LT4、Ki67蛋白表达与卵巢癌淋巴结转移、肿瘤分化、临床分期的关系

郭 莹 徐 毅 杜德奇

免疫球蛋白样转录子4(LT4)的异常表达，能够通过影响自身免疫功能的紊乱，促进局部癌细胞转录活性的加剧，导致癌细胞生物学特征的改变，增加癌细胞的浸润风险[1-2]；细胞增殖核抗原67(Ki67)蛋白的异常表达，能够通过提高癌细胞增殖过程中纺锤体分裂速度的改变，影响到肿瘤的早期发生过程[3]。部分研究揭示了Ki67或者LT4蛋白在宫颈癌或者子宫内膜癌中的表达情况，认为高表达的LT4、Ki67蛋白是促进相关妇科恶性肿瘤患者生存预后恶化的重要因素。本次研究选取90例上皮性卵巢癌组织学标本，探讨了Ki67或者LT4蛋白的表达及其与患者临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年3月至2019年6月收集的90例上皮性卵巢癌组织学标本(卵巢癌组)、60例符合要求的卵巢癌旁组织标本(对照组)。卵巢癌组，患者年龄35～67岁，平均(50.0±12.4)岁，病理学类型：浆液性囊腺癌45例、黏液性囊腺19癌、子宫内膜样癌15例、透明细胞癌11例；临床分期(FIGO分期标准)：Ⅰ期14例、Ⅱ期31例、Ⅲ期28例、Ⅳ期17例；组织病理学分化检查结果：低分化40例、中分化32例、高分化18例；经病理学检查发现淋巴结转移阳性48例。对照组，患者年龄32～65岁，平均(49.1±11.3)岁。卵巢癌组和对照组的年龄对比均衡可比(P>0.05)。

1.2 纳入排除标准

1.2.1 纳入标准 ①卵巢癌的诊断标准参考中华医学会制定的标准；②所有患者均经过病理学检查证实；③在我院接受肿瘤细胞减灭术及盆腔和腹主动脉旁淋巴结清扫术；④癌旁组织标本为距离肿瘤病灶边缘>3 cm的正常卵巢组织；⑤术后对清扫的淋巴结进行病理检查。

1.2.2 排除标准 ①伴有其他部位恶性肿瘤；②手术前患者具有放化疗病史；③伴有凝血功能障碍。

1.3 免疫组化染色检测方法

石蜡切片采用二甲苯进行脱腊至水，5%的双氧水常温下孵育10 min，采用磷酸盐缓冲液孵育5 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗体封闭10 min，不冲洗，滴加一抗(购自abcum公司 批号：20119304浓度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加生物素标记好的二抗(购自北京康泰生物 批号：20104856 浓度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶标记的工作液体，37 ℃孵育10 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，显色之后采用酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片，镜下观察。

1.4 免疫染色读片评分标准

读片评分判断：LT4蛋白、Ki67蛋白在光镜下观察，主要定位在卵巢癌细胞的细胞质和细胞核，其阳性为黄色、棕黄色、褐色颗粒。①按照阳性细胞染色强度：无颜色0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、褐色或者黑色为3分；②依据免疫染色阳性细胞所占比例：阳性染色细胞占比≤10%为1分、>10%～50%为2分、>50%～75%评价为3分、>75%评价为4分。细胞占比评分及染色评分相乘<3分则判断为阴性、如果≥3分则判断为为阳性。免疫组化染色总分<3分：评定为“-”；评分3～5分，评定为“+”；评分6～9分，评定为“++”；评分>9分，评定为“+++”。

1.5 统计学方法

所有数据均采用SPSS16.0统计分析，数据的组间比较采用χ2检验；P<0.05为比较差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌组织标本、对照组中的LT4蛋白、Ki67蛋白阳性表达率比较

卵巢癌组的Ki67蛋白阳性表达率为71.11%(64/90)，高于对照组的6.67%(4/60)，差异有统计学意义(χ2=37.755，P<0.001)。LT4蛋白阳性表达率卵巢癌组为55.56%(50/90)，高于对照组的3.33%(2/60)，差异有统计学意义(χ2=25.109，P<0.001)。见表1。

表1 2组Ki-67、LT4蛋白表达情况/例

2.2 卵巢癌组织标本中LT4蛋白、Ki67蛋白阳性表达与患者临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化的相关性

低分化、发生淋巴结转移的卵巢癌组织中Ki67蛋白阳性表达率较高分化和中分化、未发生淋巴结转移的卵巢癌组织高且差异显著(P<0.05)。Ⅲ期和Ⅳ期、低分化、发生淋巴结转移的卵巢癌组织中LT4蛋白阳性表达率较Ⅰ期和Ⅱ期、高分化和中分化、未发生淋巴结转移的卵巢组织高且差异显著(P<0.05)，见表2。

3 讨论

长期的临床随访观察分析发现，卵巢癌患者的无瘤生存时间不足30个月，同时患者远期多器官功能衰竭的发生率也明显上升。对于卵巢癌患者临床病理特征的评估具有一定的临床价值，其能够在卵巢癌的整体性病情评估或者临床预后的预测方面发挥作用。虽然CA125或者CEA等肿瘤指标能够在卵巢癌的病情评估过程中发挥作用，但依靠CA125或者CEA评估卵巢癌患者病情的可靠性较低，其对于卵巢癌患者临床病理特征评估的一致性率不足30%[4]。LT4蛋白通过对于络氨酸的磷酸化效应，能够通过影响到细胞的增殖、凋亡抑制或者癌细胞纺锤体的分离等过程，最终影响到上皮来源恶性肿瘤细胞的异常发生过程[5-6]。LT4蛋白的异常表达能够通过促进癌细胞的CD4+T淋巴细胞的激活，促进TH1/TH2T淋巴细胞免疫紊乱的发生，加剧癌细胞对于基底膜突破的风险；Ki67蛋白是重要的癌细胞增殖相关抗原，其表达浓度的改变能够通过促进癌细胞内的转录基因的结合，提高肿瘤干细胞增殖活性的维持[7-8]。部分研究揭示了Ki67蛋白在卵巢癌中的异常表达，认为Ki67的表达增强能够导致患者治疗预后的恶化，影响患者的综合性放化疗治疗结局，但对于LT4蛋白的分析研究不足。

表2 Ki67、LT4蛋白阳性表达与卵巢癌患者临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化的相关性(例，%)

本次研究通过免疫组化相关分析研究发现，在卵巢癌患者病灶组织中，Ki67蛋白或者LT4蛋白的表达明显上升，高于卵巢正常组织，差异具有统计学意义，提示Ki67蛋白或者LT4蛋白均可能参与到卵巢恶性肿瘤的病情进展过程中，二者的高表达能够通过下列几个方面促进卵巢癌的发生及远期临床病情的进展过程[9-10]：①Ki67蛋白的高表达，能够导致转录因子cyc的激活，促进癌细胞转录上游启动子的激活，增加癌细胞的增殖风险；②LT4蛋白的高表达，能够导致卵巢癌生发上皮细胞内的NOTCH或者AKT等信号通路的激活，导致肿瘤蛋白P16或者P56的高表达，影响恶性肿瘤的病理进程。Mahadevappa等[11-12]在探讨了65例样本量的卵巢癌患者的肿瘤相关蛋白的表达后发现，Ki67的阳性表达率可平均上升25%以上，同时患者的放化疗效果越差，病死率越高，Ki67蛋白的阳性表达率越高。在探讨Ki67蛋白或者LT4蛋白的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系过程中发现，发生了淋巴结转移或者癌细胞分化程度较差的人群中，Ki67蛋白或者LT4蛋白的表达阳性率较高，提示相关指标的表达与卵巢癌患者的病情较为密切，其机制主要考虑与二者的异常表达可影响卵巢生发上皮细胞浸润能力的改变，促进了癌细胞对于淋巴结内皮细胞粘附能力的增强，提高了淋巴结转移的风险。同时卵巢癌患者的临床分期越晚，Ki67蛋白或者LT4蛋白的阳性表达率越高，临床分期的变化与不同生物学因子的表达关系，主要考虑与相关指标的改变对于卵巢癌浸润盆腔组织、腹膜组织或者肝脏组织等有关，进而影响到了临床分期的进展[13]。

本次研究探讨了LT4蛋白的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系。综上所述，卵巢癌组织中LT4蛋白、Ki67蛋白较正常组织表达上调，并且与肿瘤临床分期、淋巴结转移、肿瘤分化程度关系密切。