利尿消炎合剂的薄层色谱鉴别

张锦兴 唐蕾 李卓亚 黄峰

利尿消炎合剂是中山市人民医院根据多年的临床经验方为基础研制而成的特色中药制剂，由黄柏、金钱草、黄芩等十一味中药组成，具有利水通淋，清热化石的功效。我院临床应用利尿消炎合剂治疗泌尿系感染及泌尿系结石等已有多年的历史，临床疗效确切，不良反应少。黄柏，金钱草，黄芩作为方中的主要药物，为了保证临床疗效的稳定，更好地控制药品质量，建立该制剂完善的质量标准，本实验在该验方的基础上，建立了处方中黄柏、金钱草、黄芩的薄层色谱(TLC)鉴别法，以控制制剂的质量。

1 仪器与试药

AS20500A型超声波清洗器(北京东南仪诚实验室设备有限公司);Zf-20D暗箱三用紫外分析仪(上海暨辉科学分析仪器有限公司);101A-2B型电热恒温鼓风干燥箱(上海市实验仪器厂);YOKO-XR显色加热器(武汉药科新技术开发公司);电子恒温水浴锅(广东省汕头市医用设备厂);利尿消炎合剂(中山市人民医院，批号分别为:2012070512，20120402，20120205);阴性对照样品(自制);黄芩对照药材(批号:120955-201008);黄芩苷对照品(批号:110715-201117);盐酸小檗碱(批号:110713-200609);槲皮素对照品(批号:100801-200907);金钱草对照药材(批号:121248-200703)，均由中国药品生物制品检定所提供;苯、甲酸、丁酮、硫酸、三氯化铁、三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均为分析纯。

2 方法和结果［1～3］

2.1 黄柏薄层色谱鉴别 取利尿消炎合剂30 ml，加氨试液调节pH值至10左右，用三氯甲烷50 ml萃取，分取三氯甲烷层，水浴蒸干，残渣加无水乙醇2 ml溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加无水乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇－冰醋酸(7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰(图1)。

图1 黄柏薄层色谱图

2.2 金钱草薄层色谱鉴别 取利尿消炎合剂50 ml，加稀盐酸10 ml，置水浴中加热1 h，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次50 ml，合并乙酸乙酯液，用水50 ml洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取金钱草对照药材1 g，用水100 ml煎煮1.5 h，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。另取槲皮素对照品，甲醇制成每1 ml各含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙酸溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰(图2)。

图2 金钱草薄层色谱图

2.3 黄芩薄层色谱鉴别 取利尿消炎合剂50 ml，用稀盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次50 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1 g，加水150 ml，煎煮1.5 h，煎液浓缩至约20 ml，同法制成对照药材溶液。取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各10 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(8∶3∶1∶1)为展开剂，预平衡30 min，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰(图3)。

图3 黄芩薄层色谱图

3 讨论

3.1 黄柏的薄层鉴别实验 黄柏主要含有生物碱成分，其中盐酸小檗碱为其主要的生物碱成分，含量为1.4%～5.8%［4］。本实验以盐酸小檗碱为对照品，鉴定黄柏，阴性无干扰。对黄柏中盐酸小檗碱的提取，采用的是生物碱的传统方法，因生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇。基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取［5，6］。

3.2 金钱草的薄层鉴别 实验药理实验表明，金钱草具有利胆、排石作用［7］，作为利尿消炎合剂中的君药，鉴定金钱草成分对于保持制剂的质量稳定有重要意义，金钱草主要成分为黄酮苷类成分［8，9］，本实验对金钱草主要成分提取鉴定采用了《中国药典》报道的金钱草鉴定方法，方法稳定，可靠。

3.3 黄芩的薄层鉴别实验 本实验研究了2010版《中国药典》中两种处理黄芩样品的方式，方法一如上文供试品溶液制备所示，另外一个方法为在方法一的基础上，样品先经乙醚萃取，弃去乙醚液，以除去脂溶性成分［10］。本研究比较了两种试验方法，研究发现在利尿消炎合剂的样品处理中，脂溶性成分干扰不大。因此采用了方法一，以减少试剂的浪费及缩短实验步骤。

4 结论

利尿消炎合剂所含药味多，成分复杂。如薄层图所示，本实验通过对供试品有效的前处理，除去大部分干扰杂质，再经过反复试验，选择了适宜层析条件，结果薄层色谱分离效果好，有效成分斑点清晰，获得了专属性较强的定性分析方法，为利尿消炎合剂提供了简便有效的质量控制方法。

［1］刘军红，廖国玲.生物碱提取、分离和纯化的研究进展.时珍国医国药，2007，18(5):1230-1231.

［2］国家药典委员会.(《中华人民共和国药典》:一部).北京:中国医药科技出版社，2010:204.

［3］国家药典委员会.(《中华人民共和国药典》:一部).北京:中国医药科技出版社，2010:280.

［4］胡俊青，胡晓.黄柏化学成分、药理作用的现代研究.当代医学，2009，15(7):139-141.

［5］姚新兰，吴立军.天然药物化学，第4版.上海:人民卫生出版社，2004:380.

［6］中国科学院上海药物研究所.中草药有效成分提取(第2版).上海:上海技术出版社，1998:263.

［7］莫刘基.几种中药对输尿管结石排石机理的研究.新中医，1985，(6):51.

［8］赵世萍，林平，薛智.大金钱草化学成分的研究.中草药，1988，19(6):5-8.

［9］沈联德，姚福润.金钱草化学成分的研究.中国中药杂志，1988，13(11):31-34.

［10］姚新生.有机化合物波谱分析.北京:中国医药科技出版社，2004:75-76.