通脉丸方浓缩液的急性毒性实验

陈天朝 宋薇 王丽 徐丽军

通脉丸为我院国家级名老中医、中国中西医结合学会周围血管疾病专业委员会主任委员崔公让教授的临床经验处方，由制附子、黄芪、两头尖、马钱子、赤芍、丹参、洋金花等数十味中药组合而成，主治风寒湿痹、四肢惊孪、骨节疼痛、痈肿、动脉硬化闭塞症、血栓闭塞性脉管炎等动脉缺血性疾病所致寒凝脉络型脱疽。为了解通脉丸方的毒性，同时也为其毒代动力学的研究提供剂量依据，进行了通脉丸方浓缩液的急性毒性试验。

1 材料与仪器

1.1 动物 小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供。

1.2 药物 制附子(批号:110107产地:四川)，黄芪(批号:100928产地:内蒙古)，当归(批号:101026产地:甘肃)，丹参(批号:110108产地:安徽)，马钱子(批号:110107产地:云南)，两头尖(批号:100913产地:吉林)，陈皮(批号:110108产地:浙江)，赤芍(批号:110105产地:内蒙古)，洋金花(批号:100928产地:江苏)，琥珀(批号:101012产地:云南)，甘草(批号:100928产地:内蒙古)。

1.3 仪器 DT-300A电子天平，上海医用激光仪器厂;MH-3000可调式电热套，北京科伟永兴仪器有限公司;RE5220型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂

2 方法

2.1 灌胃药品的制备 加入处方总量10倍量的40%乙醇，提取2次，每次140 min，合并药液，旋转蒸发器中70℃浓缩制成浓度为4.5 g/ml的药液。根据给药方案的需要进行稀释得到不同浓度的溶液。

2.2 通脉丸方浓缩液小鼠急性毒性预试验 将小鼠适应性喂养3 d后，禁食12 h，不禁水，分为10组，每组4只，雌雄各半。以0.4 ml·10 g灌胃给药，找出引起0%和100%死亡率的致死量范围。

2.3 通脉丸方浓缩液小鼠急性毒性正式试验 将小鼠适应性喂养三天后，禁食12 h，不禁水。按体重随机分为空白组和给药组，每组10只，雌雄各半。由预实验所得出0%和100%死亡率的致死量范围确定正式试验给药组分别灌胃通脉丸方浓缩液 72，90，108，126，144，162 g/kg，空白组给予相同体积的生理盐水。

2.4 观察指标 观察给药后4 h内小鼠的反应情况，然后每天上、下午各观察一次，连续7 d。观察内容包括小鼠的饮食、外观、行为、排泄物等，记录所有小鼠的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆等，对死亡小鼠及时进行尸检。

2.5 数据处理 试验所得数据用 Bliss[1]法求得 LD50及95%可信限，绘制小鼠累积死亡数-时间曲线。

3 结果

3.1 通脉丸方浓缩液小鼠急性毒性预试验结果 通脉丸方浓缩液对小鼠的0%和100%致死剂量分别为54 g/kg和180 g/kg。

3.2 通脉丸方浓缩液小鼠急性毒性正式试验结果

3.2.1 观察记录结果 空白组小鼠给予生理盐水后，7 d内未出现任何异常现象。给药组小鼠给药后均出现不同程度的中毒症状，表现为自主活动减少、竖毛等。死亡小鼠死亡时发生痉挛、全身抖动、抽搐及两下肢直伸、两上肢屈曲性强直、尾僵直、大小便失禁，最后呼吸停止而死亡。死亡小鼠尸检，主要脏器肉眼未见病理改变。小鼠死亡时间分布见图1。

图1 通脉丸方浓缩液不同剂量组小鼠累积死亡数-时间曲线

通过记录发现通脉丸方浓缩液所导致的小鼠死亡多发生于4 h之内，主要集中在灌胃后的2 h内，一般4 h之内不死亡者，各方面体征逐渐恢复正常，未再见死亡。

3.2.2 LD50测定结果 根据各剂量组小鼠给药剂量及死亡率，计算通脉丸方浓缩液LD50及95%可信限，结果见表1。

表1 Bliss法计算半数致死量(n=10)

4 讨论

本实验采用的方法为Bliss加权机率单位法。Bliss法是目前评价最为精确、可靠的LD50测定方法，优点是该方法对剂量分组无严格要求，亦不需要剂量组有0%和100%死亡率。

将本实验中所观察的现象与方中四味毒性成分中毒症状[2-11]进行对比分析，与方中马钱子和洋金花毒性表现相似。将本实验中所观察现象与《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》附录Ⅱ中提供的关于动物急性毒性试验的一般观察结果与可能涉及的器官、组织、系统资料进行对比分析，小鼠灌胃后所出现的惊厥、强直性抽搐、角弓反张现象可能涉及的器官、组织、系统为:神经肌肉、中枢神经系统、自主神经系统。

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