HPLC 测定六合定中滴丸中厚朴酚、和厚朴酚的研究

张丽军，郭晨，秦永刚，原燕

(1.陕西中药研究所 咸阳市滴丸制剂工程技术研究中心，陕西 咸阳 712000;2.陕西新药技术开发中心，陕西 西安 710075)

六合定中滴丸是用于胃肠性感冒的药物，具有祛暑除湿，消食导滞的功效，用于夏伤暑湿，宿食停滞，寒热头痛，胸闷恶心，吐泻腹痛［1］，是由广藿香、香薷、厚朴、紫苏叶、檀香、白扁豆、麦芽、稻芽、神曲、木香、陈皮、枳壳、山楂、茯苓、甘草等17 味中药组成的复方制剂。厚朴具有行气消积、燥湿除螨作用，厚朴中有效成分为厚朴酚、和厚朴酚等，二者均具有抗菌、镇痛、抗痉挛、止呕等药理作用。故本制剂选择厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量作为质量标准含量测定的指标，本文研究建立了制剂中厚朴酚、和厚朴酚的HPLC 测定方法。

1 实验部分

1.1 原料与仪器

甲醇，色谱纯;重蒸馏水;甲醇，分析纯;厚朴酚、和厚朴酚对照品(批号:111640-201005)，购于中国药品生物制品鉴定所;实验用药材购于西安市万寿路药材市场。

Waters 液相515 泵2487 检测器;KQ-300VDE超声波;Ag135 电子天平。

1.2 实验方法［2-4］

1.2.1 色谱条件 色谱柱Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm )，流动相甲醇-水(78∶22)，波长294 nm，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。

1.2.2 对照品溶液制备 分别精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品0.52，0.51 mg，置对应10 mL 量瓶中加甲醇适量溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1 mL，置对应10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(1 mL 两种对照品溶液分别含厚朴酚、和厚朴酚0.005 2，0.005 1 mg)。

1.2.3 供试品溶液制备 取滴丸研细，精密称取3 g，置100 mL 三角瓶中，精密加入甲醇25 mL 溶解，称重。超声30 min，冷却后称重，加甲醇补充减失的重量，摇匀，滤过，取滤液即得。

2 结果与讨论

2.1 色谱分析

厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液和供试品溶液HPLC 色谱图，见图1。

图1 六和定中滴丸和厚朴酚、厚朴酚HPLCFig.1 Honokiol，Magnolol in Liuhedingzhong dropping pills by HPLC

2.2 阴性对照实验

按处方量与工艺制备不含厚朴药材的阴性供试样品，按含量测定方法配制阴性供试品溶液，取20 μL进样记录色谱图，阴性样品无干扰。

2.3 线性关系的考察［5］

分别精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品0.52，0.51 mg，置10 mL 量瓶中加甲醇适量溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。依次吸取0.2，0.5，1，2，3 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，按上述条件进行高效液相测定。以对照品浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，得回归方程分别为:厚朴酚Y = 2.030 ×107X－49 483，r =0.999 9(n =5)，厚朴酚在0.010 4 ～0.156 mg/mL 之间呈线性关系。和厚朴酚Y = 2.881 ×107X－80 182，r = 0.999 9(n = 5)，和厚朴酚在0.010 2～0.153 mg/mL 之间呈线性关系。

2.4 精密度实验

精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液(0.005 2，0.005 1 mg/mL)各20 μL，按拟订的方法对同一对照品溶液连续进样5 次，记录峰面积，结果厚朴酚RSD 为0. 94%(n =5)，和厚朴酚RSD 为1.33%(n=5)。

2.5 稳定性实验

精密称取同一批号样品，按照供试品溶液制备方法同法操作，取20 μL 溶液注入液相色谱仪，按拟订的方法分别在0，1，2，3，6，12 h 进行测定，结果表明厚朴酚RSD 为1.22%(n =5)，和厚朴酚RSD 为1.16%(n=5)。供试品溶液在12 h 内测定厚朴酚、和厚朴酚稳定性良好。

2.6 重现性实验

称取同一批号的样品5 份，按照供试品溶液制备方法同法操作，取20 μL 溶液注入液相色谱仪，平行测定5 次，记录峰面积，计算厚朴酚、和厚朴酚的含量。厚朴酚含量为0.041 4%，其RSD 为1.26%(n=5)，和厚朴酚为0.038 0%，其RSD 为1.19%(n=5)。

2.7 加样回收实验［6］

取已知含量(厚朴酚0. 041 4%、和厚朴酚0.038 0%)的样品约3 g，用甲醇溶解并定容至25 mL，分别用5 mL 移液管移取5 份于5 个10 mL 量瓶中，分别精密加入厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液，按拟订的方法进行5 次回收实验，结果见表1、表2。

表1 厚朴酚加样回收实验结果Table 1 Recovery test results of Magnolol

表2 和厚朴酚加样回收实验结果Table 2 Recovery test results of Honokiol

由表1、表2 可知，厚朴酚平均回收率为99.98%，RSD 为1.91%(n=5)、和厚朴酚平均回收率为99.79%，RSD 为1.43%(n =5)。以上结果表明加样回收率良好。

2.8 样品的含量测定

取10 批样品各2 份，分别按照上述方法进行测定，证明该方法可行，重现性好，专属性强。结果见表3。

表3 样品含量测定结果Table 3 Determination results of the samples

3 结论

采用高效液相色谱法对六合定中滴丸中厚朴酚、和厚朴酚进行含量测定，该方法简单，阴性无干扰，分离良好，通过方法学考察表明，制定的测定方法重现性、精密度、稳定性均良好，加样回收率符合要求，整个试验过程可操作性强，能够客观地控制本品的质量，为制剂中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定提供了理论依据。

［1］ 国家药典委员会.中国药典2010 年版(一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:595.

［2］ 王宝琴.中药质量标准与标准物质研究［M］.北京:中国医药科技出版社，1994.

［3］ 阚红玉，赵卫春，孙玉侠，等. 藿香正气滴丸质量标准提高研究［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18(1):72-76.

［4］ 马大龙，万鹏，代龙，等.HPLC 同时测定四正颗粒中厚朴酚、和厚朴酚含量［J］.辽宁中医药大学学报，2014，16(2):54-56.

［5］ 吕峥峥，王会如.HPLC 法测定香砂平胃颗粒中厚朴酚及和厚朴酚的含量［J］.首都医药，2013，20(4):53-54.

［6］ 王汉平，杨志灵，魏桂芳.HPLC 法测定舒胆片中厚朴酚及和厚朴酚的含量［J］. 陕西中医，2013，34(10):1415-1416.