穴位埋线对癫痫大鼠急性发作潜伏期及体重的影响

禤达科，张汉伟，张刚利，赵利军

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西省人民医院，山西太原030012）

癫痫是由不同病因所引起的脑部神经元高度同步化异常放电，临床以反复发作性、短暂性、通常是刻板性的中枢神经系统功能失常为特征的综合征。癫痫是目前神经科内仅次于脑血管病和痴呆的第三大常见疾病［1］。我国有超过900万癫痫患者，其中约80%可通过常规的一线抗癫痫药物治疗获得满意疗效，但仍有20%患者因耐药或西药的严重副作用而未能有效控制，且抗癫痫药均有不同程度的不良反应。临床发现，穴位埋线治疗癫痫疗效肯定，但其抗癫痫机理尚不明确。我们通过对大鼠穴位埋线预处理后，以青霉素腹腔注射建立急性癫痫发作模型，探讨穴位埋线法对癫痫大鼠痫性发作行为以及体重的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物与分组 健康SD雄性大鼠40只，体重（300±20）g，购自北京军科院，随机分为穴位组、西药组、针刺组和模型组4组，每组10只。在室温、自然光环境下给予充足的食物及水。各组大鼠适应性喂养3 d后进行实验，每日早晨称重并记录。

1.1.2 药物与配制 丙戊酸钠缓释片（0.2 g/片，江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：101013），取200 mg丙戊酸钠，研细末，加蒸馏水至10 mL，配制成20 mg/mL的丙戊酸钠溶液用于西药组灌胃；注射用青霉素钠（160万U/瓶，华北制药股份有限公司，批号：X1105401），取青霉素160万U，加灭菌注射用水2 mL配成57万U/mL的青霉素溶液腹腔注射造模；灭菌注射用水（500 mL，石家庄四药有限公司，批号091026104）；10%水合氯醛：10 g水合氯醛加蒸馏水到100 mL。

1.1.3 实验器材 JA2003精密电子天平、SF-400电子秤、针刺针（华佗牌，25 mm×13 mm，苏州医疗用品有限公司）、一次性穴位埋线针（祾康牌，7#，扬州市华宏医疗器械有限公司）、可吸收胶原蛋白线［博达牌，3#，（20×2）cm/包，山东博达医疗用品有限公司］。

1.2 实验方法

1.2.1 癫痫大鼠模型的造模方法［2］青霉素钠溶液的配制方法：取青霉素钠160万U，加灭菌注射用水2 mL配成57万U/mL；根据参考文献介绍并经过预实验后，确定青霉素钠按456万U/kg体重的剂量腹腔注射；按Racine标准判定癫痫发作的程度，达到Ⅳ～Ⅴ级及脑电图出现棘波和棘慢波的大鼠被认为模型制作成功。

1.2.2 给药方法 西药组：以体重50 kg成人每天服用丙戊酸钠15 mg/kg的剂量按照体表面积换算成大鼠的剂量灌胃，每次称重后给药，其他3组给予同体积的蒸馏水灌胃，每天上午、下午各灌胃1次，连续灌胃3 d；埋线组：大椎穴准确定位（取穴标准参考中国中医药出版社李忠仁等2003版《实验针灸学》［2］）并局部剪毛，镊取一段 PGLA 线，置于埋线针针管的前端，用镊子将线体推入针管，左手拇、食指绷紧或提起进针部位皮肤，右手持针迅速刺入皮下，并进一步伸入到穴位适宜的深度；边推针芯，边退针管，将线体植入穴位的皮下组织或肌层内；出针后，干棉棒按压1 min～2 min。针刺组：穴位同埋线组，每天上午蒸馏水灌胃后针刺1次，毫针针刺大椎穴，针刺方向与深度同埋线组，轻捻转，每隔l0 min行针1次，30 min后出针，每天1次，连续针刺3 d。干棉棒按压数秒。每日早晨8 h～9 h给大鼠称重并记录，癫痫大发作后48 h大鼠断头取脑，称重。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件分析数据。所测数据均以均数士标准差（±s）表示，癫痫发作Ⅳ级以上发生率（含Ⅳ级）用χ2检验，发作潜伏期用方差分析之q检验。

2 结 果

2.1 痫性发作行为分级

观察各组有无痫性发作及发作的潜伏时间、发作级别及持续时间。发作级别参考 Racine′s分级法［3］，即0级：无惊厥；Ⅰ级：闭眼、胡须动、面部抽搐；Ⅱ级：点头、咀嚼伴面部抽搐；Ⅲ级：一侧前肢抬起、阵挛；Ⅳ级：站立常伴两侧前肢阵挛；Ⅴ级：站立、扭转并伴有跌倒。

模型组10只大鼠均有癫痫发作的行为表现，有9只为Ⅳ～Ⅴ级发作，1只死亡。主要表现为前肢抽动伴站立或强直甚至是全身强直-阵挛发作。本实验成功建立了急性癫痫大鼠模型。

2.2 穴位埋线法对癫痫大鼠急性发作潜伏期的影响

埋线组、西药组、针刺组与模型组比较，均可延长大鼠痫性发作潜伏期（P<0.05），且三组中以埋线组最为明显，但三组间差异无统计学意义。结果见表1。

表1 各组大鼠痫性发作潜伏期的比较 （min，±s）

表1 各组大鼠痫性发作潜伏期的比较 （min，±s）

注：与模型组比较，1）P<0.05

组别 n 潜伏期西药组 10 17.2±1.6 1）针刺组 10 16.3±2.6 1）埋线组 10 17.7±1.5 1）模型组 10 10.4±2.4

2.3 穴位埋线法对癫痫大鼠痫性发作程度的影响

模型组有9只大鼠出现Ⅳ～Ⅴ级痫性发作，Ⅳ～Ⅴ级痫性发作率为90%，造模成功。西药组与模型组均有1只大鼠Ⅴ级痫性发作后死亡。4组等级资料的比较用Ridit分析（P<0.05），提示西药组、针刺组、埋线组造模后大鼠Ⅳ～Ⅴ级痫性发作率均明显低于模型组，且差异具有统计学意义。三组中以针刺组Ⅴ级痫性发作率相对较高，但三组间差异无统计学意义。结果见表2。

根据表1、表2数据，经统计软件用散点图描述，提示各组大鼠痫性发作程度与潜伏期不存在相关关系。结果见图1。

表2 各组大鼠痫性发作程度的比较 （min）

2.4 穴位埋线法对癫痫大鼠体重的影响

4组大鼠每日体重与前一日相比差异均有统计学意义（P<0.05），观察数据，西药组大鼠体重增长明显，埋线组大鼠体重增长较平稳，模型组大鼠在造模后体重增长趋势较造模前放缓，但前后无显著性差异（P>0.05）。针刺组大鼠在造模前1 d、造模当天以及造模后1 d的体重较同期模型组大鼠体重小，且差异具有统计学意义。结果见表3。

表3 各组大鼠造模后每日体重的比较 （g，±s）

表3 各组大鼠造模后每日体重的比较 （g，±s）

注：每日体重与本组前一日体重比较，1）P<0.05；与同期模型组大鼠体重比较，2）P<0.05

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3 讨论

本实验结果显示，针刺组大鼠体重较模型组大鼠体重偏小，这与多数研究以及临床工作不相符［4］，主要考虑是在对大鼠进行针刺操作过程中产生的不利影响。与埋线组只需第一日进行操作以及西药组只需做简单的灌胃操作相比，针刺组大鼠每日针刺操作前需要绳子固定四肢然后针刺，持续30 min，此过程难免对大鼠的身体及精神产生一定影响，进而影响正常饮食，导致体重增长较其他组缓慢。而西药组体重增长明显，是否属于正常，由于观察时间短暂，较难作出判断，但之前有研究报道在长时间服用丙戊酸钠抗癫痫治疗，可能出现体重增加［5］。

青霉素是经典的致痫剂，其癫痫点燃模型是一种极为有效的、操作简便的实验动物癫痫模型，癫痫放电持久稳定，其急性癫痫模型已获公认，可以用作抗癫痫药物疗效及癫痫发病机制的研究。青霉素致痫原理：青霉素诱发的癫痫电活动是阻断了GABAα受体导致抑制性神经网络功能失调而产生癫痫状态［6］。我们通过预实验发现，青霉素癫痫模型造模成功与否与合适的体重-剂量关系密切相关，腹腔注射方式对癫痫大鼠脑组织的影响的不利干扰较脑内贴片小，而且按456万U/kg体重的剂量腹腔注射造模发生Ⅲ～Ⅴ级发作的概率大，且死亡率低，能够很好满足实验要求。

近些年来，穴位埋线应用于癫痫治疗，取得了较好的临床疗效，同时在穴位埋线治疗癫痫的机理探讨及埋线技巧的创新都有较大的发展与进步，进一步促进了穴位埋线在癫痫治疗的应用，提高了疗效。穴位埋线疗法持续不断的刺激可以向大脑反馈促通信息，形成一种复杂持久而柔和的非特异性刺激冲动。一部分经传入神经到相应节段的脊髓后角，再内传脏腑起调节作用；另一部分经脊髓后角上传大脑皮层，对大脑的异常放电病灶进行抑制，同时，埋线后可使大脑皮层建立新的兴奋灶，从而对病灶产生良性诱导，缓解病灶放电，而达到消除疾病的目的［7-8］。穴位埋线疗法寓粗针透穴、放血、穴位注射、组织疗法于一体，具有“以线代针”的长效针感治疗效果，可避免长期针刺对局部的不良反应。由于羊肠线长期持续刺激穴位，以达穴位刺激的续效作用，提高穴位的兴奋性与传导性，具有止痛、解痉、调和气血、疏通经络、扶正祛邪、平衡阴阳，调节机体有关脏腑器官功能趋于平衡，达到良性、双向性调整作用［9-10］。大椎穴为督脉的要穴，手足三阳经与督脉的交会穴，又称“诸阳之会”，内可通行督脉，外可流走三阳，为调整全身机能要穴。癫痫病位在脑，督脉入脑，脑为元神之府，督脉气血失调，则“大人癫疾，小儿惊痫”。（《脉经·平奇经八脉病》）。大椎有清热息风、宁神止痫之功。本文通过大椎穴处穴位埋线对癫痫大鼠痫性发作行为以及体重的影响后进一步说明了穴位埋线法在抑制癫痫发作不仅有效而且安全可靠。但考虑到本实验穴位预埋线时间只有3 d，肠线未能完全吸收，故埋线的持续刺激作用有限。在以后的研究中，可将穴位埋线的时间适当延长，有助于完整的观察穴位埋线的短期速效和长期续效两种作用。

穴位埋线法的抗癫痫疗效与西药丙戊酸钠以及常规针刺无明显差异，但从西药长期服用存在副作用，常规针刺需要多次针刺操作，患者耐受性、顺应性低等缺点考虑，穴位埋线法治疗癫痫有其独特的优势，而且在预防癫痫发作方面更明显，可根据既往患者癫痫发作史，制定埋线时间，可较好地预防癫痫发作或者减少发作次数，降低发作程度，提高生活质量。在癫痫的发作期，加以穴位埋线，控制或缓解癫痫的发作，可减少西药服用的频率与剂量，降低西药所致的副作用；在缓解期，采用埋线疗法，可减少发作频率及患者的就诊次数，提高患者的依从性。目前研究中仍有许多问题仍未解决，在穴位埋线的抗癫痫机理以及对埋线的介入时机、间隔时间、穴位、针刺的深度对疗效的影响，都需要做进一步的探讨研究。

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