2016—2018年广西病死番鸭细小病毒感染检测

甘一波

（玉林市动物疫病预防控制中心，广西玉林 537000）

番鸭细小病毒（MDPV）为单股DNA病毒，大小约5 110 bp[1]，主要通过病鸭的粪便以及污染的饲料、饮水、用具、人员等接触传播，3周龄内雏番鸭对其较为易感，病死率可达20%～40%。MDPV最早于20世纪80年代中后期发现于我国福建和法国西部Brittany地区，现已在国内番鸭养殖场广泛流行。广西是我国番鸭养殖量较大的地区之一，年饲养量为 60.77万只，受MDPV影响较大。为了解广西地区番鸭MDPV感染情况，对广西部分番鸭养殖场送检的病死番鸭组织样品，通过PCR方法进行MDPV核酸检测。

1 材料与方法

1.1 病料样品

2016—2018年广西地区146个番鸭规模化养殖场送检的临床病死番鸭肝脏和脾脏组织样品362份，其中2016年49个养殖场送检98份，2017年58个养殖场送检116份，2018年74个养殖场送检148份。

1.2 试剂

核酸自动抽提试剂盒：购于天根公司；PCR扩增试剂盒：购自TaKaRa 公司 ；琼脂糖：BIOWEST公司产品；DL 2 000 bp DNA Marker：购自TaKaRa公司。

1.3 引物设计与合成

根据参考文献[2]设计1对MDPV引物（上游引物MDPV-1：5'-TGGAATCCGCAAAAGCGATA-3'；下游引物MDPV-2：5'-GAGATGTGTCCGGACTGGAA-3'），扩增片段大小为474 bp。引物均由InvitrogenTM公司合成。

1.4 PCR检测

PCR反应体系为25 μL，其中模板产物3 μL，上下游引物（20 mmol/L）各 0.25 μL，2×PCR Master MiX 12.5 μL，ddH2O 9 μL。扩增程序设计[2]：94 ℃变性2 min，然后进入94 ℃变性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，共进行35个循环，最后再经72 ℃延伸10 min后，于4 ℃结束反应。取PCR产物5 μL在1.0%琼脂凝胶上跑电泳，在阴阳性对照成立的情况下，观察检测样品结果。

2 结果与分析

2.1 总体检测情况

在凝胶成像系统下观察发现，阳性样品在474 bp目的片段上出现明显的条带，而阴性样品无目的条带（图1）。362份病死番鸭样品中，检出MDPV阳性37份，个体阳性检出率为10.22%（37/362），其中未免疫过MDPV疫苗的检出率为16.36%（35/214），已免疫苗的检出率为1.35%（2/148）。2016—2018年共从31个场次送检的样品中检出阳性，各年的场阳性检出率在10.20%～21.62%之间。具体结果见表1、表2。

图1 MDPV检测样品电泳图

表1 2016—2018年广西病死番鸭场群MDPV检出情况统计

表2 2016—2018年广西病死番鸭样品MDPV检出情况统计

2.2 不同日龄段检测情况

PCR检测发现，在362份病死番鸭组织样本中，1～20日龄的MDPV检出率为19.51%，>20～65日龄的MDPV检出率为3.60%，65日龄以上MDPV检出率为的1.15%，随着日龄的增加，MDPV检出率逐渐降低（表3）。

表3 各日龄段病死番鸭MDPV检出情况统计

2.3 不同月份检测情况

病死番鸭MDPV阳性样品中，3—5月的阳性检出率为15.46%（15/97），9—11月为11.49%（10/87），而 1—2月的检出率为9.68%（9/93），6—8月为3.53%（3/85）。可以看出，该地MDPV流行呈现一定的季节性特征，春、秋季节较高（表4）。

2.4 混合感染检测情况

病原学检测发现，37份MDPV阳性样品中，鸭病毒性肝炎-I型、鸭圆环病毒、鸭黄病毒以及禽多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的检出率分别为5.41%（2/37）、16.22%（6/37）、5.41%（2/37）以及2.70%（1/37）、48.65%（18/37）。剩余325份MDPV阴性样品中，鸭病毒性肝炎-I型、鸭圆环病毒、鸭黄病毒、禽多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌的检出率分别为2.77%（9/325）、19.08%（62/325）、4.62%（15/325）、10.77%（35/325）、32.62%（106/325）。

表4 不同月份病死番鸭 MDPV检出情况统计

3 讨论

3.1 流行形势

检测发现广西地区病死番鸭的MDPV个体阳性检出率为10.22%，说明该地存在一定的MDPV流行，这与谢丽基等[2]2012年对广西地区的180份番鸭病料进行检测发现MDPV阳性检出率为10%的结果基本相符。因为本次检测的是病死番鸭，所以阳性检出率有所偏高。从不同年份的检测结果来看，2017年的MDPV阳性检出率较2016年上升了0.46%，场阳性检出率上升了7.04%，2018年又较2017年上升了4.22%，场阳性检出率上升了4.38%，表明该地MDPV流行程度呈逐年上升趋势，需要引起重视，加强防控。

3.2 免疫重要性

检测发现，已免疫MDPV疫苗的病死番鸭MDPV检出率仅为1.35%，而未免疫的为16.36%，高出了15.01%，说明免疫对于控制MDPV感染十分重要。

3.3 感染日龄及易发季节

从各日龄段检出率可以发现，20日龄以上病死番鸭的MDPV检出率为2.53%，而20日龄以内的检出率为19.51%，说明20周龄以内幼鸭的易感性偏高，这与本病的流行特征基本相符[1]。3—5月和9—11月的MDPV阳性检出率与场阳性检出率较其他月份高，说明本病在广西地区有一定的季节性暴发特征，春、秋季节多发。这可能与当地特有的“回南天”气候以及秋天昼夜温差大有关。在临床实践中发现，“回南天”潮湿气候时保持垫料干燥，对地面潮湿处泼洒生石灰，秋季夜间加强保温，投喂保健药物，增强机体胃肠功能均可有效预防该病传播。

3.4 混合感染控制

谢丽基等[2]于2012年对广西地区的180份番鸭病料进行检测发现，DHV-I阳性检出率为1.1%，MDPV检出阳性率为10%，DuCV阳性检出率为5.6%，与本次混合感染的检测结果基本相同。混合感染检测发现，MDPV阳性和阴性样品中均检出了5种病毒和细菌病原，说明该地导致番鸭死亡的病原较为复杂。其中大肠杆菌检出率最高，这可能是与MDPV侵害机体的肠道后使肠黏膜出血，抵抗力下降有关[3]。在本次检测发现，MDPV阳性样品中的鸭圆环病毒检出率也较高，为16.22%。据施少华等[4]与Soike等[5]研究发现，鸭圆环病毒感染番鸭后，可使其法氏囊受到破坏，造成机体免疫抑制，所以是否存在该病毒感染后，导致MDPV混合感染情况上升尚待研究。其他疾病与MDPV的混合感染可能是导致临床上MDPV防治效果不佳的因素之一，因此仅靠临床诊断，难以较全面地了解病情，若采取盲目性治疗，有可能会加重病情，所以需要进行实验室检测。