PPAR－γ在侵袭性垂体瘤中的表达

娄金峰 牛光明 娄季宇 苏芳忠 陶胜忠 张鹏远 尹先印 宋 乐

郑州大学第二附属医院 1）神经外科 2）神经内科 郑州 450014

垂体腺瘤在组织学上是一种颅内良性肿瘤，但在生物学行为上可分为侵袭性生长和膨胀性生长两类［1］。过氧化物酶增值因子激活物受体（PPAR－γ）是核受体超家族的成员之一［2］，可诱导多种肿瘤细胞分化，并抑制其恶性增值，可导致肿瘤细胞的凋亡［3］。目前认为PPAR－γ在肿瘤的生长、分化和侵袭中发挥重要作用。我们采用RT－PCR方法检测［4］并探讨PPAR－γ表达在侵袭性垂体腺瘤的发生与发展中的作用和作为预测生物学行为标志物的价值，并进一步预测其在垂体腺瘤预后和治疗中的相关作用［5］。

1 材料和方法

1.1 材料 标本取自2009－01～2010－07郑州大学第一、第二附属医院神经外科手术切除并经病理学证实的垂体腺瘤标本42例。男22例，女20例。年龄17～63岁，平均45.6岁。依据内分泌学检查：无功能腺瘤9例，生长激素腺瘤6例，催乳素腺瘤27例。本研究所有标本均为首次发现，未接受放化疗，MR扫描均为大腺瘤（直径＞1cm）且有完整临床资料并依据Wilson改良Hardy分类系统分级分期标准分组：侵袭性垂体腺瘤组18例，非侵袭性垂体腺瘤组24例。肿瘤侵袭性的判定标准［6］：（1）Hardy－Knosp［7］分级分期，III级或以上及C－E期认为是侵袭性垂体腺瘤；（2）鞍底硬膜和邻近骨质经病理证实有肿瘤细胞；（3）影像学检查见肿瘤包绕双侧颈内动脉。凡符合上述3项中的任何一项者均归为侵袭性组，余为阴性对照组。

1.2 试剂和方法

1.2.1 试剂及仪器来源：RT－PCR检测试剂盒（上海禾尤蒙生物科技有限公司），Taq DNA聚合酶（北京全式金生物技术有限公司），dNTP（上海普罗麦格公司），DNA Marker I（北京全式金生物技术有限公司），RT－PCR仪（珠海黑马医学仪器有限公司），引物均为北京赛百盛基因技术有限公司提供。1.2.2 PPAR－γ表达活性检测：PPAR－γ表达使用 RT－PCR技术方法，肿瘤标本经液氮冷冻处理后，放置－80℃超低温冰箱保存。按说明书操作，经过RNA提取，然后加入反转录试剂并PCR扩增后，循环反应条件：94℃预变性5min，94℃30s；55℃35s；72℃90s；27个循环；72℃延伸10min终止反应。然后采用2%琼脂糖凝胶电泳后观察。

1.2.3 结果判定：阳性结果判定：PPAR－γ目的基因 RTPCR产物凝胶电泳后在紫外灯下出现476bp的荧光条带。采用凝胶图像分析仪对RT－PCR结果进行图像分析，Bandscan5.0计算条带的积分光密度（Integrated optical density，IA），IA＝平均吸光度＊面积，目的条带的相对表达强度用目的片段（IA）／内对照（IA）的相对比值来表示。由内参β－actin作阳性对照。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计分析。两样本率的比较用χ2检验；计量资料采用t检验、校正的t检验或Fisher确切概率法，结果判断以α＝0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在42例垂体腺瘤中，PPAR－γ阳性表达22例，阴性表达20例，总阳性率52.4%。在侵袭组中，PPAR－γ阳性表达13例，阴性表达5例，阳性率72.2%；在非侵袭性组中，PPAR－γ阳性表达9例，阴性表达15例，阳性率37.5%。侵袭组与非侵袭组间在PPAR－γ表达阳性率上有显著差异（P＝0.044，P＜0.05）。侵袭性垂体腺瘤 PPAR－γ表达水平为（0.972±0.103），非侵袭性垂体腺瘤 PPAR－γ表达水平为（0.121±0.013），二者间有显著统计学差异（t＝163.61，P＜0.05）。在无功能腺瘤中，侵袭组（0.937±0.091）与非侵袭组（0.189±0.016）间PPAR－γ基因表达水平存在显著差异（t＝88.54，P＜0.05）；在生长激素腺瘤中，侵袭组（0.413±0.055）与非侵袭组（0.307±0.032）间 PPAR－γ基因表达水平无明显差异（t＝2.45，P＞0.01）；在催乳素腺瘤中，侵袭组（0.930±0.087）与非侵袭组（0.064±0.011）间 PPAR－γ基因表达水平存在显著差异（t＝20.56，P＜0.05）。电泳图片如下（图1）。

图1 PPAR－γ在侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤中的表达 M：Marker I

表1 PPAR－γ基因在垂体腺瘤中的表达

3 讨论

Hardy等依据蝶鞍及其周围骨性结构和脑组织变化以及CT和MRI结果将垂体腺瘤分为局限型和侵袭型，即腺瘤直径＜2.5cm，有分泌症状无视力及视野改变者为局限型；腺瘤直径＞2.5cm，有鞍底破坏，视力及视野改变以及颅高压症状者为侵袭型［8］。近些年对侵袭型垂体腺瘤生物学行为的分子研究日益增多，致力于寻找高增生性、侵袭性的物质依据，以便早期干预，阻止其临床复发。

有研究证明：垂体腺瘤组织中存在PPAR－γ的高表达［9-12］，但在侵袭性垂体腺瘤与非侵袭性垂体腺瘤之间PPAR－γ的分布是否存在差异，国内外相关的报道大部分是基于蛋白水平的表达［13－14］，关于其分子水平的表达，报道较少。本研究发现，侵袭性腺瘤组的PPAR－γ表达水平明显高于非侵袭性腺瘤组，并观察了在不同性别、年龄、大小的垂体腺瘤中PPAR－γ基因的表达情况。垂体腺瘤可能通过某些尚不明确的机制发挥促进PPAR－γ表达的作用，从而促进了侵袭性腺瘤与非侵袭性腺瘤之间PPAR－γ表达水平的差异，这方面的研究有待于进一步扩大样本量及更为深入的探讨。

本研究还发现，在无功能及催乳素性侵袭性垂体腺瘤中PPAR－γ表达水平明显高于相应非侵袭组腺瘤，其为什么只在这两种类型垂体瘤中高表达——有待更进一步的研究，这样有可能使得PPAR－γ成为无功能及催乳素侵袭性垂体腺瘤治疗的新靶点。

综上所述，在侵袭性垂体腺瘤中，PPAR－γ均呈现一定程度的表达，说明其与垂体腺瘤的侵袭性有一定的关联，但对其作用机制及生物学效应尚未完全清楚，需要进一步探讨。

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