血清可溶性晚期糖基化终产物受体水平与系统性红斑狼疮疾病活动度的相关性

菅夏楠，郑朝晖，于若寒，刘升云，刘章锁

(郑州大学第一附属医院风湿免疫科，郑州 450000)

晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end-products，RAGE)属于免疫球蛋白超家族成员之一，参与多种先天性免疫反应。膜结合形式RAGE结构包含3个区域：1个细胞外区域(由1个Ⅴ型免疫球蛋白样区域和2个C型免疫球蛋白样区域构成)、1个短跨膜区域和1个C端细胞内胞质尾区[1]。其中，Ⅴ型免疫球蛋白样区域介导配体结合，而胞质尾区则负责细胞内信号传导[2]。RAGE能与多种配体结合，如晚期糖基化终产物、S100/钙粒蛋白家族、高迁移率族蛋白-1等[3-5]，激活多种信号传导通路，增强下游效应因子核转录因子Kappa B(nuclear factor Kappa B，NF-κB)的核转移、提高肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达；这些细胞因子能够引发组织炎性反应，参与自身免疫疾病，如类风湿关节炎和系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)的发病[6-8]。可溶性RAGE(soluble receptor for advanced glycation end-products，sRAGE)含有和RAGE相同的细胞外配体结合区域，但缺乏跨膜区域和胞质尾区。因此，只具有配体结合功能，而不具有细胞内信号传导功能。sRAGE可竞争性抑制配体与膜结合形式RAGE结合，从而减弱由NF-κB活化引发的炎性反应[7， 9]，因此又被称为“诱饵”受体。

SLE为高度异质性自身免疫性疾病，以血清中出现多种自身抗体和多系统受累为主要临床特征，临床上通常使用SLE疾病活动指数(SLE diseases activity index，SLEDAI)进行疾病活动度评价。SLEDAI由一系列系统器官的表现组成，临床诊断时需根据既往10 d内患者是否出现不同系统临床表现进行判断并计分，以总分为最终得分。一般认为，SLEDAI≥10分为中等-高度疾病活动期，SLEDAI<10分为低疾病活动-缓解期，临床医师往往根据该得分制定治疗方案。然而，该评分系统并不完美，其缺点首先体现为不具有器官特异性，其次为不能进行分层；仅当器官表现消失时，该积分才能下降，而器官症状的改善并不能改变积分。因此，SLEDAI对疗效评估的敏感性较差，且不能全面评价疾病活动程度。

sRAGE是新近发现的可能与SLE疾病活动度相关的一种大分子。据报道，血清sRAGE浓度在疾病状态时可减少近150%[10-14]。研究证明，血清sRAGE浓度下降和SLE发病机制及疾病严重程度相关；但也有研究提示SLE患者血清sRAGE浓度升高[15]。本研究旨在探索血清sRAGE浓度和SLE疾病活动度及相关临床指标的相关性，判断sRAGE是否能成为评价SLE疾病活动度的可靠指标，以期为制定个体化治疗方案提供依据。

对象和方法

对象和分组

收集2013年6月至2014年6月就诊于郑州大学第一附属医院风湿免疫科和肾病科的SLE患者，所有患者均符合美国风湿病学会制定的SLE诊断标准[16]。根据SLEDAI评分将SLE患者分为活动SLE组(≥10分)和非活动SLE组(<10分)。健康对照组受试者来自同期本院体检中心志愿者。

血清sRAGE浓度测定

应用酶联免疫吸附试验测定血清sRAGE浓度。使用EDTA或肝素为抗凝剂收取血清标本，收集后15 min内以1000转速离心30 min，立刻分析或储存于-80℃备用。使用人类RAGE免疫测定酶联免疫吸附试验试剂盒(R&D Systems， Minneapolis， MN， USA)测定血清sRAGE浓度，在试剂孔中使用单克隆抗体孵育血清标本。sRAGE最低检测浓度规定为4.12 pg/ml。于100 μl的稀释液RD1- 60中加入试剂孔，使用移液器加入50 μl标准品、研究对象样本，室温孵育2 h。冲洗未结合物质后，在试剂孔中加入结合人类RAGE(细胞外区域)酶联多克隆抗体。冲洗任何未结合抗体-酶试剂，加入终止液、染色，颜色深浅与初始结合RAGE剂量成正比，终止染色并进行测量。

实验室指标

血常规、肝肾功能、尿蛋白、抗核抗体、抗双链DNA(double-stranded DNA，dsDNA)抗体和其他自身免疫相关参数等指标。

统计学分析

使用SPSS17.0进行统计分析，采用t检验分析上述数据，采用Logistic回归分析进行临床指标与血清sRAGE浓度相关性的判断。所有数据均以均数±标准差表示，P<0.05为差异有统计学意义。

结　　果

一般资料

SLE组共纳入104例SLE患者，其中女91例，男13例，年龄为13～75岁。非活动SLE组56例，活动SLE组48例。健康对照组20例，男3例，女17例，年龄25～63岁。健康对照组和SLE组年龄、性别、种族均相匹配。

sRAGE浓度比较

SLE组、非活动SLE组、活动SLE组和健康对照组sRAGE浓度分别为(1 060.16±762.59)、(912.06±759.98)、(1 232.96±736.16)、(1 300.42±466.01) pg/ml。SLE组与健康对照组sRAGE浓度差异有统计学意义(Z=-2.891，P=0.004)，非活动SLE组、活动SLE组与健康对照组sRAGE浓度差异有统计学意义(χ2=17.999，P=0.000)。

LSD检验法组间比较发现，活动SLE组血清sRAGE浓度较非活动SLE组升高，差异有统计学意义(P=0.024)；健康对照者组血清sRAGE浓度较非活动SLE组升高，差异有统计学意义(P=0.038)；健康对照组和活动SLE组血清sRAGE浓度差异无统计学意义(P=0.722)。

血清sRAGE浓度在SLEDAI是否≥10(Z=-3.052，P=0.002)、抗ds-DNA抗体滴度是否≥100(Z=-2.276，P=0.023)及有无肾损害(Z=-2.036，P=0.042)间差异具有统计学意义；而在是否接受过抗狼疮治疗(Z=-1.451，P=0.147)和有无合并感染(Z=-1.202，P=0.229)间差异无统计学意义。

相关性分析

血清sRAGE浓度与SLEDAI(r=0.373，P=0.000)、抗ds-DNA抗体(r=0.268，P=0.008)、24 h尿总蛋白定量(r=0.387，P=0.001)呈正相关；与补体C3(r=-0.371，P=0.000)、补体C4(r=-0.280，P=0.004)、白细胞计数(r=-0.238，P=0.020)呈负相关；而与红细胞沉降率(r=0.103，P=0.308)、C反应蛋白水平(r=0.018，P=0.857)、肾脏病理活动指数(r=0.229，P=0.319)、肾脏病理慢性指数(r=0.121，P=0.600)无关(图1)。

讨　　论

本研究发现，SLE患者血清sRAGE浓度比健康对照者低，其在活动SLE患者、非活动SLE患者及健康对照者中总体分布不全相同；组间比较发现，活动SLE患者和健康对照者血清sRAGE浓度均比非活动SLE患者高，但健康对照者和活动SLE患者血清sRAGE浓度无明显差异。血清sRAGE浓度降低可见于冠状动脉疾病[10]、类风湿关节炎[11]、阿尔兹海默症[12]和原发性高血压[13]等，提示血清sRAGE浓度降低可能是由于其本身的保护作用特点及炎性状态消耗造成。Renard等[17]认为，脾脏和/或肝脏可将sRAGE-配体复合物从血液中清除。已经证实，RAGE的重要配体——高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)浓度在SLE患者中增加[18-19]，sRAGE能与其结合形成复合物并引起自身消耗。Zong等[20]认为，sRAGE可能不仅作为RAGE的一种“诱饵”受体发挥抑制作用，它也可能以一种更直接的方式即与细胞表面RAGE结合阻断RAGE二聚体形成，从而阻断信号传导。因此，sRAGE浓度降低可能导致RAGE介导的促炎信号加强[21]，提示RAGE在SLE发病机制中具有重要作用。然而，也有研究表明，SLE患者血清sRAGE浓度比健康对照者更高；与非活动SLE患者相比，血清sRAGE浓度在活动SLE患者中显著升高[15]。造成这种差异的原因可能是药物影响，也可能因为其低样本量所导致(仅含10例SLE患者)。

图1　血清sRAGE与临床指标相关性分析Fig 1　Relation analysis of sRAGE and clinical levels　　　sRAGE：可溶性晚期糖基化终产物受体

本研究发现，血清sRAGE浓度与SLEDAI、抗ds-DNA抗体滴度、24 h尿总蛋白定量具有正相关性，与补体C3、补体C4、白细胞计数具有负相关性，而红细胞沉降率、C反应蛋白、肾脏病理活动指数和肾脏病理慢性指数无相关性。本研究也分析了是否接受抗狼疮治疗对血清sRAGE浓度的影响，但并未发现差异有统计学意义(P=0.147)；但没为进一步分析不同治疗方案和治疗时间对血清sRAGE浓度的影响。既往研究表明，不同疾病患者血清sRAGE浓度受不同治疗方案影响[22-24]。如Pullerits等[11]报道，与未接受改变病情抗风湿药物治疗的类风湿关节炎患者相比，使用甲氨蝶呤者关节腔滑液sRAGE浓度显著增高；但两组患者血清sRAGE浓度差异无统计学意义。Ma等[25]表示，抗狼疮治疗时间长短对血清sRAGE浓度能够产生影响，与未接受过治疗者和健康对照者相比，接受短期(<1个月)抗狼疮治疗的SLE患者血清sRAGE浓度低；而与接受长期(>1个月)治疗患者相比，其血清sRAGE浓度增高；该研究人员推测，sRAGE可能在疾病不同阶段发挥着不同作用。

本研究结果显示，SLEDAI≥10的SLE患者血清sRAGE浓度较SLEDAI<10者升高，且血清sRAGE浓度和SLEDAI具有正相关性；表明血清sRAGE浓度随着疾病活动程度的增加而升高，这符合研究时选取该指标评价疾病活动程度的要求。因此，sRAGE能够评价即时疾病活动度，且操作简便、灵敏性高，在某种程度上优于SLEDAI评分系统，可以成为评价SLE疾病活动度的一项新指标。根据sRAGE浓度可快速评价患者即时病情，为制定个体化治疗方案提供依据。然而，使用血清sRAGE浓度评价SLE疾病活动度仍存在一定的局限性。血清sRAGE浓度易受多种因素影响，如高血糖、高血压[13]、合并感染及动脉粥样硬化[10]等疾病时，血清sRAGE浓度并不能纯粹反应狼疮疾病活动度。因此，如何客观判断血清sRAGE浓度对狼疮疾病活动度的评价价值还需深层次大样本的研究来阐述。

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