脑卒中后抑郁患者载脂蛋白H水平检测

李 静 郑振雨 宋景贵 李六一 郭 康

1）新乡医学院第三附属医院神经内科 新乡 453002 2）新乡医学院第三附属医院骨科 新乡 453002 3）新乡医学院第二附属医院神经内科 新乡 453002 4）河南省人民医院神经电生理室 郑州 450003 5）新乡医学院第三附属医院肿瘤科 新乡 453002

脑卒中后抑郁症（post-stroke depression，PSD）是脑卒中后常见的并发症之一，以兴趣减退、情绪低落、主动活动减少、自罪自责、睡眠紊乱等为主要表现的情感障碍性疾病［1］，既严重影响了人们的生活质量［2］，同时给社会带来极大负担。目前对于PSD 的诊断必须具备以下两个要素：一是必须有脑卒中这个前提，二是必须同时符合抑郁症的诊断。最新研究表明，载脂蛋白H（Apolipoprotein H，ApoH）与心脑血管性疾病相关，可能参与启动并引发动脉粥样硬化，Profumo等［3］研究发现，ApoH 参与血脂的代谢，可能通过介导细胞免疫反应引发颈动脉粥样硬化，从而引发动脉的各种疾病，而动脉粥样硬化是脑卒中的重要危险因素之一。同时也有研究发现ApoH 与缺血性脑血管病有相关性，在血栓以及合并缺血性脑血管疾病的患者中抗ApoH 的抗体浓度都明显增加，这也提示抗β2糖蛋白Ⅰ抗体可能在血栓形成的病理生理过程中起到一定作用［4］。国内外尚未见有关本ApoH 与PSD 关系的相关研究，本研究旨在通过了解PSD患者ApoH 的水平特点，为PSD 的临床诊断提供新的客观依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 所有病例均为2010-02—2012-10期间新乡医学院第三附属医院神经内科住院的患者共92例。按全国第4届脑血管病学术会议通过的脑梗死诊断标准，均行头颅CT 或MRI检查证实，抑郁症的诊断均符合第3版中国精神疾病 分 类 方 案 与 诊 断 标 准（CCMD-3）［5］。PSD 组46 例，男22例，女24例；年龄42～78岁，平均（65.3±7.2）岁；文化程度：大学12例，中学16例，小学18例；病程4～51.0（18.9±12.4）d。脑卒中非抑郁组46例，男23例，女23例；年龄42～76岁，平均（65.5±10.6）岁；文化程度：大学15 例，中学18例，小学13例；病程3.0～52.0（19.2±13.5）d。既往无高血压史、心血管病史及糖尿病病史。2组性别、年龄和文化程度、病程等比较差异均无统计学意义（P 均＞0.05）。

1.2 ApoH mRNA 的测定 采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-realtime PCR）检测ApoH 基因mRNA表达量。人载脂蛋白H 基因引物使用primer5.0软件设计引物，引物由大连宝生物工程有限公司合成。引物序列如下：上游引物5’-AGAGTATGTCCTTTTGCTGGAATC-3’，下 游 引 物 为5’-GGCTCCATTTTCCTTCCTCAGTG-3’；GAPDH 基因作为内参照，上游引物为5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’，下游引物为5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’。按RNA 提取试剂盒说明书中的操作步骤提取总RNA 后逆转录为cDNA。逆转录反应体系为：M-MLV 5ΧReaction Buffer（5μL），普通型dNTP（1.25μL），M-MLV RT （1μL），Nuclease-Free Water（1.75μL）。实时荧光定量PCR，25μL的反应体系内容如下：核酸染料（SYBRII）12.5μL，上、下游引物各（1μL），cDNA 溶液（6μL），去离子双蒸水（4.5μL）。循环条件运行参数：95.0℃预变性3 min，95.0℃变性25s，58.0℃退火40s，72.0℃延伸1min，共40个循环。将阈值循环数（thresholdcycle，Ct值）倒数与内参基因Ct值倒数相比作为相对表达量进行分析，相对表达量＝（1／目的基因Ct值）／（1／内参基因Ct值），即内参基因Ct值／目的基因Ct值。

1.3 血清ApoH 蛋白水平测定 仪器采用芬兰雷勃MK3全自动酶标仪和上海枫岭生物有限公司FTC-2000荧光定量基因扩增仪；试剂盒采用武汉中美科技有限公司产人ApoH试剂盒（产品编号：E0255 h）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清载脂蛋白H 水平。将血清标本按Apo酶联免疫分析试剂盒说明书操作步骤测定，应用酶联仪在450 nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行分析，数据均进行正态性检验和方差齐性检验，各数据均符合正态分布及方差齐，2组间比较采用独立样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

PSD 组ApoH mRNA 表达量低于脑卒中非抑郁组，而PSD组血清ApoH 水平高于脑卒中非抑郁组，差异具有显著统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 2组患者ApoH 的表达量及血清ApoH 水平比较

3 讨论

随着人口的日趋老龄化，脑血管病的发病率逐年增加，而PSD 是脑卒中后常见的精神障碍疾病，临床症状以持续的情绪低落为主要特征，不仅影响患者预后，而且增加了家庭和社会的负担［6］，增加病死率和脑卒中复发风险，降低患者回归社会的比例［7］。因此，关于PSD 的相关研究越来越受到世界各地人们的关注。PSD 发病机制尚不明确，多认为PSD 的发生与生物、心理和社会因素有关［8］。

ApoH 又称β2 糖蛋白Ⅰ，是载脂蛋白的组分之一，相对分子质量（43～50）×103，是由326 个氨基酸残基组成的单链多肽，主要由肝脏合成，是血脂的组成成分之一。研究发现，在血栓及合并缺血性脑血管疾病的患者中抗ApoH 的抗体浓度均明显增加，这也提示抗β2糖蛋白Ⅰ抗体可能在血栓形成的病理生理过程中起到一定作用。一些研究表明，其与血脂有关［9］，可能参与甘油三酯（TG）和（或）胆固醇（CHO）的代谢，与动脉粥样硬化有关，具体机制可能是通过影响动脉粥样硬化过程而与缺血性脑血管病有关［10］。有研究发现急性动脉粥样硬化性血栓性脑梗死（ACI）患者的ApoH 血清水平与胆固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）呈正相关，与TG 无相关性［11］。

本研究发现：PSD 患者外周血清ApoH 水平高于脑卒中非抑郁组，而ApoE 基因mRNA 表达量低于脑卒中非抑郁组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。研究结果表明PSD 患者ApoH 水平存在异常，外周血清ApoH 水平增高，ApoH基因mRNA 表达量降低。分析此结果可能原因，当PSD 患者外周血清ApoH 水平增时，高水平的ApoH 可引起机体反射性调节，从而使机体单核细胞中ApoH 基因mRNA 表达量降低。

ApoH 与各种缺血性脑血管病的相关临床研究虽然比较多，但有关PSD 患者ApoH 的相关研究国内外未见报道，根据本研究结果推测外周血清ApoH 水平增高可能为PSD的临床诊断提供新的参考指标。关于ApoH 如何具体影响PSD 的发生有待进一步研究探讨。

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