北京地区汉族献血者Kidd血型系统调查

李琳琳，张燕华，李美霖

(北京市通州区中心血站，北京 通州 101100)

Kidd(JK)血型系统含有3个抗原：Jka(JK1)、Jkb(JK2)和Jk3(JK3)，共4种表现型：Jk(a+b+)、Jk(a-b-)、Jk(a+b-)、Jk(a-b+)。Kidd系统抗体通常在输血或怀孕后才能被发现，偶尔可引起新生儿溶血(HDN)，严重的迟发性溶血性输血反应中Jk抗体常是主要原因。2012年国内13个省级血液中心联合开展针对多个稀有血型系统中高频抗原的筛选，通过尿素筛选实验获得50多名Jk(a-b-)表型献血者[1]。建全全国联网的中国稀有血型资料库和血液库，有助于提高稀有血型患者治愈率。我们开展了MNS(Mur)、Kell、Kidd、Lutheran、Diego、Colton、Yt等稀有血型检测，现将15 984名汉族献血者JK(a-b-)表型筛查结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

随机选取北京市通州区中心血站2020-01—2022-12月采集的15 984名汉族献血者EDTA-K2抗凝血液标本(5mL/份)。

1.2 仪器和试剂

全自动加样器(瑞士HAMILTON，STAR)、血样本离心机(德国Hettich，ROTIXA50S)、U型板(烟台摩尔，96孔板)、振荡孵育器(奥地利，Anthos)、KA-2200血清学离心机(日本KUBOTA公司)、医用低速离心机(河北省安新县白洋离心机厂，52A型)、GPD型观片灯(北京京东公司)。单克隆IgM抗-Jka和抗-Jkb(荷兰Sanquin，批号：8000230598、8000230759)、分析纯尿素(北京嘉世玉禾化工技术研究院，批号H6921)、基因组DNA提取试剂盒(杭州博日，批号：20170601)、核酸提取试剂(短代码T141，西安天隆，批号：21070510T146)、人类红细胞Diego，Kidd血型基因分型试剂盒、人类红细胞15个血型系统基因分型试剂盒(PCR-SSP法)(天津秀鹏，批号：171021001，K210607001)。

1.3 方法

1.3.1 尿素溶解试验 取献血者EDTA-K2抗凝血液标本红细胞，用生理盐水配成2%红细胞盐水悬液，使用STAR加样器将20 μL 2%红细胞+2 mol·L-1尿素溶液100 μL分别加入96孔U型板中，在振荡器上轻微振荡混匀后静置1～2 min，在平板离心机上2 000 r·min-1离心1 min，出现溶血者为阳性，未溶血者为Jk(a-b-)表型标本。

1.3.2 血清学确认试验 取两支洁净试管，管1、2分别加入单克隆IgM抗-Jka血清和抗-Jkb血清50 μL，再加入50 μL 2%献血者红细胞悬液，混匀后3 500 r·min-1离心18 s，观察结果。

1.3.3 PCR-SSP法基因分型 委托天津秀鹏生物技术开发有限公司对表型为Jk(a-b-)的献血者提取血液标本基因组DNA，对Jk基因编码外显子进行PCR扩增和基因分型检测。

2 结 果

尿素溶解试验和血清学确认试验结果：从15 984名汉族献血者筛选出1例未溶血标本，血清学试验确认为Jk(a-b-)表型(图1)。

图1 Jk(a-b-)尿素溶解试验和血清学确认试验结果

PCR-SSP法基因分型结果：该献血者基因分型为Jkb/Jkb(图2)。

图2 Jk(a-b-)标本分型结果

3 讨 论

在不同种族中，Kidd血型分布有一定差异，高加索人和黑人中Jk(a-b-)罕见，Jka基因频率较高。亚洲人中Jk(a-b-)的基因频率为0.9%，Jkb一般高于Jka。我国1989年首次在河南汉族中应用间接抗人球蛋白法确认2例稀有的Jk(a-b-)红细胞血型，由于地域和民族的不同，Jk(a-b-)表型的基因频率也存在差异，已知研究表明上海地区为0.0039%[2]、重庆0.0203%[3]、温州0.014%[4]、广州0.02%[5]、成都0.022%[6]、长春0.005%[7]、上饶0.0025%[8]。本研究发现北京地区汉族中分布频率为0.0167%，与温州、广州地区相近。由于JK蛋白多肽为尿素转运蛋白分子，在浓度为2 mol·L-1的尿素溶液中，Jka或Jkb红细胞可以主动通过细胞膜转运尿素，但Jk(a-b-)表型不能主动转运尿素，在同样条件下至少15 min甚至能够长时间抵抗溶血[9]。基于这种特性，使用96孔U形板筛选Jk(a-b-)表型适用于血站大批量检测，经济实用且方法简便，易于推广。

目前,稀有血型患者用血主要有自身输血、亲属互助献血和稀有血型库3种备血方式,前两种方式不适用于紧急手术或失血量较大的患者,只能在稀有血型库中寻找同型血液[10]。稀有血型筛选对提供临床抢救用血、提高稀有血型患者输血疗效具有重要意义。