规模肉鸡场饲料中添加中成药及益生源对鸡禽流感及新城疫抗体效价的影响

王会生，王文会，赵四正，杜逢艳，马小兰，韩庆彦

（1.甘肃省礼县畜牧兽医站，甘肃 礼县 742200；2.甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃 兰州 730030）

抗生素或抗菌药物在一定浓度下能抑制和杀灭细菌类微生物，且使用抗生素可以提高料肉比，如20世纪40年代Moore等[1]国外科学家首次报道添加抗生素可以显著提高肉鸡的日增重，降低料肉比。这些年来抗生素作为预防和增重性添加剂在畜牧业的使用范围和剂量都越来越大，但是长期过多地使用抗生素会造成环境污染，尤其是影响畜禽机体免疫力[2]和肠道微生态平衡[3]、降低肉蛋品质和风味[4]，最重要的是造成微生物对抗生素的耐药性增强，使得畜禽疫病防治用药量不断增加，进而造成肉蛋中抗生素药物的残留[5]，对人体健康与食品安全产生危害。对于养鸡业来说，抗生素的使用更为广泛，长期、大量使用抗生素会抑制机体免疫功能下降，发病率增加[6]。研究表明，抗生素长期大量使用可能会干扰机体的免疫球蛋白，降低体内淋巴细胞的有丝分裂[7]，造成机体抵抗力下降。

我国部分中草药具有提高免疫力的作用，其有效成分可分为有机酸类、生物碱类、多糖类、甙类、芳香挥发油类等，这是我国中医学的瑰宝。如黄芪、刺五加、党参、当归、淫羊藿、穿心莲、大蒜、茯苓、水牛角、猪苓等[8]，都有增强机体抵抗力、促进消化吸收的作用。

在饲料中添加中草药防病治病，也是中兽医学的一个研究方向。中草药无耐药性，不会在体内残留，有利于解决使用抗生素造成的耐药性、畜产品药物残留和环境污染等问题。同时利用中草药刺激机体产生一定的免疫力，有利于机体免疫系统产生更多抗体[9]。微生物制剂也能促进动物的消化吸收，对于机体的免疫能力也有影响。本试验选择在其他饲养管理因素相同的条件下，检测不同药物对鸡的免疫抗体效价的影响，为规模养鸡场如何利用中草药等添加剂代替抗生素提供数据支持，同时为如何做好鸡的免疫和饲养管理提供资料。

1 材料与方法

1.1 试验鸡群

雏鸡于2021年3月18日引进，2021年6月22日出售。引进雏鸡均来自四川凉山美姑县某家禽养殖公司，为同一批次的七日龄雏公鸡，品种为青脚麻鸡。共引进2 000只，选择500只进行试验。

1.1.1鸡群分组与用药 将500只雏鸡平均分成5组，饲喂无添加抗生素及免疫增效剂的饲料。试验设1个对照组、4个试验组。试验组分别添加清瘟败毒散、扶正解毒散、牛蟾颗粒、益生源4种药物。其中清瘟败毒散主要成分为黄连、青黛、荆芥、防风、羌活等，按0.3%拌料；扶正解毒散主要成分为板蓝根、黄芪、淫羊藿等，每只鸡按照0.5～1.5 g/d剂量使用；牛蟾颗粒主要成分为人工牛黄、蟾蜍、冰片、黄芩、甘草等，按0.3%拌料；益生源有效成分是枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和酿酒酵母等，按0.3%拌料。其中清瘟败毒散和扶正解毒散由武威新天马生物制品有限公司生产，牛蟾颗粒和益生源由潍坊牧易生物科技有限公司生产，均符合国家兽药生产标准。

1.1.2鸡群的饲养管理 采用封闭式笼养的方式，所有试验鸡群在同一个鸡舍进行饲养，饲养方式相同，自由饮水，自21日龄开始投药，一直到采血后结束。注意饲料在添加中成药时，要确保中成药和饲料完全混合均匀。

1.1.3疫苗注射 鸡群30日龄时，注射禽流感三价苗灭活苗（H5N2亚型，D7株，大华农生物公司），7 d后再注射禽新重组二联活疫苗（哈尔滨维科生物技术有限公司），以上两种疫苗均为配发。

鸡群30日龄时，选择在早晨进行颈部皮下注射0.5 ml上述疫苗，免疫接种时要观察鸡群的健康状况，选择健康鸡。

1.2 试验试剂

采用市售的高致病性禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原（Re-8株）和阳血清（Re-8株）（哈尔滨维科生物技术有限公司，2018007）。新城疫血凝抑制试验抗原和阳性血清（青岛立见生物科技有限公司，010131801）。

1.3 器械及耗材

准备10～200 μl单道、8道和12道移液器各1把，90°和110°一次性V型8×12反应板若干，无菌移液枪头若干。

1.4 待检血清处理方法

在鸡群注射疫苗后19 d在鸡的翅静脉采血，每组至少采集50只鸡的全血，每只3～5 ml。采用全血放置于0～4 ℃冰箱过夜24 h自然析出血清的方法收集血清，进行禽流感和新城疫的抗体效价测定。

1.5 检测方法及抗体合格标准

按照《高致病性禽流感防治技术规范》等动物疫病防治技术规范中的相关规定，抗体检测采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验法，具体按照GB/T 18936-2003《高致病性禽流感诊断技术》和GB/T 16550-2008《新城疫诊断技术》执行，其抗体滴度达到≥4log2为合格，＜4log2为不合格。在具体试验分析中，由于抗体效价判断是人为操作，主观性较大，不利于分析，为了解中成药对于抗体的效价影响，将抗体滴度＜4log2定为不合格，4log2～6log2为合格，＞6log2为良好，以有利于抗体效价的判断。

1%的RBC液的制备：采用当地未注射过高致病性禽流感和新城疫疫苗的3只公鸡，翅静脉采血，制作1%的RBC液，同时测定禽流感和新城疫的抗原效价。严格按照操作规程进行试验，注意要做抗原血凝回归试验，以确保试验的准确性。

虽然注射禽新重组二联苗理论上禽流感抗体和新城疫抗体应该是同时产生的，可实际上，往往其抗体效价峰值不会同时出现，大多数是禽流感抗体效价先达到峰值，新城疫次之，因此选择在免疫注射后19 d进行采血而不是常见的15 d，是为了让两种抗体效价都达到峰值。为了保证抗体效价获得足够的免疫力，采取的是配发疫苗，第一剂禽流感N2亚型疫苗注射7 d后，又加强了一次禽新重组二联苗，以提高抗体的检出率。

1.6 数据统计与分析

本试验数据釆用SPSS19.0进行单因素方差分析，并LSD多重比较。当P＜0.01为差异极显著，P＜0.05为差异显著，P＞0.05为差异不显著。

2 结果与分析

2.1 抗体检测结果

由表1可知，5组的禽流感抗体合格率（合格数/同组样品总数，下同）分别为76%、78%、69.4%、74%和64%，新城疫抗体合格率分别为58%、68%、54%、60%和46%。可以看出中药组的抗体合格率明显高于普通饲料组，在不合格的检测样本里（滴度＜4log2），也可以看出中药组的抗体滴度要高于普通饲料组。具体来说，三种中药试验组产生的禽流感和新城疫的抗体效价相对于对照组差异显著（P＜0.05）,而益生源组相对于对照组差异不显著。这说明在饲料中添加中草药对于肉鸡的免疫系统有一定作用，可促使肉鸡对于注射疫苗产生较强的应答反应，从而产生较强的抗体，而微生物制剂对于机体的免疫增强作用不太明显。

表1 不同饲养组禽流感和新城疫抗体的效价

2.2 抗体情况

通过对250份血清分别进行禽流感和鸡新城疫的血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，每份血清同时检测禽流感和新城疫两种抗体的滴度。试验结果显示，中药组的抗体良好数明显高于益生源组和对照组，说明在提高机体免疫力方面中药的效果要比微生物制剂好，它有助于机体产生较多的抗体。而在3组中药组中，扶正解毒散、清瘟败毒散两组的抗体效价明显高于牛蟾颗粒组，说明清瘟败毒散和扶正解毒散更能够刺激机体产生相对较高的免疫力，让机体在免疫应答中更具优势。因此规模养鸡场应尽量使用以扶正解毒散、清瘟败毒散为基础的中药制剂代替抗生素，既有利于提高鸡的抵抗力，又有利于提高鸡注射疫苗后的抗体产生。

3 结语

为了保障畜牧业的健康发展，在养鸡业中使用中草药代替抗生素是畜牧业的发展方向。甘肃是千年药乡，尤其是陇东南山区，更是一座天然的中药材宝库，有丰富的野生药材，如甘草、当归、大黄、党参、青黛、荆芥、防风、羌活、板蓝根、淫羊藿等，不仅品种大，而且质量好。随着乡村振兴的推进，中草药的人工种植也在加快步伐，产生了不少废弃物及半成品，应充分利用这些资源，筛选出经济、高效益的中草药添加剂，从而推动绿色畜牧业的发展。