p27和Mcmp4在结直肠息肉及腺癌中的表达及其意义

张观宇，阚爽，高飞，许立莉，刘颐

（1.辽阳石化总医院病理科，辽宁　辽阳　111003；2.辽宁中医药大学附属第二医院病理科，辽宁　沈阳　110001）

结直肠息肉病变是大肠癌癌前病变类型，多种基因在结直肠癌的发生、发展过程中发挥分子作用[1]。本研究通过检测p27和Mcmp4在结直肠息肉病变中的表达，探讨其对结直肠癌癌前病变的风险提示作用以及在结直肠癌诊断、指导治疗的意义。

1　材料与方法

1.1材料选取2012年1月～2016年12月辽阳石化总医院结肠镜活检标本320例，分为4组：增生性息肉80例，低级别腺瘤性息肉80例，高级别腺瘤性息肉80例，结直肠腺癌80例。其中男182例，女138例；年龄32～79岁，平均年龄（56.9±13.6）岁。

1.2方法所有标本取检后立即置入4%中性甲醛溶液固定[2]，常规石蜡包埋，4μm连续切片，采用免疫组化SP二步法，分别进行p27和Mcmp4检测，DAB显色，苏木素复染。p27和Mcmp4鼠抗人单克隆抗体及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片做阳性对照。

1.3结果判定p27和Mcmp4均定位于细胞核，以细胞核呈现棕黄色或棕褐色为（+）[3]，观察切片中10个具有代表性的高倍视野，计数上皮细胞，阳性细胞数≥10%为（+），阳性细胞数＜10为（-）[3]。

1.4统计学方法所有数据均采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用χ2检验，等级分组资料用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1p27在增生性息肉、低级别腺瘤、高级别腺瘤、结直肠腺癌阳性率分别为 91.2%（73/80）、88.8%（71/80）、41.3%（33/80）、36.3%（29/80），增生性息肉和低级别腺瘤两组比较差异无统计学意义，低级别腺瘤和高级别腺瘤两组比较差异无统计学意义（P＜0.05），高级别腺瘤和腺癌两组比较差异无统计学意义，见表1。

2.2Mcmp4在增生性息肉、低级别腺瘤、高级别腺瘤、结直肠腺癌阳性率分别为 32.5%（26/80）、35%（28/80）、82.5%（66/80）、86.3%（69/80），增生性息肉和低级别腺瘤两组比较差异无统计学意义，低级别腺瘤和高级别腺瘤两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），高级别腺瘤和腺癌两组比较差异无统计学意义，见表2。

表1　p27在结直肠息肉和腺癌的表达Table 1 Expression of p27 in colorectal polyps and adenocarcinomas

表2　Mcmp4在结直肠息肉和腺癌的表达Table 2 Expression of Mcmp4 in colorectal polyps and denocarcinomas

2.3统计学分析显示，p27和Mcmp4在结直肠息肉和腺癌中的表达表现为负相关（P＜0.05）。

3　讨论

结直肠癌是人类常见的致死性疾病，在西方国家已位居恶性肿瘤的第三位[4]，每年新发病例约120万例。同样，结直肠癌也是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率呈上升趋势[5]，随着生活水平和饮食习惯的改变，我国结直肠癌的发病率和死亡率明显升高[6]。因此，多年来越来越多的研究积极深入结直肠癌发生的分子遗传学的探索，表观遗传学和肿瘤关系的研究日益增多[7-8]。

p27是近年来发现的一种广谱细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子（cyclin-dependent kinase inhibitors，CDKIs）[9]，该因子在细胞周期调控中起着关键作用，被认为属于抑癌基因家族[10]，一旦p27被过度降解，细胞增殖无限制进行，导致不典型增生和癌变。本研究发现，p27在增生性息肉和低级别异型增生息肉呈现高表达，而在高级别异型增生息肉和腺癌中低表达，且二者之间的差异具有统计学意义，提示p27在结直肠癌的发生、进展中发挥负调节作用，p27基因蛋白失活将导致细胞的异常增生，导致结直肠腺癌的发生。这与国内外学者对胃癌[11]、肺癌[12]、喉癌[3]等的研究一致。

微小染色体维持蛋白（MCM）是一组真核生物DNA复制的主要调控因子，在DNA复制的起始和延伸过程中具有重要作用，其表达水平与细胞增生程度呈正比。Mcmp4是MCM家族中的一员[3]，只在处于增殖活动周期的细胞表达，其不表达意味着细胞退出增殖周期成为成熟细胞。本实验中，Mcmp4的表达随着息肉上皮细胞异型程度的增加而明显增高，增生性息肉、低级别腺瘤与高级别腺瘤、腺癌之间的差别具有显著性，可以作为结直肠腺瘤预后评价的重要参考指标。

肿瘤的发生和进展是一个极其复杂的过程，在各种致癌因素的诱导下引起机体细胞一系列基因的改变[13]，最终导致癌的发生和进展。本研究还发现，p27和Mcmp4在结直肠息肉和腺癌中的表达表现为负相关（P＜0.05），二者的协同作用在结直肠息肉、腺瘤、腺癌的进展中发挥重要作用，两者负相关，使细胞进入活跃的增生期，从而失去正常的周期调控，共同参与结直肠癌的发生。因此，联合检测p27和Mcmp4在结直肠息肉病变中的表达，可以作为结直肠腺癌及异型增生的重要生物学标记物。

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