CD44、CD133和NLR与胃癌病理特征的关系及对预后评估的意义

王绍荣 李 宏 唐春梅

胃癌(GC)为临床常见恶性肿瘤，占全球癌症发病率第4位，国内GC患者每年新增约679万人[1]。近年来GC诊治虽取得较大进步，但进展期GC患者的预后依然较差，据统计进展期GC患者5年生存率<10%[2]。GC患者缺乏典型临床表现，病情隐匿且无有效标志物，探寻新型分子标志物将有利于GC的早期诊治。相关研究证实肿瘤干细胞上标记蛋白表达水平随着肿瘤体积增大、浸润深度加深以及淋巴结转移数目增多而明显升高[3]，由此提示肿瘤干细胞标志物在肿瘤浸润以及转移中起到重要作用，或可作为GC患者病情严重程度及预后评估的有效指标。近期有研究发现CD44、CD133在胃间质瘤组织中呈强阳性表达[4]；此外文献报道中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)在GC预后评估中有一定价值[5]。但目前国内关于CD44、CD133和NLR与胃癌病理特征关系及在预后中的意义尚处于初步探索阶段，为此本文展开临床对照性研究，结果如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年6月至2019年6月本院收治的100例GC患者(记为GC组)的临床病理及随访资料，①纳入标准：临床资料完整；病理组织学检查明确诊断为GC；年龄>18岁；术前3个月未应用糖皮质激素、粒细胞集落刺激因子及性激素等药物治疗。②排除标准：合并重度心、肝、肾等重要脏器功能障碍；合并血液性疾病或其他影响炎性指标的疾病；存在严重精神疾病；妊娠期或哺乳期女性；合并其他恶性肿瘤；非原发性胃癌者。100例GC患者，男性58例、女性42例，年龄19～60岁，平均(52.25±3.02)岁，临床分期：Ⅰ期24例、Ⅱ期50例、Ⅲ期26例，腺癌47例、鳞癌53例，分化程度：低分化21例、中分化54例、高分化25例。收集GC患者石蜡包埋癌组织及其癌旁石蜡包埋组织，所有标本均经我院病理科进一步病理检验。另以同期本院诊治的35名慢性胃炎患者作为良性组，男性21例、女性14例，年龄20～58岁，平均(51.99±2.91)岁。良性组与GC组患者性别、年龄基线资料比较，差异不显著(P>0.05)，有可比性。

1.2 研究方法

(1)CD44、CD133免疫组化染色：组织切片脱蜡水化-消除内源性过氧化物酶活性-抗原修复-滴加一抗、二抗-DAB显色-染色-脱水-透明-封片；CD44、CD133免疫组化阳性结果判断[6]：细胞在细胞质着色(呈棕黄色)，半定量积分法判断染色强度，每份标本随机观察5个高倍视野取平均值，阳性细胞占比≤5%为0分，>5%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分，阳性细胞表达着色深度：不着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别对应0、1、2、3分，染色强度、着色深度两项积分相乘得分0～2分为阴性，3～4分为弱阳性，5～8分为中阳性，9～12分为强阳性，本研究中拟定≥3分为CD44或CD133阳性表达。(2)NLR测定：采集GC患者术前肘静脉血，采用血液细胞分析仪(SYSMEX XE-2000)检测受检者血常规指标，包含淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、红细胞计数、血小板计数等，计算NLR。(3)预后分析：生存时间以患者手术当日为起点，随访截至日期(术后2年)或患者死亡时间为终点。

1.3 分析指标

(1)各组CD44、CD133、NLR表达情况，比较GC癌组织、癌旁组织CD44、CD133阳性表达率，GC组、良性组的NLR比较；(2)CD44、CD133和NLR与GC患者病理特征的关系分析；(3)CD44、CD133和NLR表达与GC患者预后的关系分析。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 各组CD44、CD133、NLR表达情况

GC癌组织中CD44、CD133阳性表达率相较于癌旁组织中的明显高(P<0.05)，见表1。GC组血清中NLR水平为(1.99±0.28)，明显高于良性组的(1.68±0.23)，差异有统计学意义(t=5.887,P=0.000)。

表1 GC癌组织及其癌旁组织中CD44、CD133阳性表达情况(例,%)

2.2 CD44、CD133、NLR与GC患者病理特征的关系

GC患者CD44、CD133阳性表达率在病理分期、分化程度、瘤灶直径、淋巴结转移分布上存在明显差异(P<0.05)，而瘤灶直径≥5 cm、有淋巴结转移GC患者NLR明显高于同类其它项(P<0.05)，见表2。

表2 CD44、CD133和NLR与GC患者病理特征的关系

2.3 CD44、CD133和NLR表达与GC患者预后的关系分析

GC患者外周血NLR为(1.99±0.28)，当NLR为2.35时，约登指数最大，故而将NLR=2.35为最佳截点，将GC患者分为NLR高组(NLR>2.35，n=31)、NLR低组(NLR≤2.35，n=69)；此外依据GC患者癌组织中CD133、CD44表达情况分为CD133阳性组(n=82)、CD133阴性组(n=18)，CD44阳性组(n=86)、CD44阴性组(n=14)。100例GC患者均获取了术后2年随访资料，结果发现NLR低组术后2年生存率[89.86%(62/69)]明显高于NLR高组[32.26%(10/31)](χ2=35.198，P<0.05)；CD133阴性组术后2年生存率[94.44%(17/18)]明显高于CD133阳性组[67.07%(55/82)](χ2=5.485，P<0.05)；而CD44阴性组术后2年生存率[85.71%(12/14)]与CD44阳性组的[69.77%(60/86)]相较差异不显著(χ2=1.519，P>0.05)，见图1。

图1 NLR、CD133、CD44阳性表达与阴性表达的GC患者生存曲线

3 讨论

研究发现肿瘤细胞中有成体干细胞自我更新及不对称分裂、多向分化能力的细胞(即肿瘤干细胞)，肿瘤干细胞是肿瘤形成以及不断生长的根源，其中CD44、CD133是肿瘤干细胞中备受关注的特异性标志物，两者在实体瘤(如卵巢癌、黑色素瘤、前列腺癌、结直肠癌等)中均被检测到[7]。有学者认为炎性介质以及细胞因子为肿瘤局部微环境的重要部分，慢性炎性反应与肿瘤发生发展密切相关，而术前NLR表达水平增高患者常存在淋巴细胞减少以及中性粒细胞增多，这有助于肿瘤前炎性反应的应答[8]。文献报道NLR在尿路上皮肿瘤、GC及黑色素瘤等患者预后中发挥重要作用[9]。因此，分析CD44、CD133和NLR与胃癌病理特征关系及在预后中的意义有重要的价值。

本次分析结果显示：GC癌组织中CD44、CD133阳性表达率相较于癌旁组织中的明显高，GC组血清中NLR明显高于良性组，提示CD44、CD133在GC患者癌组织中呈阳性表达，而外周血中淋巴细胞明显减少、中性粒细胞明显增多；进一步分析结果显示GC患者分期越高、分化程度越低、瘤灶直径≥5 cm、有淋巴结转移CD44、CD133阳性表达率越高，初步提示CD44、CD133表达与GC患者病理特征密切相关。CD133主要特异性表达于组织干细胞群中，CD44属于一种细胞黏附分子，研究证实其可介导淋巴细胞的归巢、淋巴细胞向炎性部位以及黏膜相关淋巴组织归位以及调节肿瘤细胞的表达等[10]，两者或在胃肠癌干细胞参与肿瘤侵袭和转移机制中发挥关键作用，可有效预测GC病情严重程度。本次研究则间接说明CD133、CD44或参与了GC发生和发展，为GC患者新型靶向抗癌治疗药物的研制提供参考。此外，本次分析结果显示瘤灶直径≥5 cm、有淋巴结转移GC患者NLR明显高于同类其它项，说明GC瘤灶大小及淋巴结转移与NLR密切相关，NLR值越高表明患者外周血中淋巴细胞越少而中性粒细胞越多，中性粒细胞增多会通过分泌活性氧从而损伤癌前病变细胞的DNA，并产生血管生长因子继而促进肿瘤转化形成，通过促进基质金属蛋白酶分泌从而损伤细胞外基质，干扰T细胞应答[11]，而淋巴细胞(可产生一系列细胞毒性因子，通过多种途径抑制并杀伤肿瘤细胞)减少则意味着对肿瘤细胞的抑制作用减弱[12]，因此NLR与肿瘤患者的病理特征密切相关。

张鹏等[13]研究指出GC患者CD133表达情况与疾病发生、进展及预后密切相关。而胡根等[14]的研究则发现 CD44、CD133 双阳性表达是影响胃间质瘤患者术后生存的独立预后因素，CD44、CD133 可作为临床评价胃间质瘤肿瘤生物学行为及预后的有效指标。黄婷婷等[15]研究则证实术前NLR在恶性肿瘤发生及预后中起到重要作用。本次分析结果发现NLR低组术后2年生存率89.86%(62/69)明显高于NLR高组32.26%(10/31)，CD133阴性组术后2年生存率94.44%(17/18)明显高于CD133阳性组67.07%(55/82)，而CD44阴性组术后2年生存率85.71%(12/14)与CD44阳性组的69.77%(60/86)相较差异不显著，由此证实GC患者预后与CD133、NLR表达情况密切相关，而GC患者预后与CD44是否存在密切关系尚存在争议，未来还需进一步深入探究。

综上，CD44、CD133和NLR与GC患者病理特征、预后相关，或可为GC患者早期诊治提供重要参考。