血清PDGF-D表达水平与老年出血性脑卒中患者颅内血肿扩大的相关性

韩非 王颖竹 杨鹏 顾俊怡

(苏州大学附属第一医院 1急诊科，江苏 苏州 215006；2老年科；3神经外科)

出血性脑卒中(HS)又称脑出血，是临床常见的非外伤性脑实质出血，可形成颅内血肿，其在老年人中多有发生，具有较高致残率及死亡率〔1，2〕。血肿扩大在HS后较为常见，是脑持续性出血或再出血，促使血肿不断扩大的过程及现象，可增加HS患者死亡率〔3，4〕。既往研究资料显示，血小板源性生长因子(PDGF)-D是PDGF家族成员之一，其可能参与血管生成、血管重塑、炎症反应和损伤修复等过程〔5〕。方顕文等〔6〕研究发现PDGF在脑出血患者血清中表达水平明显上调，PDGF有助于评估脑出血患者神经功能受损情况，其有望成为早期诊断脑出血的生物学标志物。但PDGF-D在老年HS患者血清中的表达水平与颅内血肿扩大的相关性尚未见到相关报道。本研究观察PDGF-D在HS血肿扩大/未扩大患者中的表达，分析PDGF-D与颅内血肿扩大的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料 2016年6月至2019年8月苏州大学附属第一医院诊治的老年HS患者189例，诊断标准：依据中华医学会神经病学分会制定的《中国脑出血诊治指南(2014)》〔7〕进行HS判定。纳入标准：①所有患者符合HS诊断标准，经脑CT证实；②脑CT复查前未接受过手术治疗；③所有患者研究相关资料齐全。排除标准：①患有脑出血史者；②合并颅内肿瘤、外伤性出血、脑梗死者；③合并长期使用外科治疗者；④合并血液系统、免疫系统、多器官疾病者。血肿扩大判定标准：依据Brott标准〔8〕，比较先后两次脑CT血肿体积，当复查CT血肿体积比前次CT血肿体积超过33%为血肿扩大。按照颅内血肿是否扩大分为血肿扩大组62例及血肿未扩大组127例。其中血肿扩大组：男35例，女27例；年龄61～82岁，平均(69.92±7.15)岁；体重指数(BMI)为18.01～26.27 kg/m2，平均(22.80±2.22)kg/m2。血肿未扩大组：男71例，女56例；年龄60～81岁，平均(70.87±7.94)岁；BMI为17.96～26.20 kg/m2，平均(22.93±2.35)kg/m2。两组性别、年龄、BMI方面差异无统计学意义(P>0.05)。本研究符合伦理学要求，经医院伦理委员会审核、批准，并获得患者家属知情同意，签署知情同意书。

1.2主要试剂与仪器 人PDGF-D酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(货号：DG10421H)购自北京冬歌博业生物科技有限公司上海将来实业股份有限公司；人肿瘤坏死因子(TNF)-α ELISA试剂盒(货号：BMH051)购自上海冠东生物科技有限公司；AMR-100酶标仪(型号：AS-16050-00)购自杭州奥盛仪器有限公司。

1.3临床相关资料收集 所有HS患者发病3 h内就诊，并行CT检查，均符合保守治疗条件。临床观察到HS患者病情发生变化，立即进行头颅CT复查，而病情相对稳定患者于发病24 h时进行头颅CT复查，并于入院时收集患者年龄、BMI、血压、基础病史、白细胞(WBC)计数、凝血酶原时间(PT)、格拉斯哥昏迷评分(GCS)等临床资料。

1.4样本采集与预处理 收集两组肘静脉血3～4 ml于5 ml EP管中，室温下自然凝集，1 750 r/min离心12 min，收集上层血清，分装，于-20℃冰箱中冻存，待检。

1.5ELISA检测血清PDGF-D、TNF-α水平 取出两组受试者冻存血清样本，解冻，严格按照PDGF-D、TNF-α ELISA试剂盒说明书进行检测。

1.6统计学方法 采用SPSS24.0软件行t检验、χ2检验、Pearson相关分析、Logistic回归分析。

2 结 果

2.1两组临床资料比较 与血肿未扩大组比较，血肿扩大组HS患者收缩压、舒张压及GCS评分均明显升高(P<0.05)。见表1。

表1 两组临床资料比较

2.2两组PDGF-D、TNF-α水平、不同时间血肿量及比值比较 与血肿未扩大组相比，血肿扩大组血清PDGF-D、TNF-α水平、复查血肿量(V2)及V2/入院时血肿量(V1)值均明显升高(P<0.05)。见表2。

表2 两组PDGF-D、TNF-α水平、不同时间血肿量及比值比较

2.3血肿扩大患者血清PDGF-D、V2与收缩压、舒张压、GCS评分、TNF-α关系 血肿扩大患者血清PDGF-D水平与GCS评分、TNF-α水平均呈正相关(P<0.01；P<0.001)；V2与入院收缩压、GCS评分、TNF-α水平均呈显著正相关(P<0.01；P<0.001)。见表3。

表3 血肿扩大患者血清PDGF-D、V2与收缩压、舒张压、GCS评分、TNF-α关系

2.4Logistic回归分析颅内血肿扩大的影响因素 以血肿是否扩大为应变量，以收缩压、舒张压、GCS评分、PDGF-D、TNF-α为因变量，行多因素Logistic回归分析，结果显示，收缩压、GCS评分、PDGF-D、TNF-α均为血肿扩大的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响颅内血肿扩大的Logistic回归分析

3 讨 论

HS是多发于老年人的脑血管疾病，易发生颅内血肿扩大现象，且血肿扩大可增加患者死亡风险，影响患者生存质量〔9，10〕。因此，寻找颅内血肿扩大的相关因素，及时监测有关指标，对改善大脑炎症、神经功能及患者生活质量具有积极意义。

PDGF可促进胶质细胞、成纤维细胞、血管平滑肌等多种细胞分裂、增殖，在个体神经系统发育、细胞分化、信号传导等生物学过程中具有重要调节作用〔11，12〕。研究表明，PDGF-D作为PDGF的重要成员，其可能与非高血压性脑出血有关，可能参与并影响脑出血发展过程〔13〕。研究显示，PDGF-D在脑出血后表达水平升高，可增强细胞浸润，诱导促炎因子TNF-α产生，进而增强小胶质细胞活性及中性粒细胞浸润，从而在脑出血炎症过程中发挥促进作用，其具有诊治脑出血的潜在价值〔14〕。研究表明，PDGF-D表达异常与炎症性脑血管疾病相关。本研究提示PDGF-D可能在HS患者发生血肿扩大过程中起重要作用。推测HS可引发脑缺血缺氧、颅内压升高、脑水肿，进而引起大量星形胶质细胞增生，促使PDGF-D分泌，PDGF-D通过血脑屏障进入血液循环；此外，脑水肿可激活血小板、受损内皮细胞，并诱导炎症反应，均会促进PDGF-D表达，PDGF-D与其受体结合后可能影响HS的炎症损伤及血氧供给环节，从而在血肿扩大进展中发挥重要作用。

机体在脑出血后处于应激状态，T细胞、单核巨噬细胞、NK细胞等血清免疫细胞及血管内皮细胞等被激活，合成并分泌炎性因子，炎性因子在调节介导炎症反应中具有重要作用，其也可影响继发性颅脑损伤〔15，16〕。有关研究显示，TNF-α是脑损伤重要的炎性因子，其在脑出血患者中呈高表达，其水平随着脑出血量增加及病情进展呈上升趋势，其可能参与并影响脑出血过程，TNF-α水平有利于病情评估〔17，18〕。此外，钟建斌等〔19〕研究发现TNF-α在急性高血压脑出血患者中表达上调，经破血逐瘀法联合依达拉奉治疗后，其表达水平明显下调，TNF-α可能在急性高血压脑出血的发展过程中发挥促炎作用。以上研究表明，TNF-α表达异常可能与脑出血发病进程密切相关。本研究提示TNF-α可能在血肿扩大进程中发挥作用。推测TNF-α在脑出血后过度释放，其可促进IL-6等炎症因子释放，影响继发性颅脑损伤；此外，TNF-α可通过直接调控胶质细胞、神经元坏死及血管新生等生物过程〔15〕，从而在颅脑血肿扩大中发挥促进作用。

有研究表明，血肿扩大在HS患者发病首日发生率较高，在发病后6 h内发生率最高〔20〕。目前，临床应用CT判定脑出血血肿扩大尚无统一标准，Brott〔8〕标准受到广泛认可。本研究提示在临床工作中，HS患者在入院后当日病情发生变化时，应立即复查CT，检查血肿变化情况，及时采取相应治疗手段。

本研究提示血清PDGF-D水平与GCS评分、TNF-α水平，V2与收缩压、GCS评分、TNF-α水平相互影响，从而协调HS患者发生血肿扩大过程。收缩压、GCS评分、PDGF-D、TNF-α水平升高，均可能使血肿扩大发生风险增加，及时监测上述指标有助于早期评估并控制HS患者病情。