原发性高血压血管紧张素转化酶基因I/D多态性与厄贝沙坦降压疗效及血浆肾素血管紧张素-醛固酮系统水平的相关性

黄 红 李 燕 全胜麟 李宗禹 陈晓云 唐林青 沙艳梅 叶海琼 周 黎 黄顺算

(昆明理工大学附属医院 云南省第一人民医院内干科，云南 昆明 650032)

·心、脑血管及代谢性疾病·

原发性高血压血管紧张素转化酶基因I/D多态性与厄贝沙坦降压疗效及血浆肾素血管紧张素-醛固酮系统水平的相关性

黄 红 李 燕 全胜麟 李宗禹1陈晓云2唐林青1沙艳梅2叶海琼3周 黎 黄顺算1

(昆明理工大学附属医院 云南省第一人民医院内干科，云南 昆明 650032)

目的分析原发性高血压(EH)ACE基因I/D多态性与厄贝沙坦降压疗效及血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)水平的相关性。方法纳入云南汉族、白族及傣族EH患者450例，检测ACE基因多态性，根据基因型进行分组，所有患者给予厄贝沙坦治疗8 w后评估降压疗效，监测治疗前后血浆RAAS活性的变化。结果EH患者中ACE基因I/D多态性分布与种族无明显关系(P>0.05)；不同基因型中厄贝沙坦降压疗效、治疗前后血浆RAAS活性降低程度具有差异性，表现为DD型>ID型>Ⅱ型；采用Logistic回归分析治疗有效率的影响因素，血管紧张素Ⅱ活性改变与治疗有效率呈正相关(OR值1.038)。结论ACE I/D多态性可能是影响EH患者对厄贝沙坦降压反应的重要指标，通过调节血管紧张素Ⅱ活性形成。

原发性高血压；血管紧张素转化酶；肾素-血管紧张素-醛固酮系统

原发性高血压(EH)是最常见的心血管疾病之一，血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦作为一线抗高血压药物，通过选择性拮抗血管紧张素转换酶(AT)1受体，抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)而发挥降压作用，但往往存在降压疗效的个体差异，影响治疗的依从性。血管紧张素转化酶(ACE)基因能影响ACE活性，已成为研究RAAS公认的主要基因型，也是EH相关研究最重要的候选基因〔1〕。目前，对于降压药物疗效差异形成机制的研究，仅局限于基因多态性的研究，缺乏血浆RAAS水平的对照研究。本研究探讨EH患者ACE基因I/D多态性与血浆RAAS水平及ARB药物的降压疗效的关系。

1 资料与方法

1.1资料 纳入云南省第一人民医院门诊及住院的汉族、大理白族及德宏傣族初发EH患者450例，汉族、白族及傣族各150例，男259例，女191例，平均年龄(61.11±11.74)岁，均为1～2级高血压，排除继发性高血压、糖尿病和肝、肾病史及可能影响本试验的其他疾病者。所有患者未服用任何降压药物。

1.2ACE基因I/D多态性检测及分组 ①基因组DNA的提取：应用小剂量血液基因组DNA抽提试剂盒提取外周血白细胞DNA。制备的DNA样品于紫外分光光度计测定其260 nm、280 nm OD值，检测DNA的纯度和含量，并用琼脂糖凝胶电泳观察其完整性。②ACE基因型分析：采用聚合酶链反应(PCR)进行ACE基因I/D多态性，以外周血提取的DNA为模板，以人工合成的寡核苷酸为引物，PCR仪上进行扩增。上游引物：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，下游引物：5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′，扩增产物片段大小为490 bp和190 bp。PCR反应体系20 μl，94℃预变性5 min，94℃变性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35个循环，最后72℃延伸10 min，4℃保温。产物经2%的琼脂糖凝胶进行电泳分析，随机选取490 bp扩增片段和190 bp扩增片段进行测序，以确定扩增片段正确。③根据ACE基因I/D多态性检测结果将患者分为II基因型组、ID基因型组和DD基因型组。

1.3血样采集 分别抽取EH患者治疗前、厄贝沙坦治疗8 w后清晨空腹平卧位静脉血，应用放射免疫法测定血浆肾素、血管紧张素Ⅰ4℃、血管紧张素Ⅰ37℃、血管紧张素Ⅱ、醛固酮活性，试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。

1.4血压观察指标 ①主要指标试验开始前及治疗后2、4、6、8 w分别测量血压，根据治疗后8 w血压较治疗前下降程度来进行降压疗效判断。②疗效评价指标治疗前后血压值对比，根据中华人民共和国卫生部药物临床试验规范抗高血压药物的疗效判断标准分为显效、有效及无效，有效率=显效+有效。显效：舒张压(DBP)下降≥10 mmHg并降至正常或DBP未降至正常但下降≥20 mmHg。有效：DBP下降未达10 mmHg但已降至正常或下降10～19 mmHg。无效：未达以上标准。

1.5统计学方法 应用SPSS17.0软件进行χ2、秩和及t检验，Logistic回归分析相关影响因素。

2 结 果

2.1ACE基因I/D多态性结果 PCR产物经2%的琼脂糖凝胶进行电泳分析：只出现490 bp条带者为插入纯合型(II型)；只出现190 bp条带者为缺失纯合型(DD型)；出现490 bp和190 bp两条带者，则为插入/缺失杂合型(ID型)，见图1。云南汉族、傣族及白族ID、II、DD基因构成比无统计学差异(P>0.05)，见表1。

2.2各基因型组间治疗有效率比较 不同基因型组间高血压患者治疗效果有统计学差异(H=40.398，P<0.001)。II组、DD组与ID组间任意两组间比较有统计学差异，而且依据平均秩次值判断，治疗效果：DD组>ID组>II组，见表2。

1：II；2：ID；3：ID；4：II；5：II；6：ID；7：II；8：ID；9：ID；10：ID；11：ID；12：II；13：ID；14：II；15：II；16：ID；17：II；18：DD；19：ID；20：II图1 ACE基因I/D多态性

组别IDIIDDχ2值P值汉族55(367)76(507)19(126)02710992白族56(373)69(460)25(167)傣族54(360)72(480)24(160)

2.3各基因型组间治疗前后RAAS活性差值比较 方差分析结果显示：不同基因型组间接受治疗后肾素、血管紧张素Ⅰ 4℃、37℃、血管紧张素Ⅱ和醛固酮的下降值有统计学差异(P<0.05)。两两比较(调整检验水准为α=0.017)后均表现为DD组>ID组>II组。见表3。

表2 不同基因型组间高血压患者治疗效果比较〔n(%)〕

与ID组比较：1)P<0.05

表3 三种基因型组间治疗前后RAAS活性差值比较

2.4治疗前后血浆RAAS活性改变与厄贝沙坦降压有效性的关系 采用Logistic回归分析，以厄贝沙坦治疗后有效率为应变量，而以肾素、血管紧张素Ⅰ 4℃、血管紧张素Ⅰ 37℃、血管紧张素Ⅱ、醛固酮降低值为自变量，采用后退法分析，结果进入方程的自变量仅有血管紧张素Ⅱ下降值，回归系数为正值(β=0.038)，表示血管紧张素Ⅱ下降值与治疗的有效率呈正相关(SE=0.009,Waldχ2=17.910,P<0.001)。血管紧张素Ⅱ下降值增加1个单位，治疗结局为有效的可能性增加1.038倍(95%CI1.020～1.057)。

3 讨 论

RAAS的激活是EH发病的主要机制。药物治疗是EH主要治疗手段，ARB作为一线抗高血压药物往往存在着降压疗效的个体差异。厄贝沙坦作为ARB代表性药物，是血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，抑制血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，能特异性地拮抗AT1受体，选择性地阻断血管紧张素Ⅱ与AT1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用。ACE是RAAS的重要组成部分，在高血压发病中起着至关重要的作用〔2〕。目前大多数研究支持ACE基因I/D多态性是研究EH遗传基础的最有吸引力的候选基因，与EH发病具有相关性〔3～5〕。随着人类基因组计划的实施及药物基因组学研究的进展，ACE I/D多态性不仅与EH发病有关，还与EH降压药物治疗差异有关〔6,7〕，是导致药物疗效差异的重要原因。基因多态性是如何导致降压疗效的差异，与血浆RAAS活性变化有关吗？本研究发现EH患者中ACE基因I/D多态性分布与种族无明显关系；厄贝沙坦降压疗效在不同基因型中具有差异性，降压疗效DD型>ID型>II型，这与以往研究结果相符〔8～10〕。本研究显示EH患者不同基因型对ARB药物治疗反应性有差异，可能是通过调节血管紧张素Ⅱ活性形成。基因多态性是影响个体对药物治疗反应的重要因素，尤其是药物作用靶点的遗传多态性是药物在人体内处置过程和产生效应的决定因素，是药物代谢和效应个体差异的重要因素。个体遗传背景不同所致的降压药物疗效的差异，一直是困扰临床医师合理选择降压药物的难点之一，检测高血压患者ACE基因多态性，筛选出ARB治疗最合适的基因型，指导合理选择最佳降压治疗方案，进行个体化治疗，已成为一个新的挑战，也是个性化医疗的要求。

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R544.1

A

1005-9202(2017)24-6057-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.022

2013年度云南省教育厅科学研究基金项目(2013C211)；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资助(2013FB202)；云南省卫生和计划生育委员会内设研究机构老年病防治研究中心科研项目(2016NS201)

1 德宏州第二人民医院内一科 2 大理州人民医院干疗科

3 云南省第一人民医院内分泌科

李 燕(1961-)，女，硕士，主任医师，硕士生导师，主要从事老年病学及神经病学研究。

黄 红(1974-)，女，硕士，副主任医师，主要从事老年心血管及消化系统疾病研究。

〔2016-10-13修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)