血清GROβ、TK1水平变化与结直肠癌发生发展的关系

李 琴 彭翠兰 汪红英

结直肠癌的病死率较高，在不同人群中均具有较高的发病率，部分研究者认为，结直肠癌的基础发病率可超过758/10万人以上[1]，同时其年平均发病人数也有明显的上升[2]。不同的病理生理性因素，均能够影响到结直肠癌的病情变化过程，促进肿瘤细胞的异常增殖和凋亡，其中胸苷激酶1(TK1)能够通过诱导癌基因的异常激活，增加癌细胞内DNA的持续性异常分裂速度，最终增加肿瘤细胞的增殖调控失常风险[3]。生长相关癌基因产物β(GROβ)能够通过诱导生长因子的激活，增加新生肿瘤血管的形成速度，提高肿瘤病灶组织的血流灌注水平，促进结直肠癌的发生发展[4]。本研究探讨了GROβ、TK1的表达与结直肠癌患者的病情关系，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年3月至2018年4月经病理学检查确诊的结直肠癌患者90例(肿瘤组)、90例结直肠镜检正常的志愿者作为对照组。诊断及入选标准：①结直肠癌的诊断标准参考中华外科学会制定的标准[5]；②所有结直肠癌患者均经过病理学检查证实；③在获取患者的血清标本前，患者无放化疗病史；④对照组为我院经肠道镜检正常的患者；⑤本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定，经我院医学伦理委员会批准。排除标准：①其他部位恶性肿瘤、感染疾病；②既往手术后复发的结直肠癌患者；③未经病理学检查证实；④肝肾、造血系统疾病；⑤免疫系统疾病。

肿瘤组男性52例、女性38例，年龄42～76岁，平均(61.2±10.2)岁；TNM分期：Ⅰ期20例、Ⅱ期34例、Ⅲ期28例、Ⅳ期8例；淋巴结转移47例；组织学分化程度：高分化21例、中分化39例、低分化30例；浸润达到肌层51例。对照组男性48例、女性42例，年龄39～75岁，平均(60.8±9.4)岁。2组患者的年龄、性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

采用ELISA法进行TK1、GROβ的检测，采用十字交叉的方法进行抗原浓度的测定，采用碳酸盐缓冲液进行抗原稀释，加入96孔的酶标板中，盖好酶标板盖后置于4 ℃冰箱过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，轻轻叩击酶标板甩干。每孔中加入5%的脱脂牛奶200 μl，置于4 ℃冰箱过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，加入稀释好的抗体(购自abcum公司 浓度1∶800)，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，每孔中加入100 μl的底物，显色后在酶标仪上进行吸光度的检测。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 肿瘤组和对照组的血清TK1、GROβ水平比较

肿瘤组患者的血清TK1、GROβ水平均高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)；见表1。

表1 肿瘤组和对照组的血清TK1、GROβ水平比较

2.2 结直肠癌患者血清TK1、GROβ水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、分化程度及浸润深度的关系

不同TNM分期、不同浸润深度的结直肠癌患者血清GROβ水平比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；不同淋巴结转移情况、不同组织学分化程度的结直肠癌患者血清GROβ水平组间比较，差异不具有统计学意义(P>0.05)，见表2。不同TNM分期、不同组织学分化程度、是否发生淋巴结转移的结直肠癌患者血清TK1水平比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；不同浸润深度的结直肠癌患者血清TK1水平组间比较，差异不具有统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 结直肠癌患者血清GROβ、TK1水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、分化程度及浸润深度的关系

3 讨论

部分地区流行病学报道，结直肠癌的年平均发病率具有显著的上升趋势，同时结直肠癌的年平均病死率也明显增加[6]。通过对于结直肠癌患者发病过程中肿瘤调控因子的分析，能够为临床上结直肠癌的诊断提供潜在的参考指标，同时还能够为结直肠癌的免疫靶向治疗提供新的作用靶点。虽然现阶段临床上多数研究者认为在结直肠癌患者中，癌胚抗原或者糖链抗原199的表达浓度明显上升，但二者与结直肠癌患者临床病理特征的关系不足。本次研究能够在揭示TK1、GROβ蛋白在结直肠癌患者血清中表达情况的同时，分析TK1、GROβ的表达与临床病理特征的关系。

GROβ能够通过诱导血管内皮细胞的迁移，促进新生血管内皮细胞的修复再生，最终提高肿瘤血管的数量和密度。基础方面的研究还认为，GROβ能够诱导纤维生长因子及胰岛素生长因子的激活，促进其对于癌细胞核DNA的分裂维持作用；TK1是胸苷酸激酶因子，其对于胸苷酸激酶的调控作用，能够提高癌基因的激活程度，促进癌细胞内转录调控基因的上调程度。TK1对于癌细胞膜上跨膜转运蛋白受体的激活，能够提高癌细胞内多种多样肿瘤信号通路的激活程度[7]。有部分研究发现在结直肠癌患者中TKI蛋白的表达与患者病情进展速度有关[8]，但对GROβ的分析不足。

对于结直肠癌患者血清中GROβ、TK1的表达分析研究可见，在结直肠癌患者中，GROβ、TK1蛋白的表达浓度明显高于正常组，统计学差异显著，表明在结直肠癌患者中，GROβ、TK1存在显著的高表达趋势，提示二者在结直肠肿瘤的病情进展过程中发挥了重要调控作用。GROβ、TK1对于结直肠癌的病情进展影响，主要在于二者能够影响癌细胞增殖速度、提高癌基因修饰激活水平、促进肿瘤血管分支的形成。有其他研究者也发现，GROβ蛋白的高表达具有显著的预后相关性，在结直肠癌恶病质较为明显或者短期内复发转移风险较高的患者中，GROβ蛋白的表达浓度或者阳性率可持续上升[9]。本研究发现，在TNM分期较晚或者浸润深度较深的患者中，GROβ蛋白的表达阳性率较高，提示GROβ蛋白的高表达能够显著促进结直肠癌的临床病情的进展。GROβ对于结直肠癌临床病理特征的促进作用，主要由于其能够提高肿瘤细胞上皮-间质转换过程，提高了肿瘤细胞的浸润风险，最终促进了TNM分期等的进展。但在不同淋巴结转移的患者中，GROβ蛋白的表达并无明显的差异，推测GROβ并不会影响到肿瘤细胞对于淋巴结组织的粘附能力。不同TNM分期、不同组织学分化程度、是否发生淋巴结转移的患者中，血清TK1水平具有显著差异，表明TKI与结直肠癌的临床病理特征同样密切相关，这主要由于TKI能够促进癌细胞核酸结构的磷酸化，导致癌细胞生物学特征的持续恶化，并影响到了结直肠黏膜上皮细胞的分化成熟过程[10]。

综上所述，结直肠癌患者血清GROβ、TK1水平升高，与肿瘤的发生及发展具有密切关系。