射干止咳胶囊抗炎作用初探*

包玉龙 甘 雨 范英兰 朱竟赫 武晓琳 刘 禾 吴 怡 李国信

(辽宁省中医药研究院，沈阳 110034)

射干(Belamcandachinense(L.) Redouté)，是多年生草本鸢尾科植物射干的干燥根茎，最早记载于《神农本草经》，具有祛痰利咽、消癖散结、清热解毒及消肿止痛的功效，是中医治疗喉痹咽痛之要药[1]。射干止咳胶囊是由射干饮片经过米泔水炮制，乙醇提取，大孔树脂分离纯化得到提取物制备而成的中药制剂，功能主治为清热止咳，祛痰利咽，用于风热郁肺所致的咳嗽日久、咽干口燥、少量白黏痰或黄痰、舌苔薄黄以及感染后咳嗽见上述症候者。根据该药的功能主治，进行抗炎方面的研究，以期探明射干止咳胶囊抗炎作用及相关机制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1动物：130只SPF级雄性KM小鼠，体质量18～22 g；70只SPF级雄性SD大鼠，体质量180～220 g。实验动物均购自辽宁长生生物技术股份有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(辽)2020-0001，饲养于辽宁千一生物技术有限公司，实验动物使用许可证号：SYXK(辽)2020-0005，温度20～23 ℃，相对湿度50%～60%，自由摄食饮水。本实验已通过辽宁省中医药研究院福利伦理审查，编号：2020-512。

1.1.2药物与试剂：射干止咳胶囊由辽宁省中医药研究院药学室提供，每粒胶囊含99 mg提取物，有效成分为野鸢尾苷等黄酮类化合物，批号：20200402；苏黄止咳胶囊，国药准字Z20103075，扬子江药业集团北京海燕药业有限公司，批号：20031711；醋酸地塞米松片，国药准字H34021845，安徽金太阳生化药业有限公司，批号：1905122；二甲苯(分析纯)，沈阳市新化试剂厂，批号：20200123；营养琼脂，北京奥博星生物技术有限责任公司，批号20101130；脂多糖(LPS，L2880-100 mg)，Sigma，批号：039M4004 V；小鼠血清IL-6和TNF-α试剂盒，批号为：20210127，南京建成生物工程研究所。

1.1.3仪器设备：ELX800光吸收酶标仪，Bio-rad；SQP_Quintix224型分析天平，德国赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；TD5A-WS低速台式离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司。

1.2 方法

通过射干止咳胶囊分别作用于二甲苯致小鼠耳肿胀实验和作用于琼脂致大鼠肉芽肿实验，观察其抗炎作用，并通过其作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤实验，检测小鼠血清中白介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，推测其可能的抗炎机制。

1.2.1射干止咳胶囊作用于二甲苯致小鼠耳肿胀实验[2]：取禁食不禁水16 h，雄性KM小鼠60只，按体质量随机分6组，分别为空白对照组、射干止咳胶囊低(提取物43.00 mg/kg)、中(提取物86.00 mg/kg)、高剂量组(提取物172.00 mg/kg)、苏黄(530.00 mg/kg)止咳胶囊组及醋酸地塞米松(1.56 mg/kg)组，每组10只。各组动物按相应剂量给予相对应药液，给药体积均为20 mL/kg，空白对照组灌胃等体积蒸馏水，连续7 d。末次给药60 min后，用移液枪将每组每只鼠右耳壳内外涂致炎剂(二甲苯)20 μL/只(背腹面各10 μL)，停留15 s，30 min后将受试小鼠脱颈处死，沿耳郭基缘剪下双耳，用内径为8 mm打孔器在双耳同一部位打下两耳片，称质量，以左、右耳质量差值(肿胀度)为指标进行组间比较。

肿胀抑制率(%)=[(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度]×100%。结果见表1。

1.2.2射干止咳胶囊作用于琼脂致大鼠肉芽肿实验[3]：取禁食不禁水17 h，雄性SD大鼠70只，将大鼠于乙醚浅麻醉下无菌操作，在鼠背中线皮下注射2%琼脂生理盐水溶液2 mL，按体质量随机分组，即空白对照组、模型对照组和射干止咳胶囊低(提取物30.00 mg/kg，以下简称低剂量组)、中(提取物60.00 mg/kg，以下简称中剂量组)、高剂量组(提取物120.00 mg/kg，以下简称高剂量组)、苏黄(365.00 mg/kg)止咳胶囊组及醋酸地塞米松(1.08 mg/kg)组，每组 10 只，给药体积10 mL/kg，每天灌胃1次，连续给药15 d，空白对照组灌胃等体积蒸馏水。末次给药1 h后，处死大鼠，剥离出背部肉芽肿琼脂块，用滤纸吸干后称质量，记录肉芽肿琼脂块质量，见表2。

1.2.3射干止咳胶囊作用于脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤实验[4]：取禁食不禁水16 h，体质量18～22 g的雄性KM小鼠70只，按体质量随机分7组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、给药组分为：射干止咳胶囊低(提取物43.00 mg/kg，以下简称低剂量组)、中(提取物86.00 mg/kg，以下简称中剂量组)、射干止咳胶囊高(提取物172.00 mg/kg)(以下简称高剂量组)剂量组、苏黄(530.00 mg/kg)止咳胶囊组及醋酸地塞米松(1.56 mg/kg)组。连续6 d各组动物按相应剂量给予相对应药液，给药剂量均为20 mL/kg，空白对照组和模型对照组灌胃等体积蒸馏水。末次给药60 min后，除空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水外，其余各组小鼠腹腔注射LPS，剂量为10 mg/kg造成急性肺损伤模型，第7天继续给药(末次)60 min后，麻醉小鼠，眼静脉丛取血，血液室温静置30 min，3 000 r/min离心10 min，取上清分装后存于-80 ℃冰箱待用。按ELISA试剂盒说明书测定血清中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。

2 结果

2.1 射干止咳胶囊作用于二甲苯致小鼠耳肿胀

结果表明，与空白对照组比较，低剂量组(提取物43.00 mg/kg)、中剂量组(提取物86.00 mg/kg)及高剂量组(提取物172.00 mg/kg)小鼠右耳肿胀度明显减小，差异有统计学意义(P<0.01～0.05)，说明上述三个剂量的射干止咳胶囊具明显抗炎作用(表1)。

表1 二甲苯致小鼠耳肿胀

2.2 射干止咳胶囊作用于琼脂所致大鼠肉芽肿

结果表明，与模型对照组比较，低剂量组(提取物30.00 mg/kg)、中剂量组(提取物60.00 mg/kg)组和高剂量组(提取物120.00 mg/kg)组大鼠肉芽肿质量明显减轻，差异有统计学意义(P<0.01～0.05，表2)。

表2 琼脂所致大鼠肉芽肿质量

2.3 射干止咳胶囊作用于LPS诱导的小鼠急性肺损伤

实验结果表明，与空白对照组比较，模型对照组小鼠血清IL-6和TNF-α含量明显增加，差异极显著(P<0.01)；与模型对照组比较，低剂量(提取物43.00 mg/kg)组、中剂量(提取物86.00 mg/kg)组及高剂量(提取物172.00 mg/kg)组，小鼠血清IL-6和TNF-α含量明显减少，差异极显著(P<0.01)，说明射干止咳胶囊在低、中、高剂量均有明显抗炎作用(表3)。

表3 LPS诱导的小鼠急性肺损伤

3 讨论

炎症是指具有血管系统的活体组织对损伤因子的防御性反应，表现为红、肿、热、痛以及功能障碍[5]。炎症反应时，血管系统的一系列改变是其防御作用的关键，也是炎症过程的中心环节。在此过程中，炎症部位的充血和渗出，有利于稀释毒素、杀伤和包围损伤因子，达到消灭致病因子的目的[6]。在炎症早期由于血管受到刺激，血管内皮间隙扩大，血管壁通透性增强，白细胞、蛋白质等从血管渗出到组织间隙，造成组织肿胀。射干止咳胶囊能降低二甲苯所致的小鼠耳郭肿胀度，证明该药对急性炎症具有抑制作用。炎症晚期以纤维组织增生和肉芽屏障形成为特点，射干止咳胶囊能抑制琼脂肉芽组织增生，证明该药对慢性炎症具有抑制作用。

LPS又称为细菌内毒素，是革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分，是引起急性肺损伤和其他炎症疾病的主要原因之一[7]。由LPS诱导的小鼠炎症模型主要特点是造模时间短，即短时间在小鼠体内产生大量的炎症因子[8]。其中，TNF-α和IL-6是最重要的炎症细胞因子，与急性肺损伤的发病及死亡关系密切。TNF-α对肺有强烈的毒性作用，能诱导肺血管内皮细胞活化及中性粒细胞颗粒释放氧由基等介质，引起白细胞迁移，损害肺泡表面活性物质系统[9]。IL-6 可以提高内皮细胞通透性，促进中性粒细胞和内皮细胞间的黏附，对炎症性器官损伤具有重要作用[10]。从检测血清中的细胞因子水平可知，模型对照组小鼠血清中TNF-α与IL-6含量明显增加，促进肺组织的炎症反应，引发肺的急性损伤；射干止咳胶囊能明显下调TNF-α与IL-6在血清中的表达水平，与模型对照组比较，均有不同程度的下降。以上结果证实射干止咳胶囊可通过抑制细胞中TNF-α、IL-6 等炎症因子的分泌水平以减轻小鼠体内的炎症程度。

射干是治疗咽炎的要药，现代研究表明射干提取物中主要含白射干素、鸢尾黄素、野鸢尾黄素、次野鸢尾黄素等黄酮类化合物[11-13]，具有抗炎、止咳等药理活性。这些药物活性成分可能在体内形成一个多途径、多靶点系统而发挥作用。本实验结果提示，射干止咳胶囊具有明显的抗炎作用，为临床用药和进一步开发研制提供了一定的药理学依据。因此，推测射干止咳胶囊的抗炎作用机制可能与减少炎症因子的合成与释放有关。