自体CIK细胞治疗鼻咽癌对患者肿瘤标志物及免疫功能的影响

任 庆 熊锐华 何玉婵 诸葛金科 陆东兰 蒋小月

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer，CIK)是一群由人体外周血单个核细胞于体外与多种细胞因子混合培养后生成的异质细胞，对肿瘤细胞有专属杀伤效果且不会对正常组织造成损伤，对肿瘤生长有抑制作用，尤其在肿瘤细胞残留和微小转移灶清除上具有显著效果，能抑制癌细胞复发和扩散，并改善患者机体免疫能力[1]。肿瘤患者免疫细胞数量达不到抑制肿瘤细胞增长的标准，故预后差。近年来国内外医学研究者指出，强化人体免疫系统，重建有效免疫应答是继放化疗和手术切除后最有潜力的抗肿瘤方法，自体CIK细胞免疫治疗被高度重视[2]。关于自体CIK 细胞用于鼻咽癌治疗的研究甚少。本研究分析CIK治疗鼻咽癌对肿瘤标志物EB(Epstein-Barr virus，EBV)病毒指标及免疫指标的影响，为今后自体CIK在鼻咽癌中的应用提供依据，研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2018年2月桂林医学院第二附属医院行放化疗的鼻咽癌患者58例，按随机数字表法分为观察组和对照组，各30例。观察组男性21例，女性9例；平均(44.11±5.18)岁；鼻咽癌分期Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分别为2例、9例、19例；病理类型：鼻咽分化型非角化性癌1例，鼻咽未分化型非角化性癌29例。对照组男性23例，女性7例；平均(45.0±4.30)岁；鼻咽癌分期Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分别为1例、11例、18例；病理类型：鼻咽分化型非角化性癌2例，鼻咽未分化型非角化性癌28例。2组上述资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有患者均经影像学、病理组织学等确诊；均签署知情同意书。排除认知障碍、精神疾病者和合并其他恶性肿瘤者。本研究获得桂林医学院第二附属医院伦理委员会批准(伦理编号：2015013)。

1.2 方法

对照组仅行常规放化疗。观察组在放化疗结束后1个月开始行CIK治疗：完成血常规检查，白细胞>8×109/l，或通过注射粒细胞集落刺激因子实现上述条件；采集50 ml静脉血，进行收集和培养，14 d后CIK细胞成熟，数量为(1～100)×109/l，确认无菌后回输。观察组均行4次CIK治疗。

1.3 观察指标

观察回输CIK细胞后患者生活质量改善情况，具体参考肿瘤患者生活质量评分[3]，当分值较既往升高则认为改善。记录治疗结束后7 d 2组体质量增加情况。在治疗结束后7 d和治疗结束后3个月分别观察2组患者EB病毒指标：DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA，检测2组免疫指标Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+。记录随访时间，评估疗效，其中疗效评估参考RESIST体系对实体瘤疗效评估标准[4]：所有靶病灶消失，病理淋巴结段径均<10 mm，为完全缓解；靶病灶直径之和较基线减少≥30%为部分缓解；靶病灶直径之和较基线减少≥20%且<30%，无新发病灶，为好转；靶病灶直径之和较基线减少<20%或增大<20%，无新发病灶，为稳定；所有靶病灶直径之和相对增加≥20%，或新发病灶为进展。总有效率=(完全缓解例数+部分缓解例数+好转+稳定例数)/组例数×100%。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组患者生活质量改善情况、体重增加情况对比

观察组食欲改善率较对照组高，治疗3个月体重增加较对照组明显(P<0.05)，见表1。

表1 2组患者生活质量改善情况、体重增加情况对比

2.2 2组患者肿瘤标志物EB病毒指标对比

治疗结束后7 d 2组患者DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗结束后3个月观察组DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 2组患者肿瘤标志物EB病毒指标对比

2.3 2组患者免疫指标对比

治疗结束后7 d，2组患者Th1/Th2、CD4+/CD8+、CD8+、CD4+、CD3+比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗结束后3个月，观察组上述指标除CD8+外，其余指标均较对照组高(P<0.05)，见表3。

表3 2组患者免疫指标对比

2.4 2组治疗效果对比

观察组29例患者中完全缓解9例，部分缓解14例，好转共2例，稳定0例，进展4例，总有效率为86.21%。对照组29例患者中完全缓解4例，部分缓解15例，好转3例，稳定1例，进展6例，总有效率为79.31%。2组有效率经Fisher确切概率法算出P=0.5074。

3 讨论

上世纪60年代，以研究者Old LJ为首的外国研究小组使用免疫扩散法首次发现EB病毒；此后我国研究者们通过对比鼻咽癌患者与健康人群血清EBV 4种特异性IgG抗体，发现鼻咽癌患者EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA几何平均滴度较健康人群高；EA-IgG阳性率较健康人群高[5]。鼻咽癌病因学研究的深入，进一步证实EB病毒与鼻咽癌发生和发展有关，细胞免疫缺陷是导致鼻咽癌治疗失败的主要原因[6]。有研究者开始研究CIK细胞治疗癌症的价值，本研究发现CIK细胞治疗鼻咽癌具有抑制肿瘤作用，能改善患者免疫功能，提高食欲。下面结合本研究数据进行分析。

本研究中治疗结束后7 d 2组患者DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗结束后3个月观察组DNA、EA-IgG、EA-IgA、VCA-IgA低于对照组(P<0.05)。提示CIK细胞治疗能有效抑制鼻咽癌患者肿瘤细胞。CD3+、CD4+、CD8+等是CIK群体主要效应细胞，近年来许多研究者指出多种肿瘤与T细胞亚群状态比例失调有关，CD4/CD9比值降低与病情严重程度有关；鼻咽癌患者放化疗后常处于免疫抑制状态，免疫功能紊乱，表现为Th1/Th2倒置、CD4+/CD8+比值降低，免疫功能下降，导致治疗失败[7-8]。本研究中观察组回输CIK细胞后，CD4+、CD3+细胞比例升高，CD4+/CD8+比值升高，原本倒置的Th1/Th2回正，这一结果与Peipp、江龙委等[9-10]研究者指出的CIK细胞免疫治疗能改善鼻咽癌患者T淋巴细胞群的结果基本一致。由此可见CIK细胞治疗能改善鼻咽癌患者免疫功能。沈小东、杨永俊等[11-12]研究者发现CIK细胞可经多种途径溶瘤、杀瘤，有较强体外扩增性能，目前研究者们对CIK抗肿瘤的机制研究逐渐深入，通常认为通过以下三大主要途径发挥溶瘤和杀瘤和改善机体免疫作用：①活化的CIK细胞进入人体后能分泌白细胞介素-2、肿瘤坏死因子、干扰素等多种细胞因子，能直接抑制肿瘤细胞增殖，并且调节免疫系统，从而间接灭活肿瘤细胞[13]；②CIK细胞在患者体内经某些淋巴因子作用后，释放大量有细胞毒性的胞质颗粒至胞外，这些颗粒直接破坏肿瘤细胞[14]；③CIK细胞表达FasL具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，由于CIK细胞具有抗凋亡基因表达的作用，因此到达患者体内后能抵抗FasL阳性肿瘤细胞对CIK的反作用，从而持久溶瘤[15]。由此可见，CIK细胞回输体内后，在不损伤患者机体免疫协同功能和结构的情况下，能直接抑制肿瘤细胞，改善患者免疫功能，改善患者生活质量。故本研究中观察组患者食欲改善率较对照组高，治疗后3个月体重增加较对照组明显，P<0.05。本研究中2组治疗总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示在放化疗基础上使用自体CIK细胞回输并不会显著提高疗效。

综上所述，自体CIK细胞回输能有效改善鼻咽癌患者免疫功能，抑制肿瘤细胞，改善其生活质量，如果在此基础上联合其他药物，能否增进疗效，值得进一步深入研究。