高危型HPV 感染者外周血T 淋巴细胞与阴道微生态的相关性

林美群 张燕霞 吴英标

HPV 是一种具有较强致癌性的球状DNA 病毒, 其中高危型 HPV 的致癌性更为强烈［1］。已有文献报道,高危型HPV 的持续性感染是导致子宫颈癌发生的重要原因［2］。并不是所有的 HPV 感染者都会发展成宫颈癌, 部分 HPV 感染者可以通过自身的免疫系统将其清除。因此HPV 感染过程及其发生、发展与机体免疫状态密切相关。由于女性特有的生理构造, 阴道是一种微生态系统。正常妇女的阴道微生态系统维持着一种稳态, 而这种稳态会对子宫颈造成一定的影响, 导致HPV 感染的发生［3］。HPV 感染与女性阴道微生态及免疫状况密切相关, 但后者对 HPV 感染的作用机制目前尚不清楚。在此基础上, 本研究拟采用临床病例对照,对高危型HPV、非高危型HPV 感染人群的阴道微生态及外周淋巴细胞亚群进行检测, 旨在为高危型HPV感染者的防治提供新的思路。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2022 年11 月～2023 年4 月收治的90 例生殖道HPV 感染患者。纳入标准：①有不同程度的白带增加、异味、性状颜色改变、外阴瘙痒等临床表现；②经实验室检查结合临床检查确诊为HPV感染；③入组前1 个月内未接受相关干预治疗；④签署知情同意书。排除标准：①合并生殖系统器质性疾病；②无性生活史；③合并精神类疾病或其他原因无法配合完成研究；④妊娠或哺乳期女性。经医院伦理委员会审批后, 根据《妇产科学》［4］中相关标准, 将HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 共13 种基因型列为高危型, 感染上述13 种HPV 亚型的50 例患者纳入试验组, 感染非高危型HPV亚型的40 例患者纳入对照组。试验组中年龄35～50 岁,平均年龄(41.5±6.1)岁；体质量指数21～27 kg/m2, 平均体质量指数(23.4±2.0)kg/m2。对照组中年龄34～48岁,平均年龄(40.5±5.4)岁；体质量指数20～27 kg/m2, 平均体质量指数(24.0±1.8)kg/m2。两组患者基线数据差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 采集阴道微生态分泌物的具体方法：常规消毒外阴, 窥阴器暴露阴道, 采用一次性无菌采样棉拭子采集阴道后穹窿及宫颈分泌物2份, 置于保存管中迅速送检。使用山东仕达思阴道微生态分析系统进行形态学和功能学检测。制作湿片, 用高倍数相差显微镜动态观察支原体小体、衣原体小体及滴虫等病原体；制作干片, 用革兰染色在油镜下观察乳杆菌和其他阴道菌群分布情况, 结合功能学对患者的阴道微生态进行总体评价。这个步骤可以帮助医生更全面地了解患者阴道内的微生物组成和数量, 从而更准确地诊断和治疗疾病。

外周血T 淋巴细胞及亚群送检至广州金域医学检验中心分析, 具体为：患者入院后, 采集乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血 2 ml, 在美国热电公司(American Technology Corporation)的Pico17 高速离心机(Spico17)下, 以3000 r/min 的转速进行5 min 的离心,获得血浆样品, 并将其放入冰箱保存以待使用。应用美国陶姆逊公司3839 AutoMACSTMPro 多功能流式细胞仪(Flow Flow Cell, 3839)对两组患者的外周血中CD3+、CD4+和CD8+亚 群 进 行 测 定, 并 计 算CD4+/CD8+。本实验试剂盒采用德国默克公司的产品, 根据仪器的使用说明及试剂盒的使用方法进行操作。

1.3 观察指标及判定标准 ①分析HPV 的感染情况以及HPV 亚型分布情况；②阴道菌群阳性情况, 主要为乳酸杆菌、衣原体、解脲支原体和滴虫；③外周血T 淋巴细胞亚群分布情况, 主要包括CD3+、CD4+和CD8+, 并计算CD4+/CD8+；④Nugent 评分, 阴道微生态总体评价使用Nugent 评分进行, 按阴道内杂菌的数目评分, 0 分表示没有杂菌, 提示没有感染性阴道炎风险,评分越高提示杂菌越多, 患感染性阴道炎风险越大, 评分范围0～8 分, 正常参考范围0～3 分, ≥7 分则提示感染性阴道炎。

1.4 统计学方法 使用SPSS18.0 计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t 检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。相关性分析使用Pearson 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 感染情况分布 试验组患者中HPV16 型有19 例, 占38.00%；HPV18 型14 例, 占28.00%；HPV52 型 有8 例, 占16.00%；HPV31 型 有8 例, 占16.00%；HPV56 型1 例, 占2.00%。对照组患者中HPV42 型有16 例, 占40.00%；HPV43 型有6 例, 占32.50%；HPV11 型有4 例, 占10.00%；HPV6 型有4 例,占10.00%；HPV81 型有3 例, 占7.50%。

2.2 外周血T 淋巴细胞亚群分布情况 试验组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于对照组患者, CD8+高于对照组患者, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组患者外周血T 淋巴细胞亚群分布情况比较( ±s)

表1 两组患者外周血T 淋巴细胞亚群分布情况比较( ±s)

注：与对照组比较, aP＜0.05

组别 例数 CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+试验组 50 47.52±4.52a 45.20±3.47a 32.98±2.57a 1.37±0.33a对照组 40 55.68±4.05 51.62±4.31 25.71±3.25 2.01±0.40 t-8.908 -7.831 11.854 -8.318 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 阴道菌群阳性率及Nugent 评分 试验组患者阴道内乳酸杆菌阳性率低于对照组患者, 衣原体、解脲支原体、滴虫阳性率及Nugent 评分高于对照组患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 两组患者阴道菌群阳性率及Nugent 评分比较［n(%), ±s］

表2 两组患者阴道菌群阳性率及Nugent 评分比较［n(%), ±s］

注：与对照组比较, aP＜0.05

组别 例数 乳酸杆菌 衣原体 解脲支原体 滴虫 Nugent 评分(分)试验组 50 17(34.00)a 44(88.00)a 42(84.00)a 45(90.00)a 7.85±1.20a对照组 40 22(55.00) 24(60.00) 22(55.00) 20(50.00) 6.84±0.64 χ2/t 3.991 9.433 9.097 17.723 4.801 P 0.046 0.002 0.003 0.000 0.000

2.4 Nugent 评分与外周血T 淋巴细胞亚群的相关性 分 析 两 组 患 者Nugent 评 分 均 与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈负相关, 与CD8+呈正相关(P＜0.05)。见表3。

表3 Nugent 评分与外周血T 淋巴细胞亚群的相关性分析

3 讨论

HPV 是一种具有高度传染性的 DNA 病毒, 其具有较强的致癌性, 超过90%的宫颈癌患者都会合并高危型 HPV 感染［5］。目前已知的 HPV 亚型有200 余种,其中40 余种具有高度致癌性。根据 HPV 所致宫颈损伤的严重性, 可将 HPV 亚型分为高、中、低3 种, 其中高危型主要有HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56 、HPV58、HPV59 及HPV68 等［6］；中、低风险的HPV亚型则可纳入非高危型。在本次调查中, 宫颈癌高危型 HPV 感染的主要亚型是HPV16 型, 占38.00%, 其次为HPV18 型 和HPV52 型, 分 别 占28.00%和16.00%,这与以往的研究结果［7］相吻合。

本研究发现, 试验组患者的乳酸杆菌阳性率较对照组明显降低, 而衣原体、解脲支原体及滴虫阳性率较对照组高(P＜0.05), 提示阴道菌群失衡与HPV 感染相关, 但具体机制目前尚不清楚。在阴道和肠道中, 乳酸杆菌是一种正常的菌群, 其能抑制体内有害微生物的生长和繁殖。有研究发现, 乳酸杆菌能够激活腔道内的黏膜免疫系统, 从而提高人体的免疫功能, 同时,乳酸杆菌还具有抗肿瘤细胞的功效, 在阴道中生长的正常乳酸杆菌还可以预防阴道癌、宫颈癌等疾病［8］。有国外学者研究证实, 在HPV 感染的人群中, 乳酸杆菌的表达水平明显降低, 提示在HPV 感染的高危人群中, 因乳酸杆菌的缺失, HPV 的感染率明显升高［9］。而厌氧细菌和衣原体、解脲支原体及滴虫的检出率较高, 其对阴道及子宫颈黏膜的损害程度较大, 也会导致HPV 感染风险升高［10］。

本研究结果证实, 试验组外周血T 细胞亚群中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+较对照组明显降低, 而CD8+则明显升高(P＜0.05), 提示高危型HPV 感染患者的免疫功能有所下降。正常的免疫机能可起到免疫监控作用, 对生殖系统的致病微生物进行清除, 而在免疫功能下降的情况下, 对多种有害物质的监控清除能力 下降, 导 致HPV 感染［11］。CD3+、CD4+和CD8+是反应人体免疫状况的关键［12-15］。Nugent 评分是按阴道内杂菌的数目来评分的标准, 反映阴道微生态总体情况［16,17］。Nugent 评分与高危型HPV 的外周血T细胞亚群中CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+都有显著负相关性, 而与CD8+有显著的正相关性。本研究结果显示, 无论对于高危型HPV 感染者还是非高危型HPV 感染者, Nugent 评分均与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈负相关, 与CD8+呈正相关(P＜0.05), 提示阴道微生态与外周血液中T 细胞亚群数量可能存在着密切关系, 二者可能通过相互作用, 共同参与宫颈高危型HPV 感染的发生和进展过程［18-20］。

综上所述, 高危型HPV 感染者的全身免疫功能相对低下, 导致发生阴道菌群紊乱的风险增加, 纠正患者的免疫功能低下及阴道微生态状态均有利于提升宫颈高危型HPV 感染的治疗效果, 改善患者预后。