均数的比较采用方差分析 （两两比较采用LSD），独立样本两组均数的比较采用配对t检验，用直线相关分析计算相关系数，判定各测定值之间的相关程度，p＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 重症MPP组、非MMP组和支气管异物组BALF中IL-4及IFN-γ浓度比较 重症MPP及非MMP组患者BALF中IL－4和IFN－γ浓度及IL－4/IFN－γ比值明显高于支气管异物组，差异有统计学意义（p＜0．01 或 0．05）。 重症 MPP 组与非 MMP 组患者 BALF中 IL－4和 IFN－γ浓度及 IL－4/IFN－γ比值比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。 见表1。

2．2 三组急性期血清中IL-4及IFN-γ浓度比较急性期重症MPP及非MMP组患者血清中 IL－4和IFN－γ浓度明显高于支气管异物组，差异有统计学意义 （p＜0．01 或 0．05）； 重症 MPP 血清中 IL－4 和IFN－γ浓度及IL－4/IFN－γ比值与非MPP组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。 见表2。

2.3 三组恢复期血清中IL-4及IFN-γ浓度比较恢复期重症MPP组患者血清中IL－4明显高于非MMP组及支气管异物组，差异有统计学意义 （p＜0．01 或 0．05）；重症 MPP 组患者血清中 IFN－γ 浓度及IL－4/IFN－γ比值与非MPP组及支气管异物组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。 见表3。

表1 三组BALF中IL-4及IFN-γ浓度比较（x±s）

表2 三组急性期血清中IL-4及IFN-γ浓度比较（x±s）

表3 三组恢复期血清中IL-4及IFN-γ浓度比较（x±s）

2.4 重症MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ浓度比较 重症MPP患者BALF中IL-4和IFN-γ水平高于血清标本，差异有统计学意义（p＜0.01）。 见表4。

表4 重症MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ浓度比较（x±s）

2.5 重症MPP患者BALF和血清中各检测指标的相关性分析 BALF与血清中IL-4和IFN-γ检测结果呈正相关，r分别为 0．56、0.61（p＜0．01）。

3 讨论

目前认为免疫学发病机制在MPP中起着重要作用，并以适应性免疫为主导。适应性免疫反应的扰乱即表现为免疫失衡，可能与疾病严重程度和肺外症状相关［4］。

IL-4和IFN-γ是多效的细胞因子，在细胞的固有免疫和适应性免疫方面具有强大的调节功能。IFN-γ主要由活化T细胞、NK细胞产生，其主要功能是激活巨噬细胞，抗病毒，促进MHC分子表达和抗原提呈，诱导Th1细胞分化，抑制Th2细胞分化［5，6］。 IL-4 由 Th2 细胞、嗜碱性粒细胞等产生，它能刺激B细胞增殖，参与Th2细胞分化，促进嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞发育，促进IgE生成。有研究显示MPP患者血清中IL-4水平明显升高，间接证实在儿童肺炎支原体肺炎急性期，存在Th2细胞占优势的情况［7］。由于Th1型细胞因子主要为炎症性细胞因子，而Th2型细胞因子则具有抗炎效应，Th0细胞极化Th2细胞并产生Th2类细胞因子具有保护作用。因此这种改变在一定程度上可能为机体的自身防御反应，以减轻MP所致的炎症反应，有利于机体清除抗原。但也有研究表明［8］MPP急性期患者血液IFN-γ表达水平明显升高，而IL-4水平无明显变化，表明MPP急性期免疫反应以Th1细胞介导的细胞免疫为主。研究结果不同，可能是试验方法导致不同，或者是样本数量偏小导致不同，这都有待进一步深入研究。

该研究显示急性期重症MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ水平较支气管异物组明显增高，提示有较强烈的免疫应答；而IL-4/IFN-γ比值＞1，提示存在Th1/Th2失衡，以Th2反应占优势。韩晓华等［9］认为在重症MPP患者诱导痰中IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值高于轻症MPP组，病情越重，增高越明显，提示MPP患者存在Thl/Th2失衡，Th2反应占优势。Woolard等［10］研究发现敲除IFN-γ的小鼠感染MP后发生严重肺损伤，进一步表明机体从Th1/Th2免疫应答平衡发展为Th2应答优势而导致肺损害加重。该研究显示非MPP组患者BALF和血清中IL-4和IFN-γ浓度也明显高于支气管异物组，差异有统计学意义，可能与感染病例相对于非感染病例整体上有较强烈的免疫应答有关。在恢复期，重症MPP组及非MPP组患者血清中IL-4和IFN-γ浓度较急性期均有下降，但重症MPP组患者血清中IL-4水平仍明显高于非MMP组及支气管异物组，差异有统计学意义，提示肺炎支原体感染机体后导致的以Th2反应占优势的免疫失衡，需要更长时间才得以恢复。

以上结论提示，在治疗MPP时，适当使用免疫调节剂，如IFN-γ、抗IL-4单抗等进行干预，可能为促进疾病恢复起到积极作用。

该研究发现重症MPP患者BALF与血清中IL-4及IFN-γ水平呈正相关，且BALF中浓度高于血清，提示BALF中细胞因子的检测更为敏感，更能反映局部免疫失衡的变化。既往的研究大多局限于对MPP患者外周血中T淋巴细胞亚群的检测［11］，对BALF中细胞因子等的研究国内报道很少。BALF由于直接来自下呼吸道，能直观地反映肺局部的生理及病理生理信息，因此，对重症MPP患者 BALF成分的检测，有助于理解疾病的发生机制、预测疾病的发展，并对今后的治疗提供新的手段和理论依据。

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R725.6

B

10.14172/j.issn1671-4008.2017.09.012

528000广东佛山，佛山市妇幼保健院儿科（黄小霏，林业辉，周杏，李国伟，高豆豆），检验科（江润昌）

［2017－01－22 收稿，2017－02－20 修回］ ［本文编辑：吴 蓉］