巨噬细胞移动抑制因子在肾透明细胞癌组织中的表达与意义

孙连桃 肖伟利 (包头医学院医学技术学院，内蒙古 包头 04040)

巨噬细胞移动抑制因子在肾透明细胞癌组织中的表达与意义

孙连桃 肖伟利1(包头医学院医学技术学院，内蒙古 包头 014040)

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾透明细胞癌组织中的表达与意义。方法采用免疫组化法检测52例肾透明细胞癌组织及相应癌旁正常组织中MIF的表达，并分析其表达与临床病理特征的关系。结果肾透明细胞癌组织中MIF的阳性率(40/52)显著高于癌旁正常组织(8/52)(P<0.05)。MIF阳性表达率与分化程度无关(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期肾透明细胞癌组织中MIF阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期。有淋巴结转移者的MIF阳性率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。MIF表达与肿瘤直径密切相关(P<0.05)，与患者性别及年龄均无关(P>0.5)。结论MIF在肾透明细胞癌组织中高表达，并促进肾透明细胞癌的发生、发展，可成为肾癌诊断的判断指标。

肾透明细胞癌；巨噬细胞移动抑制因子

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，仅次于膀胱癌。其中肾透明细胞癌约占肾癌的85%，且发病率近年来呈上升趋势〔1〕。虽然随着医学影像技术不断发展，肾癌的早期诊断率有所提高，但仍有部分患者在诊断初期就发现转移病灶，使得5年生存率不足10%，而且患者行根除术后仍会复发，成为泌尿外科医师甚为棘手的问题〔1〕。近年研究发现巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在众多肿瘤组织中高表达，如乳腺癌、膀胱癌、肝癌、胃癌等，而且MIF与上述肿瘤的侵袭转移密切相关〔2～6〕，但有关其在肾透明细胞癌组织中的表达情况尚未见报道。本文旨在探讨MIF在肾透明细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院泌尿外科2014年3月至2017年3月病理科确诊为肾癌的癌组织石蜡标本52例，所有标本均为肾透明细胞癌。其中男34例，女18例，<60岁者24例，≥60岁者28例，年龄42～76岁，中位年龄62岁。肿瘤直径<3 mm的患者25例，肿瘤直径≥3 mm的患者27例。根据WHO(2016)推荐WHO/ISUP分级系统分级：Ⅰ～Ⅱ级合并为高分化，26例，Ⅲ级为中分化，15例，Ⅳ级为低分化，11例。根据美国癌症联合委员会〔AJCC(2002)〕肾癌临床分期标准分期：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ+Ⅳ23例。有淋巴结转移者10例，无淋巴结转移者42例。另取肾癌旁正常组织52例作为对照。所有患者术前均未接受任何化疗、放疗、靶向治疗及免疫治疗。

1.2免疫组化 标本先于二甲苯中脱蜡，再依次于95%、85%、75%无水乙醇中继续脱蜡。3%过氧化氢消除内源性过氧化物，并于柠檬酸盐抗原修复盒中修复。10%山羊血清室温下封闭30 min。一抗溶液，4℃过夜孵育，第2天二抗溶液室温下孵育，二氨基联苯胺(DAB)显色后冲洗。苏木精复染、1%盐酸分化，氨水反蓝。梯度乙醇中脱水，二甲苯中透明，中性树脂封片，并于显微镜下观察。以磷酸盐缓冲液(PBS)液代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判断 MIF蛋白以细胞质内出现棕黄色及棕褐色颗粒为阳性表达，由工作经验丰富的病理科医师采用双盲法阅片。在高倍镜的条件下随机的选择5个视野，观察细胞的染色情况。按细胞的染色程度评分：未染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。按阳性细胞所占百分率评分：无阳性细胞为0分，阳性细胞数<25%为1分，25%～50%为2分，≥50%为3分。每个视野阳性细胞所占百分率评分乘以染色评分即是该切片的总得分：0～1分表示阴性(-)，2～3分表示弱阳性(+)，4～6分表示阳性()，6分以上表示()。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料采用和比率进行统计学描述，并采用卡方检验或Fisher确切概率法比较组间MIF阳性表达率的差异，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1MIF在肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织中的表达MIF定位细胞质中，以棕黄色或棕褐色为阳性表达，肾透明细胞癌组织(40/52)中MIF的阳性率显著高于癌旁正常组织(8/52)(P<0.05)。见图1，表1。

2.2MIF与肾透明细胞癌病理分化程度、TNM分期、淋巴结转移的关系 MIF阳性表达率与分化程度无关(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期中MIF阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。有淋巴结转移的MIF阳性表达率高于无淋巴结转移(P<0.05)。见表2。

图1 MIF在肾透明细胞癌组织及癌旁正常组织中的表达(×200)

分组nMIF-+阳性率(%)χ2值P值癌旁正常组织52448153839619<0001癌组织5212407692

表2 MIF与肾透明细胞癌病理分化程度、TNM分期、淋巴结转移的关系(n)

2.3MIF与肾透明细胞癌临床病理特征的关系 MIF的阳性表达率与肿瘤直径密切相关(P<0.05)，MIF的阳性表达率与性别、年龄无关(P>0.05)。见表3。

表3 MIF与肾透明细胞癌其他临床病理特征的关系(n)

3 讨 论

MIF是1970年Bloom等在研究迟发型变态反应中发现的一种能够抑制巨噬细胞移动的多功能因子，MIF基因定位于人第22号染色体上，由于此基因片段中含有内分泌激素调控的序列，所以以往对于MIF的研究主要集中于免疫系统和内分泌系统相关疾病中。MIF主要来源于活化的T细胞，能够表达于包括肾小管上皮细胞、肝细胞、表皮细胞等，通过内分泌或者旁分泌促进IL-6、IL-8等炎症因子的分泌，进而引起各种炎症反应〔7〕。近些年研究还证实MIF与胰腺癌，肝癌，膀胱癌，胃癌等肿瘤的发生、发展密切相关〔2～6〕。而且采用ELISA法证实了肾透明细胞癌患者血清中MIF表达量显著高于健康对照组，并且发现RNA干扰肾癌细胞中MIF表达，能显著的降低细胞活力，细胞克隆形成能力及成瘤能力。进一步说明MIF在肾癌的发生、发展中起着重要作用。本研究结果表明肾癌组织(40/52)中MIF的阳性率显著高于癌旁正常组织(8/52)，与MIF在其他肿瘤中的表达趋势一致〔2-6〕。同时本实验还分析了MIF与肾癌临床病理参数的关系，结果发现MIF与肿瘤临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤大小呈正相关，与患者性别及年龄、组织分化程度无关。另外马宁等〔3〕研究不仅证实胃癌组织中MIF阳性表达高于瘤旁组织，还证实MIF与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关。陶斌胜等〔5〕研究亦证实肝癌组织中MIF表达显著高于癌旁正常组织。同时MIF还与肿瘤大小，有无远处转移呈正相关。从而说明随着肾癌增殖程度越强，肿瘤组织块越大，肿瘤恶性程度越高，MIF阳性率越高，提示高表达的MIF对肾透明细胞癌的增殖、恶性程度及淋巴结转移起着促进作用，MIF可能能够成为肾透明细胞癌诊断的有效指标。

另外有研究证实：(1)MIF通过与其受体CD74相互作用，激活细胞外调节蛋白激酶(ERK)，蛋白激酶(AKT)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路进而促进细胞的增殖〔8〕。将MIF/CD74信号轴抑制剂4-IPP作用于结肠癌细胞，能显著的抑制AMPK及AKT信号通路活性，并使癌细胞线粒体损伤并诱导细胞凋亡〔9〕。(2)通过提高胃癌细胞(BGC-823)及(MKN-28)中MIF的表达，能显著的激活MAPK信号通路，并下调CyclinD1及p53表达，上调Mcm2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达，进而促使癌细胞细胞周期G1期向S快速转换〔10〕。siRNA干扰乳腺癌细胞MCF-7中MIF表达，能显著的降低MAPK，p44/42MAPK磷酸化水平，进而下调血管内皮生长因子(VEGF-C)表达，最终抑制肿瘤细胞的增殖与血管生成〔11〕。(3)RNA干扰口腔鳞状细胞Tca8113，HN5及SCC25中MIF表达，能显著的下调MMP9表达，继而抑制癌细胞侵袭〔12〕。由此推测出MIF可能是通过与其受体CD74相互作用进而激活AKT、ERK及MAPK信号通路继而促使肾癌细胞的恶性增殖；也可能是MIF直接激活MAPK信号通路继而调控下游靶基因表达，促使肾癌细胞快速增殖或并发生侵袭转移；又或者是MIF能直接上调MMPs表达进而促使肾癌细胞发生侵袭转移。

综上所述，MIF的表达与肾透明细胞癌组织的TNM分期，淋巴结转移，肿瘤直径密切相关，与患者性别、年龄、肾透明细胞癌组织的分化程度无关。因此，MIF在肾透明细胞癌的发生、发展中可能起促进作用，但其具体作用机制仍需深入探讨。

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R737.11

A

1005-9202(2017)24-6113-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.24.047

内蒙古自治区自然科学基金(No.2014MS0807)

1 内蒙古自治区人民医院

孙连桃(1972-)，女，硕士，副教授，主要从事医学检验研究。

〔2017-09-03修回〕

(编辑 袁左鸣)