2017年西藏拉萨市家禽禽流感抗体水平检测

元振杰，马弘财，拉巴次旦，次仁多吉，班 旦，格桑卓嘎，施建忠，曾江勇

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨 850009；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨 150069）

禽流感（avian influenza，AI）是由A型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）感染引起的多种家禽及野生鸟类的高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为须通报动物疫病，被我国列为一类动物疫病[1]。AIV属正黏病毒科，是一种RNA病毒。

根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同，将A型流感分为16个HA亚型（H1～H16）和9个NA亚型（N1～N9）[2]，其中H5和H7亚型可引发高致病性禽流感，严重影响禽类养殖业发展，H9亚型可引发低致病性禽流感，主要影响禽类的生产性能[3]。

我国从2017年秋季开始，在家禽免疫H5亚型禽流感疫苗的基础上，对全国家禽开展H7N9流感免疫[4]。为了解西藏拉萨市H5亚型禽流感免疫抗体水平，以及H7、H9亚型流感感染抗体水平，2017年8—9月，随机选择拉萨市规模养殖场、散养户、活禽交易市场共13个群体进行抽样检测，为探讨拉萨市家禽禽流感发病原因、制定防控措施提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

H5亚型禽流感血凝抑制抗原、H7亚型血凝抑制抗原、H9亚型血凝抑制抗原、1%鸡红细胞，以及单道和多道移液器、96孔微量反应板、微量振荡器、低速离心机、恒温培养箱等，均来自于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验室。

1.2 方法

1.2.1 样品采集与处理 在春季强制免疫接种H5亚型禽流感疫苗后，2017年8—9月在拉萨市东、南、西、北四个方位选择8个规模化养殖场（YZC），以及2个养鸡量较大的散养户（SYH）和3个大的活禽交易市场（HQSC）进行随机采样，共采集 1 041份家禽全血样品。全血样品自然凝固后，3 000 r/min离心，分离血清，置4 ℃冰箱待检。

1.2.2 检测方法 按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936—2003）[5]规定的操作方法，采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，在中国农业科学院哈尔滨兽医研究所重点实验室进行血清样品检测。

1.2.3 判定标准 按照GB/T18936—2003判定标准，个体HI抗体效价≥24，判定为个体阳性，免疫接种个体免疫合格；免疫抗体合格率≥70%，判定为群体免疫合格。

1.2.4 统计学处理 用SPSS软件进行卡方检验和Fisher精确检验，P＜0.01为差异极显著，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

本次共完成了1 041份血清样品的检测，H5、H7、H9亚型个体抗体阳性率分别为45.73%、21.13%、52.64%。按照判定标准，H5亚型免疫不合格，H7、H9亚型感染率较高。规模化养殖场的H7亚型抗体阳性率最高（29.92%），其次为活禽市场（27.59%），散养户最低（0）。活禽市场的H9亚型阳性率最高（79.31%），其次为规模化养殖场（62.90%），散养户最低（22.41%）。因当时国家尚未出台H7亚型流感强制免疫计划，所有养殖群体均未接种H7亚型疫苗，因此抗体阳性疑为自然感染。活禽市场的H5亚型抗体阳性率最高（78.16%），其次为规模化养殖场（62.29%），散养户最低（0）。上述结果表明规模化养殖场的H7亚型、活禽市场的H9亚型感染率较高，而活禽市场禽群的H5亚型免疫合格率较好。不同类型禽群H5、H7、H9亚型禽流感抗体检测结果见表1。

对于H5亚型，在所检测的8个养殖场中，仅有4个养殖场达到了免疫合格标准，群合格率为50%；2个散养户抗体阳性率均为0，疑为未采取免疫接种或接种方法不当；3个活禽市场中，有2个达到了免疫合格标准，群合格率为66.7%。对于H7亚型，有3个养殖场（37.5%）抗体阳性率在70%以上。对于H9亚型，有4个养殖场（50%）、3个活禽市场（100%）抗体阳性率在70%以上的。上述结果说明，H5亚型免疫合格率偏低，H7、H9亚型自然感染率较高。

通过检验表明，对于H9和H5亚型抗体阳性率，养殖场与散养户、活禽交易市场与散养户、养殖场与活禽市场之间的差异均极显著（P＜0.01）；对于H7亚型抗体阳性率，养殖场与散养户、活禽交易市场与散养户之间的差异极显著（P＜0.01），而养殖场与活禽交易市场之间的差异不显著（P＞0.05），详细情况见表2。

3 讨论

在本次H5亚型禽流感免疫抗体检测中，12个群体中仅有4个养殖场和2个活禽市场达到了免疫合格标准，2个散养户的群体免疫合格率甚至为0，说明拉萨市大部分养殖场和散养户H5亚型禽流感免疫效果较差，应进一步加大强制性免疫政策执行力度；对于外来鸡群也有部分达不到免疫合格标准，也要加强检疫工作，防止引入疫病。对于H7和H9亚型抗体检测，群体阳性率超过70%的，有3个H7亚型群体（33.33%）、4个H9亚型群体（40.00%），表明拉萨市禽群H7和H9亚型自然感染较为严重，需要进一步查明原因，及时采取相应防控措施，防止疫情发生。

表1 不同类型禽群H5、H7、H9亚型禽流感抗体检测结果及统计

表2 不同类型禽群H7、H9、H5亚型禽流感抗体检测结果对比

调查发现，拉萨市活禽市场的大部分鸡群来自山西、陕西、四川等地，只有很少一部分来自于拉萨本地。在采样调研时，活禽市场商户均称进行过H7、H9亚型禽流感免疫，但大部商户不能提供免疫证明，且我国2017年秋季才开始要求接种H7亚型流感疫苗，因此在试验统计过程中，对活禽市场样品均按照未接种过H9亚型禽流感疫苗来处理。因活禽市场的鸡群来源追溯较困难，所以无法进一步追查H7和H9亚型禽流感免疫情况，但仍不排除个别养殖场接种过H7和H9亚型禽流感的可能性。这也可能是导致检测中所有活禽市场H7和H9亚型抗体阳性率偏高的原因。

拉萨市免疫效果较差的原因主要有以下几个方面：第一，免疫注射费时费力、难度较大。由于拉萨地处高原气候，大部分鸡群主要采用散养或放养的饲养管理模式，因而免疫注射时间较长、难度较高，很容易发生漏免或无效免疫[8]。第二，缺乏预防免疫意识，部分养殖场免疫程序不科学。特别是小养殖场和散养户防疫意识十分淡薄[9]，加之受宗教文化影响，拉萨本地养殖户不愿意在家禽未生病的情况下使用疫苗，更不能接受因为接种疫苗而引起家禽的非正常死亡，为了不做免疫，部分养殖户甚至弄虚作假，极力隐瞒。第三，缺乏专业的技术指导。调研发现，少数抗体水平较高的养殖场，基本上是科研单位的下属养殖场或内地企业来藏投资的养殖场，鸡场选址严格，周围都有天然的免疫屏障，有专业的专职防疫技术人员做技术指导，防疫消毒措施严格规范，有专业的运输、贮存疫苗设备且有具体的操作规范和科学的免疫程序[10]。第四，疫苗运输和保存不当[11]。由于拉萨市部分地区离市区较远，部分养殖户没有按照规定的要求进行运输或贮藏，部分养殖户甚至在疫苗稀释后，分天、分次使用，不仅造成了疫苗的严重浪费，而且也达不到预期的免疫效果。

免疫接种是预防禽流感最有效的措施之一。而免疫效果与很多因素有关，如疫苗质量、生产商[12]、免疫程序等。此外，养殖过程中免不了给家禽投喂或注射其他药物，而药物[13]也是影响免疫效果的原因之一。因此，无论何种养殖方式都要选择质量相对较好的疫苗，同时配合科学、规范的免疫程序。此外，加强饲养管理和禽流感免疫抗体水平监测，以及对基层散养户相关禽流感防控知识宣传，可有效消除疾病发生隐患。

虽然本次检测随机抽取了部分养殖场，其结果并不能如实反映拉萨市的整体水平，但在一定程度上反映出了拉萨市疫苗免疫效果和所存在的一些问题，也为下一步开展H5和H7亚型免疫提供了一定的技术支持。

4 结论

本研究随机选择免疫过H5禽流感疫苗的8个规模养殖场、2个散养户、3个活禽交易市场，共13个群体，采集1 041份家禽血清样品进行H5、H7、H9亚型禽流感HI抗体检测，发现H5亚型禽流感免疫抗体合格率偏低，仅为45.73%，在散养户中甚至没有检测到抗体，表明该地的H5禽流感免疫效果较差；H7、H9亚型抗体阳性率偏高，分别为21.13%、52.64%；其中规模化养殖场（H7亚型、29.92%）和活禽市场的（H9亚型、79.31%）最高，表明拉萨市禽群的H7、H9亚型自然感染率普遍较高。调查结果提示，拉萨市禽群具有较高的H5、H7、H9亚型禽流感暴发风险。因此，拉萨市既要加强H5亚型禽流感的免疫，又要进一步查明H7、H9亚型疑似自然感染率较高的原因，及时采取相应防控措施，防止疫情发生。