HPV-DNA联合TCT检查对于诊断宫颈疾病的价值及其病理分型研究

孙茂春，康晓琳

(烟台东方医院妇产科，山东 烟台，264000)



HPV-DNA联合TCT检查对于诊断宫颈疾病的价值及其病理分型研究

孙茂春，康晓琳

(烟台东方医院妇产科，山东 烟台，264000)

[摘要]目的研究HPV-DNA联合薄层液基细胞学(thin prep cytologic test，TCT)检查对于诊断宫颈疾病的价值及其病理分型，为慢性宫颈炎的防治及宫颈癌的早期干预提供依据。方法选择2012年9月至2015年12月在烟台东方医院妇科门诊就诊的女性患者761例为研究对象，采用HPV-DNA联合TCT对患者进行筛查，同时进行宫颈组织病理活检，比较不同筛查方法的价值。结果761例患者TCT检查结果中正常或炎症反应565例(74.24%)，TCT检查结果异常者196例(25.76%)，其中包括ASCUS者97例(49.49%)、LSIL者56例(28.57%)、HSIL者41例(21.43%)，SCC者2例(1.02%)。761例患者中HPV-DNA阳性者214例(28.12%)，其中高危型HPV-DNA阳性者149例(69.63%)，低危型HPV-DNA阳性者65例(30.37%)。761例患者中，TCT结果显示细胞学阳性196例，阳性率为25.76%；HPV-DNA结果显示HPV-DNA阳性214例，阳性率为28.12%，HPV-DNA检测方法阳性率略高于TCT，但两种检测方法阳性率比较无显著性差异(χ2=1.082，P>0.05)。对于TCT和HPV-DNA检查任一阳性者共247例进一步行阴道镜和组织活检病理检查，病理学诊断结果提示HPV-DNA检测敏感度及特异度均稍高于TCT检测方法，两种方法联合检测敏感度及特异度均最高。结论TCT和HPV-DNA联合检测在宫颈病变筛查中的广泛应用，可在很大程度上降低宫颈癌的漏诊率，提高诊断效率。

[关键词]薄层液基细胞学检查；人乳头瘤病毒检测；宫颈癌；诊断价值；病理分型

1资料与方法

1.1研究对象

选择2012年9月至2015年12月在烟台东方医院妇科门诊就诊的女性患者761例为研究对象，患者年龄23～59岁，平均37.16±3.44岁，就诊原因包括妇科查体、白带增多、阴道不规则出血、月经失调、同房后出血等，所有患者均进行TCT和HPV-DNA检查，对于TCT和HPV-DNA检查任一阳性者共247例进一步行阴道镜和组织活检病理检查。排除标准：①有阴道镜检查及宫颈活检禁忌症者；②既往有宫颈切除病史及手术史；③既往有盆腔放射治疗史者；④任一检测方法阳性但不同意进行阴道镜检查者。所有患者均知情同意并自愿参加本次研究。

1.2薄层液基细胞学检测

选择月经干净后3～7天检查(绝经者无时间要求)，取材前48小时禁止性生活，检查前3d禁止冲洗阴道、使用阴道内药物。将TCT专用采样刷置于宫颈管内并抵住宫颈，旋转3圈，停留10s，然后将采样刷置入液基细胞保存液中，专用制片机处理成薄层涂片，巴氏染色后进行镜检，细胞学诊断按照国际癌症协会推荐的(2001)分级系统作为诊断标准，分为正常或炎症反应、意义不明的不典型鳞状细胞(atypical squamous cells，ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions，LSIL)、高度鳞状上皮内病变(height of squamous intraepithelial lesion，HSIL)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)。

1.3HPV-DNA检测

使用罗氏-Lightcycler全自动荧光定量PCR检测仪，使用HPVl6/18型核酸检测试剂盒。设临界值对照、阴性对照、强阳性模板经稀释成103、104、105、106、107，用于做标准曲线，阳性者检测结果≥500拷贝。检测13种HPV分型，其中分为高危型和低危型两大类，高危型HPV分型包括8种：HPV16、18、31、33、45、53、56和58；低危型HPV分型包括5种：HPV6、11、42、43和44，高危型HPV病毒合并低危型病毒感染为混合感染。

1.4病理学检查

对337例患者中TCT、HPV-DNA任一检测方法阳性及双阳性者进行阴道镜检查，若阴道镜未发现病灶或图像不清晰者，在宫颈3、6、9、12点处取材活检，若阴道镜图像异常者在病灶最严重部位或可疑部位取材活检，按照2003年WHO《乳腺与女性生殖系统肿瘤病理与遗传学》诊断标准，结果分为：慢性炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌。

水云天苏醒过来，脸上已经显出辞世的倦容。老人睁开眼睛，显现出生命迹象，深情地望着林志。林志坐在床前，轻轻地说：“老师，您有什么事，吩咐我啊！”

1.5观察指标

观察TCT细胞学检测结果、HPV-DNA检测结果，对任一检测方法阳性者经阴道镜宫颈活检进行病理诊断，比较两种检测方法单独检测及联合检测的灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。

1.6统计学方法

所有数据均使用SPSS 18.0统计软件进行分析，计数资料的比较方法采用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1薄层液基细胞学检测结果

761例患者TCT检查结果中正常或炎症反应565例(74.24%)，TCT检查结果异常者196例(25.76%)，其中包括ASCUS者97例(49.49%)、LSIL者56例(28.57%)、HSIL者41例(21.43%)，SCC者2例(1.02%)。与病理检查结果对照后发现，196例TCT检查结果异常者87例(44.39%)为慢性宫颈炎，其次为CINⅠ58例(29.59%)，见表1。

2.2HPV-DNA检查结果

761例患者中HPV-DNA阳性者214例(28.12%)，其中高危型HPV-DNA阳性者149例(69.63%)，低危型HPV-DNA阳性者65例(30.37%)。与病理检查结果对照后发现，214例HPV-DNA阳性者121例(56.54%)为慢性宫颈炎，其次为CINⅠ50例(23.36%)，见表2。

2.3薄层液基细胞学检测与HPV-DNA检查效果比较

761例患者中，TCT结果显示细胞学阳性196例，阳性率为25.76%；HPV-DNA结果显示HPV-DNA阳性214例，阳性率为28.12%，其中TCT及HPV-DNA双阳性者178例(23.39%)。HPV-DNA检测方法阳性率略高于TCT，但两种检测方法阳性率比较无显著性差异(χ2=1.082，P>0.05)，见表3。

2.4不同检测方法敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值等比较

对于TCT和HPV-DNA检查任一阳性者共247例进一步行阴道镜和组织活检病理检查，病理学诊断结果：炎症128例，CINⅠ61例，CINⅡ29例，CINⅢ24例，宫颈癌5例，HPV-DNA检测敏感度及特异度均稍高于TCT检测方法，两种方法联合检测敏感度及特异度均最高，见表4。

3讨论

3.1薄层液基细胞学检测在宫颈疾病筛查中的应用

宫颈癌的发生发展是一个较为漫长的过程，其早期可无症状，当出现接触性出血或者阴道异常流血流液时，多数患者已经到中晚期，宫颈癌的手术或放化疗给女性的身体及心理造成极大伤害。因此，对宫颈癌前病变和早期癌的及时高效筛查是预防和治疗宫颈癌，提高患者生存率，降低其死亡率的关键[4]。临床研究表明，从CIN发展到浸润癌大约需经过8～12年的时间，在未经治疗的CINⅡ-CINⅢ患者中，约有5%～30%可发展为浸润癌，但接近10%～40%的病变可发生逆转，而HPV感染后大约经过20年左右才可能致癌[5]。本研究结果发现，761例患者TCT检查结果中异常者196例(25.76%)，其中最常见为ASCUS者(97例)，其次为LSIL和HSIL，与病理检查结果对照后发现，196例TCT检查结果异常者87例(44.39%)为慢性宫颈炎，其次为CINⅠ58例(29.59%)。而单用TCT检查敏感度和特异度分别为86.65%和62.47%，宫颈相关疾病的诊断中，采用TCT筛查已经比较普遍，但是若将其作为单一检测手段，可能因为操作等原因造成假阳性或者假阴性的出现。因此，不能将TCT作为确诊宫颈癌的唯一诊断依据。

3.2HPV-DNA检测在宫颈疾病筛查中的应用

HPV是一组DNA病毒，高危型HPV主要有16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 型，不同的类型致癌率也有一定的差异。HPV感染好发于年轻女性，大多数是一过性的，可自行消退，仅大约3%患者感染HPV后转为持续状态[6]。HPV感染持续存在1～2年可引起宫颈轻微病变，高危型HPV感染持续存在10～15年部分患者可发展为宫颈癌，因此，HPV筛查对预防宫颈癌有重要意义。本研究结果发现，761例患者中HPV-DNA阳性者214例(28.12%)，其中高危型HPV-DNA阳性者149例(69.63%)，低危型HPV-DNA阳性者65例(30.37%)。与病理检查结果对照后发现，214例HPV-DNA阳性者121例(56.54%)为慢性宫颈炎，其次为CINⅠ50例(23.36%)，单用TCT检查敏感度和特异度分别为82.32%和58.44%。高危型 HPV 检测在预防宫颈癌的方案中越来越受到医务工作者的重视，加上HPV的取材简单方便，在临床上被广泛应用。有研究显示，在宫颈癌患者中，16、18 型的检出率就高于其他型[7]。 因此，高危型 HPV 分型检测对病情的追踪、监测、评价及预后有指导作用。但单独用于宫颈癌的筛查有一定局限性，可能存在假阳性或假阴性，且不能从中知道是否处于持续感染或宫颈是否已致病变及病变轻重。

3.3薄层液基细胞学联合HPV-DNA检测在宫颈疾病筛查中的价值

文献报道，单独使用TCT或HPV-DNA在诊断宫颈疾病筛查中均有一定的局限性，而两者联合应用可提高宫颈癌筛查的价值，王爱春等[8]研究TCT及HC2-HPV-DNA检测对绝经后妇女宫颈癌筛查的应用价值评估，可提高诊断筛选的阳性检出率、诊断符合率、敏感性，有效降低漏诊。本文以宫颈活检病理检查为金标准来判断两种检测方法单独使用或联合应用的价值，结果发现两种方法联合检测敏感度及特异度均最高，提示TCT和HPV-DNA 联合筛查可以互补不足，提高宫颈疾病的检出率及筛查准确程度，其漏诊率低，在临床上适宜大力推广，实现早诊断、早治疗、早预防宫颈癌的发生。

[参考文献]

[1]韩历丽,赵同香,邓小红.宫颈癌筛查工作评价指标的比较研究[J].中华妇幼临床医学杂志(电子版),2014,10(6):757-761.

[2]Pimple S,Muwonge R,Amin G,etal.Cytology versus HPV testing for the detection of high-grade cervical lesions in women found positive on visual inspection in Mumbai India[J].Int J Gynaecol Obstet,2010,108(3):236-239.

[3]付玉梅,张晓坤,梁惠芬,等.HC2-HPV-DNA联合TCT筛查宫颈癌早期及癌前病变的临床分析[J].实用医学杂志,2012,28(11):1823-1825.

[4]Wang S Y,Yang H W,Zhang H T,etal.A surface plasmon resonance-based system to genotype human papillomavirus[J].Cancer Genet Cytogenet,2010,200(2):100-105.

[5]Dahlström L A,Ylitalo N,Sundström K,etal.Prospective study of human papillomavirus and risk of cervical adenocarcinoma[J].Int J Cancer,2010,127(8):1923-1930.

[6]McAdam M,Sakita J,Tarivonda L,etal.Evaluation of a cervical cancer screening program based on HPV testing and LLETZ excision in a low resource setting [J].PLoS One, 2010, 5(10): e13266.

[7]徐兴云,赵蔚,李桂军,等.细胞学联合人乳头瘤病毒杂交捕获检测在宫颈上皮内瘤样病变筛查中应用[J].中华医学杂志,2012,92(35):2 503-2 505.

[8]王爱春,顾依群,王军,等.TCT及HC2-HPV-DNA检测对绝经后妇女宫颈癌筛查的应用价值评估[J].现代肿瘤医学,2011,19(1):133-135.

[专业责任编辑：安瑞芳]

Value of HPV-DNA combining TCT in diagnosis of cervical disease and pathological typing

SUN Mao-chun, KANG Xiao-lin

(Department of Gynecology and Obstetrics, Yantai Dongfang Hospital, Shandong Yantai 264000, China)

[Key words]thin prep cytology test (TCT); human papilloma virus (HPV) test; cervical cancer; diagnostic value; pathological type

[Abstract]Objective To study the value of HPV-DNA combining TCT examination in diagnosis of cervical disease and pathological types, so as to provide basis for prevention of chronic cervicitis and early intervention of cervical cancer. Methods During the period of September 2012 to December 2015 totally 761 female patients visiting the outpatient department of gynecology in Yantai Dongfang Hospital were selected as research objects, and HPV-DNA combining TCT was used for screening. Meanwhile, cervical biopsy was performed to compare different methods. Results Among 761 patients TCT examination results of 565 cases (74.24%) were normal or inflammatory, and those were abnormal in 196 cases (25.76%), including 97 cases (49.49%) of ASCUS, 56 cases (28.57%) of LSIL, 41 cases (21.43%) of HSIL, and 2 cases (1.02%) of SCC. There were 214 cases (28.12%) with positive HPV-DNA results, including 149 cases (69.63%) of high risk type and 65 cases (30.37%) of low risk type. Of 761 patients, TCT results showed positive cytology in 196 cases (25.76%). HPV-DNA results showed that HPV-DNA was positive in 214 cases and the positive rate was 28.12%. The positive rate of HPV-DNA testing method was slightly higher than that of TCT, but two methods were not significantly different in positive rate (χ2=1.082,P>0.05). A total of 247 cases were positive for TCT or HPV-DNA examination, and they further accepted colposcopy and biopsy pathologic examination. Pathological diagnosis results suggested HPV-DNA detection had higher sensitivity and specificity than TCT detection method, and the sensitivity and specificity of combining two methods were highest. Conclusion Combined detection of HPV-DNA and TCT is widely used in cervical lesions screening, and it reduces missed diagnosis rate of cervical cancer to great extent and improves diagnostic efficacy.

[收稿日期]2016-05-17

[作者简介]孙茂春(1964-)，女，主治医师，主要从事妇女保健方面的工作。

[通讯作者]康晓琳，副主任技师。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.05.033

[中图分类号]R711.7

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5293(2016)05-0647-03