加味六君子汤发酵剂对肉鸡生长及免疫功能的影响

王中杰,王宝杰,肖发沂,郑立森,苏 丹

(山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊 261061)

中药发酵作为炮制的重要工艺,是现代微生物技术和传统中药的有机融合,在现代养殖生产中发挥重要的疫病防治作用。研究和实践表明,五倍子、山楂、厚朴等中药发酵后添加于断奶仔猪日粮中,机体内的溶菌酶活性和免疫球蛋白会显著增加,仔猪的腹泻率下降,生长性能提高;青蒿叶渣进行固体发酵后,粗蛋白及双氢青蒿素含量大幅度提升,添加在蛋鸡的饲料中,蛋壳的光泽度改善,粪便细腻,提高了饲料利用率和经济效[1-2]。

六君子汤具有健脾补气、燥湿化痰的功效,在现代肉鸡养殖中发挥了调节肠道菌群、促进机体生长的功能。但六君子汤发酵剂的研究较少,为更好地提高其疗效,本课题组对六君子汤进行了加味研究并制成发酵剂,添加于肉鸡饲料中,测定料肉比、日增重、免疫器官指数、新城疫(ND)抗体效价和血清免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM)等指标变化,旨在探讨其对白羽肉鸡生长性能和免疫机能的作用,为该制剂的进一步研究及应用提供思路和参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 中草药 试验所用中草药有党参、炒白术、茯苓、陈皮、法半夏、柴胡、芍药、炙甘草,均购自潍坊市同仁堂药店,按照君臣佐使原则配伍中草药组方,参照张桂枝发酵复方中草药混菌发酵剂的步骤及方法制备[3]。

1.1.2 试验用动物 健康良好、体重相近白羽肉鸡400只,购自济南斯帕法斯家禽有限公司。将试验鸡随机分为4组,每组设5个重复,每个重复20只,试验期间各组采食、饮水等饲养管理条件相同,符合国家实验动物饲养及管理条例。

1.1.3 主要试剂 鸡新城疫活疫苗(La Sota株),北京信得威特科技有限公司产品;新城疫标准浓缩抗原及标准阳性血清,中国兽医药品监察所提供;IgG、IgA、IgM ELISA检测试剂盒,长春汇力生物技术有限公司产品。

1.1.4 主要仪器 高速离心机、96孔V型反应板、微量移液器、酶标仪、生化培养箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱等。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及给药 空白对照组(A)饲喂基础日粮,中草药对照组(B)添加1.2%未发酵加味六君子汤方剂,试验1组(C)和试验2组(D)分别在饲料中添加0.6%和1.2%加味六君子汤发酵剂。肉鸡6日龄添加试验中草药、发酵,连续使用7 d。免疫程序:各组鸡分别在7日龄、21日龄免疫接种新城疫活疫苗(LaSota株)。

1.2.2 指标检测 按照以下方法分别测定平均日增重、阶段料肉比、免疫器官指数、免疫球蛋白浓度和抗体效价。

平均日增重=周增重量/7;阶段料肉比=饲料消耗量/肉鸡增重量

免疫器官指数=免疫器官重量(g)/试验阶段体重(kg)

免疫球蛋白浓度的测定分别按照试剂盒说明书操作步骤完成,新城疫抗体效价的测定采用微量红细胞凝集抑制试验。

1.2.3 样品采集 试验鸡在8、15、22、29、36日龄时,空腹称重,统计喂料量、体重等数据,采血后颈静脉放血致死,收集脾脏、胸腺和法氏囊免疫器官,置-70℃超低温冰箱保存待用。

1.2.4 统计分析 平均值±标准差表示试验结果,用SPSS26.0统计软件的One-Way ANOVA单因素方差分析试验数据, Dun-can's 进行显著性检验,P<0.05表示差异显著。

2 结果

2.1 对白羽肉鸡平均日增重的影响

15、22、29日龄时各组肉鸡平均日增重差异不显著(P>0.05),36日龄时试验1组、试验2组及中草药对照组差异不显著(P>0.05),但与空白对照组相比校差异显著(P<0.05)(表1)。

表1 加味六君子汤发酵剂对肉鸡平均日增重的影响

2.2 对白羽肉鸡料肉比的影响

各试验组鸡25、22日龄时差异均不显著(P>0.05),29、36日龄时C组与D组相比差异不显著(P>0.05),但与B组和A组相比差异显著(P<0.05)(表2)。

表2 加味六君子汤发酵剂对肉鸡料肉比的影响

2.3 对白羽肉鸡免疫器官指数的影响

4个组肉鸡15日龄时免疫器官指数差异不显著(P>0.05),22日龄时B～D组肉鸡的胸腺指数均明显增高,与A组相比差异显著(P<0.05),29、36日龄时C组肉鸡的全部免疫器官指数均高于A组和B组,且差异显著(P<0.05), 29 日龄时,与D组相比较,C组免疫器官指数差异不显著(P>0.05),36日龄时C组法氏囊指数显著高于D组(P<0.05)(表3)。

表3 加味六君子汤发酵剂对肉鸡免疫器官指数的影响

2.4 对白羽肉鸡新城疫抗体效价的影响

4个组肉鸡在15日龄、22日龄时新城疫抗体效价差异不明显(P>0.05);29日龄、36日龄时B～D组的新城疫抗体效价明显高于A组(P<0.05),C组、D组的新城疫抗体效价明显高于B组(P<0.05),但C组和D组之间无明显差异(P>0.05)(表4)。

表4 加味六君子汤发酵剂对肉鸡新城疫抗体效价的影响

2.5 对白羽肉鸡血清免疫球蛋白的影响

4个组肉鸡IgG、IgA、IgM指标在15日龄时无明显差异(P>0.05);IgG浓度在22日龄时明显升高,与B组和A组相比较,差异显著(P>0.05); B～D组IgA浓度在22日龄时明显高于A组(P<0.05); B～D组IgG和IgA浓度在29日龄时显著高于A组(P<0.05);与A组和B组相比较,C组IgM浓度29日龄时显著升高,差异明显(P<0.05);与A组相比较,B～D组IgG浓度36日龄时显著升高,差异明显(P<0.05),且C组、D组与B组相比差异显著(P<0.05); C组的IgA 浓度明显高于A组和B组(P<0.05)(表5)。

表5 加味六君子汤发酵剂对白羽肉鸡血清免疫球蛋白的影响

3 讨论

本试验以肉鸡脾脏、胸腺和法氏囊指数作为衡量机体免疫机能的重要指标,其数值增加说明肉鸡免疫器官发育良好,免疫机能强[4-6]。试验结果显示,在白羽肉鸡饲料中添加一定比例的加味六君子汤发酵剂,试验鸡的免疫器官指数比中草药对照组显著提高,说明加味六君子汤发酵后可健脾胃、养气血、化湿浊,提高肉鸡免疫器官细胞分裂增殖,提升肉鸡的生产及免疫力。

本试验1组的新城疫抗体效价29、36日龄时明显高于中草药对照组和空白对照组,抗体作为介导体液免疫的重要分子,其效价提高说明该方剂发酵后可提升肉鸡的体液免疫能力,防止传染病的暴发和流行,这与文献[7]研究结果相吻合。在白羽肉鸡饲料中添加一定比例的加味六君子汤发酵剂,机体的IgG、IgA和IgM的浓度显著提高,体液免疫功能显著增强。这与该方剂增强脾胃运化机能有关,进而合成机体免疫球蛋白的能力增加,促进机体体液免疫功能增强[7]。介导体液免疫的主要抗体是免疫球蛋白,具有抗菌、抗外毒素或抗病毒的免疫功能,其含量升高可以增强机体的抵抗能力[8-9]。本研究中加味六君子汤经过发酵后促进机体生长发育、增强机体免疫机能等作用明显提高,生产实践中在肉鸡日粮中以添加0.6%量为宜,可以提高肉鸡养殖效益。