宫颈鳞癌组织中P53、Ki67表达与侵袭浸润的相关性

钱 琳 王 芳 袁丽芳 池堂春 陈小祥

宫颈癌占所有妇科肿瘤的10.0%左右，多数为宫颈鳞癌[1]，其发病早期临床表现不典型，就诊时多为晚期[2-3]。宫颈癌的治疗方法主要包括化疗、放疗、手术等方式，但是很多患者伴随有侵袭浸润，导致治疗效果不佳，也是宫颈癌患者治疗失败及死亡的1个主要原因[4-5]。现代研究表明宫颈鳞癌是多基因共同作用与失衡的结果，通过检测肿瘤细胞特异抗原等进行宫颈癌早期诊断宫颈癌已成为了可能[6]。其中P53基因是公认的抑癌基因，其突变或失活与多种恶性肿瘤的发生、发展相关，特别是P53蛋白过度表达被认为与多种肿瘤的预后显著相关[7]。在肿瘤发生中，P53丧失了保护基因组完整性的功能，导致了其DNA结合核心区域单链残基改变所致[8]。Ki67是目前较为肯定的核增殖标志物，也是预测宫颈炎症和宫颈癌的发生发展中的参考标记物，其表达程度可反映肿瘤细胞的生物学行为[9-10]。本文探讨了宫颈鳞癌组织中P53、Ki67表达与侵袭浸润的相关性，以阐述宫颈癌侵袭浸润的机制，促进改善患者的预后。现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取本院2010年7月至2019年7月本院妇科收治的52例宫颈鳞癌患者作为病例组，同期选择正常无宫颈疾病的妇科患者52例作为对照组。纳入标准：病例组经病理诊断宫颈鳞癌；对照组为因良性病变行子宫切除术的具有正常宫颈组织的患者；年龄30～75岁；临床资料完整；非其他部位转移或复发的宫颈癌病例；本院伦理委员会批准了此次研究。排除标准：妊娠孕妇与哺乳期妇女；组织病理学不明确；未行手术或活检；精神疾病患者。

病例组中年龄35～78岁，平均年龄(54.69±3.19)岁；平均体重指数(22.19±1.49)kg/m2；临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期18例，Ⅲ期22例；分化程度：高分化40例，中分化7例，低分化5例；有侵袭浸润27例；淋巴结转移22例。对照组中年龄26～79岁，平均年龄(55.02±2.85)岁；平均体重指数(23.01±2.20)kg/m2。两组一般在资料差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 P53、Ki67标表达检测

应用美国圣克鲁斯生物技术公司生产的兔抗人P53、Ki67试剂，工作浓度为1∶500。取两组患者的宫颈标本，立即用10%甲醛固定、石蜡包埋，连续切片，厚度为2 μm，采用二甲苯、乙醇进行透明化与脱水处理，镜下观察结果，以磷酸缓冲盐溶液代替一抗作为阴性对照。每张切片随机观察5个高倍镜视野，P53、Ki67染色阳性信号均呈棕黄色。由病理医师参照联合评分病理诊断分级标准进行分级诊断。染色强度阴性为0分，染色弱但强于阴性对照为1分，染色清晰为2分，染色强为3分；阳性细胞数<10%为0分，10%～30%为1分，31%～60%为2分，>60%为3分，上述两种评分相加：0～1为(-，阴性)，2分为(+，弱阳性)，3～4分为(++，中阳性)，5～6分为(+++，强阳性)，(+)、(++)、(+++)为阳性表达。

1.3 调查与内容

调查所有病例组患者的临床资料与病理学资料，记录对照组入选者的一般资料。

1.4 统计学方法

选择SPSS 21.00，计量数据资料以均数±标准差表示，行t检验；计数资料以%表示，用χ2检验，相关性分析采用Spearman分析，影响因素分析采用Logistic回归分析，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 P53、Ki67阳性表达比较

病例组的P53、Ki67表达阳性率为9.6%和80.8%，对照组为65.4%和19.2%，对比差异都有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组P53、Ki67阳性表达比较(例，%)

2.2 宫颈鳞癌中P53、Ki67表达与侵袭浸润的相关性

在病例组52例患者中，侵袭浸润患者P53、Ki67表达阳性率为0.0%和92.6%，无侵袭浸润患者的P53、Ki67表达阳性率为16.0%和60.0%，对比差异都有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同宫颈鳞癌组织中P53、Ki67表达阳性率比较(例，%)

Spearman等级相关分析显示：P53、Ki67表达阳性率与侵袭浸润、淋巴结转移、临床分期、分化程度都有相关性(P<0.05)，见表3。

表3 宫颈鳞癌P53、Ki67表达与临床病理特征的相关性

2.3 影响因素分析

在52例患者中，以侵袭浸润作为因变量，以临床资料、P53、Ki67表达作为自变量，Logistic回归分析显示：P53、Ki67、淋巴结转移为影响宫颈鳞癌组织侵袭浸润的主要因素(P<0.05)，见表4。

表4 影响宫颈鳞癌组织侵袭浸润的主要因素

3 讨论

我国宫颈鳞癌的发病越趋于年轻化[11]。其治疗主要以手术与放疗为主，辅以化疗的综合治疗，但仍有20%左右的患者在治疗后会复发，多数患者在2年内复发[12]。当前研究显示宫颈癌5年生存率在70%，其中无侵袭浸润者达80%～90%，而局侵袭浸润者5年生存率在50%左右，为此侵袭浸润是影响宫颈癌预后的重要因素[13]。现代研究表明肿瘤的发生发展与细胞过度增殖与侵袭，凋亡受抑均相关[14]。

P53蛋白是1种分子量为53kD的蛋白质，失活对恶性肿瘤的形成起重要作用[15]。研究显示P53可以通过突变失去对细胞凋亡的正常调控，从而导致癌变[16]。在宫颈癌的发生、发展中，P53蛋白的聚积抑制了已经癌变的细胞发生凋亡[17]。P53基因功能失活是高危性HPV致宫颈癌发生的1个重要环节，外源性野生型P53基因转染入肿瘤细胞可能会逆转肿瘤细胞的无限增殖[18]。Ki67是目前较为肯定的核增殖标志物，其半衰期短，脱离细胞周期后可迅速讲解为检测肿瘤细胞增殖活性的指标。HPV感染可导致了细胞的增殖的加快，使得Ki67表达阳性细胞核数量显著增多，且随宫颈病变级别升高而表达数量增多[19-20]。本研究显示病例组的P53、Ki67表达阳性率为9.6%和80.8%，对照组为65.4%和19.2%，对比差异都有统计学意义；在病例组52例患者中，侵袭浸润患者的P53、Ki67表达阳性率为0.0%和92.6%，无侵袭浸润患者的P53、Ki67表达阳性率为16.0%和60.0%，对比差异都有统计学意义，表明宫颈鳞癌组织伴随有P53的低表达与Ki67的高表达。

促进肿瘤细胞侵袭及抑制凋亡的细胞机制是当前研究的重点[21]。宫颈癌的侵袭浸润与相关基因的异常表达有关，P53可参与修复外界因素导致的DNA损伤，通过清除有癌变趋势的细胞，从而发挥抑癌作用[22]。P53的过表达已被证明与HPV转化感染的启动有显著相关性，可以促进体内血管内皮细胞分化，产生金属蛋白酶、内皮细胞间质胶原酶，增强血管通透性，促进肿瘤侵袭与转移[23]。本研究Spearman等级相关分析显示宫颈鳞癌组织的P53、Ki67表达阳性率与侵袭浸润、淋巴结转移、临床分期、分化程度都有相关性。

由于各种因素的影响，宫颈癌患者确诊时大多数已为中晚期，多伴随有侵袭浸润性，导致预后比较差[6]。本研究显示Logistic回归分析显示宫颈鳞癌组织的P53、Ki67、淋巴结转移为影响宫颈鳞癌组织侵袭浸润的主要因素。从机制上分析，P53基因异常与宫颈上皮细胞的癌变过程密切相关，宫颈鳞状上皮内病变组织中存在P53基因突变；P53能阻止细胞从G1期进入S期，从而起到抑制细胞增殖的作用。Ki67可诱导细胞周期阻滞，促进受损DNA的堆积，阻碍DNA的修复和细胞凋亡，调节细胞的分化与衰老，从而促进肿瘤血管增生，从而与组织的侵袭浸润显著相关[24-25]。不过由于病例数有限，后续试验研究仍需增大样本量，以进一步验证实验该结论。

综上所述，宫颈鳞癌组织伴随有P53的低表达与Ki67的高表达，与组织的侵袭浸润显著相关，也是导致组织侵袭浸润的主要因素。