EB-DNA检测对鼻咽癌早期诊断及预后评估的临床意义

尚 洁 高 娟 杨 青

鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，是我国高发恶性肿瘤之一，其发病率位居耳鼻咽喉恶性肿瘤之首。数据显示，我国及东南亚地区鼻咽癌发病率较高，约为10/10万，国内广东、广西、湖南、福建、香港、台湾等地区为高发地[1-3]。鼻咽癌发病具有明显的种族、地区和家族聚集现象，全球约80%的鼻咽癌发生于我国，鼻咽癌高发年龄为30～50岁，男性发病率为女性的2～3倍[4-5]。目前的研究指出，鼻咽癌发病机制尚不清晰，但一般认为遗传因素、环境因素、病毒感染等均对鼻咽癌的发生发展有一定影响。EB病毒是疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，基因组为DNA，EB病毒具有在体内外专一性的感染人类及某些灵长类B细胞的生物学特征，约有90%以上的健康成人携带该病毒，目前有较多研究指出，EB病毒的感染与多种肿瘤的发生发展密切相关[6-8]。目前虽然已有研究证实EB病毒与鼻咽癌的发生发展存在联系，但关于EB-DNA检测在鼻咽癌早期诊断及预后判断中价值的研究较少[9-11]。本文作者通过研究发现，EB-DNA检测在鼻咽癌早期诊断及预后判断中具有较重要的临床意义，能够用于评估鼻咽癌分期、远处转移、复发等指标，有可能成为鼻咽癌的重要血清学标志物，现详述如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2015年2月至2018年2月于我院确诊的93例鼻咽癌患者为研究对象，按照病情分别将其分为A组(初诊33例)、B组(放疗后病情持续缓解者20例)、C组(放疗后病情出现远处转移24例)和D组(放疗后出现局部复发者16例)，另选同期于我院接受体格检查的30例健康个体为健康对照组，选取同期于我院确诊为非鼻咽癌的30例患者为病例对照组。

纳入标准：①鼻咽癌患者均经病理学检测并确诊；②意识清晰能够配合实施调研；③病历资料齐全；④调研经医院伦理学会批准实施；⑤患者及其家属对本次调研过程、方法、原理清楚明白并签署知情同意书。排除标准：①合并精神疾患者；②合并严重肝肾功能障碍者；③依从性较差者。剔除标准：①随访期间失访者；②主动要求退出调研者。

1.2 方法

分别采集6组个体外周静脉血5 ml置于EDTA抗凝管中，离心后分离上层血浆，置于-80 ℃条件下冻存，并使用试剂盒提取血浆DNA，操作严格按照说明书实施，并计算不同组别患者血浆EB-DNA含量。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 一般临床资料对比

经评估对比发现，6组个体一般临床资料如性别、年龄等对比差异不具有统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 一般临床资料对比

2.2 不同组别EB-DNA检出率差异性分析

经检测发现，A组患者EB-DNA检出率为93.94%(31/33)，B组检出率为55.00%(11/20)，C组检出率为95.83%(23/24)，D组检出率为93.75%(15/16)，健康对照组检出率为3.33%(1/30)，病例对照组检出率为13.33%(4/13)。对比显示，A、C、D 3组患者EB-DNA检出率明显高于B组、健康对照组和病例对照组(P<0.05)；B组检出率明显高于对照组(P<0.05)。

2.3 不同分期初诊鼻咽癌患者EB-DNA中位拷贝数对比

将A组患者按照T、N、M分期进行对比，发现T3～T4期患者EB-DNA中位拷贝数高于T1～T2期患者，N0～N1期患者EB-DNA中位拷贝数低于N2～N3期患者，M0期患者EB-DNA中位拷贝数低于M1期患者(P<0.05)，如表2所示。

表2 不同分期初诊鼻咽癌患者EB-DNA中位拷贝数对比

2.4 不同EB-DNA拷贝水平鼻咽癌患者预后对比

将33例初诊鼻咽癌患者按照EB-DNA中位数将其分为≥40000拷贝/ml(15例)和<40000拷贝/ml(18例)2组。随访20个月，≥40000拷贝/ml患者无复发生存率为46.67%(7/15)，<40000拷贝/ml患者为88.89%(16/18)，2组对比差异具有统计学意义(χ2=6.906，P=0.02)。

3 讨论

鼻咽癌是一种高发于我国南部地区的恶性肿瘤，临床表现较为复杂，包括鼻出血、头痛、视力障碍、听力下降等，部分患者还会出现脑神经损害。目前鼻咽癌的首选治疗手段仍为放射治疗，但临床实践发现，即使经过合理的放射治疗和规范的综合治疗，部分患者仍会出现局部复发或远处转移[12-14]。及早准确的诊断是提高鼻咽癌患者生存率的基础，目前鼻咽癌常用的复诊手段仍主要为影像学检查，但鼻咽癌患者接受治疗后会出现局部水肿、组织结构紊乱、纤维化、黏膜炎或疤痕，明显改变鼻咽癌患者的CT或MRI征象，影响临床医师对鼻咽癌病程的判断[15]。此外还有研究指出，CT、MRI等影像学检查对远处转移病灶诊断特异性较低，难以早期实施评估[16]。病理学检测仍是鼻咽癌复发及转移诊断的金标准，但一方面复发灶或转移灶标本采集难度较大，尤其是部分黏膜下复发或鼻咽深部复发灶，另一方面病理学检测为侵入性操作，可能会对预后产生一定的不良影响，因而实施便捷性较低[17-18]。

EB病毒是一种于1964年被学者Epstein和Barr培养发现的，该病毒属于疱疹病毒科R亚科，能够感染人和灵长类动物的B淋巴细胞。一般情况下EB细胞感染人后会终生潜伏存在，但部分个体也会出现恶性转化进而形成肿瘤，如淋巴瘤、鼻咽癌等，已有的大量研究表明EB病毒是鼻咽癌的重要诱发因子，在鼻咽癌患者体内常常存在高滴度的抗EB病毒不同抗原的特异性抗体。学者罗欣等[19]的研究指出，BE病毒在B淋巴细胞内会发生增殖，以环状DNA的形式游离于细胞质中，并整合于染色体内，当鼻咽癌细胞死亡后，整合在DNA内的EB病毒片段会释放入血，EB-DNA拷贝数会出现明显上升，该学者认为EB-DNA能够用于鼻咽癌患者病情评估及预后判断中。学者郑传胜等[20]的研究也指出，EB-DNA能够用于鼻咽癌早期诊断、预后判断和疗效监测中，其对鼻咽癌诊断的灵敏度和特异度可达96.00%和93.00%。

本文作者通过设立不同分组的方式，就EB-DNA对鼻咽癌早期诊断及预后判断的临床意义进行了分析。结果显示，鼻咽癌患者EB-DNA的检出率明显高于对照组和其他病例对照组患者，进一步的对比可以发现，接受化疗后出现复发或转移的鼻咽癌患者EB-DNA拷贝数明显高于化疗后持续好转的患者，这些都提示EB-DNA对鼻咽癌诊断具有较强的特异性和灵敏性，可以作为鼻咽癌初筛手段之一。而后本文作者又将鼻咽癌患者按照TNM分期进行了分组对比，结果显示T3～T4期患者EB-DNA中位拷贝数高于T1～T2期患者，N0～N1期患者EB-DNA中位拷贝数低于N2～N3期患者，M0期患者EB-DNA中位拷贝数低于M1期患者，这些结果都提示鼻咽癌患者血清EB-DNA含量与其分期存在一定相关性，分析其原因与罗欣的研究结果一致，为肿瘤细胞死亡后EB-DNA入血所致。学者杜云等[21]的研究则指出，随着鼻咽癌患者病理分期的增加，肿瘤细胞会不断凋亡使EB-DNA入血，使血清EB-DNA水平提升，这对鉴别鼻咽癌分期具有一定参考价值。学者叶倩等[22]的研究则直接指出，EB-DNA与鼻咽癌患者TNM分期相关，EB-DNA浓度越高，患者分期越晚。最后本文作者还就EB-DNA与鼻咽癌预后的相关性进行了分析，通过将初诊鼻咽癌患者按照EB-DNA水平的不同进行分组对比发现，EB-DNA水平较高的患者无进展生存期明显低于EB-DNA水平较低的患者。学者令狐颖等[23]通过将130例鼻咽癌患者按照EB抗体浓度进行分组的方式，发现抗体低、中、高滴度组患者近期放疗有效率分别为90.32%、68.57%和51.56%，平均生存时间分别为(23.78±1.10)、(27.39±2.45)和(31.11±2.10)个月，各组间对比差异具有统计学意义，该学者认为EB-DNA可以用于鼻咽癌患者近期疗效及远期生存情况的评估因素，这与本文的研究结果相一致。

总而言之，EB-DNA检测在鼻咽癌早期诊断及预后判断中具有较重要的临床意义，能够用于评估鼻咽癌分期、远处转移、复发等指标，有可能成为鼻咽癌的重要血清学标志物。