柴胡龙骨牡蛎汤对慢性应激大鼠的抗抑郁作用

周劲光 杨霄鹏

1)河南大学淮河医院临床教学办 开封 475000 2)郑州大学第二附属医院神经内科 郑州 450014

为探讨柴胡加龙骨牡蛎汤全方、小柴胡汤以及非小柴胡汤部分(即龙骨、牡蛎、桂枝、茯苓、大黄)抗抑郁作用的差别,本实验采用慢性应激的方法造成大鼠抑郁模型,观察不同药物组成对慢性应激引起的动物行为的变化。

1 材料

1.1 药物与试剂 柴胡加龙骨牡蛎汤中各药材(去铅丹)均购自南京市金陵大药房,包括人参、桂枝、半夏、茯苓、黄芩、柴胡、大黄、甘草、牡蛎、龙骨、姜、大枣。

柴胡加龙骨牡蛎汤全方、小柴胡汤和龙骨、牡蛎、桂枝、茯苓、大黄方(龙牡桂苓军)均按原方比例配方。用10倍量水煎煮2次,并滤液蒸干,制备成浸膏冻干粉,柴胡加龙骨牡蛎汤全方、小柴胡汤、龙骨牡蛎军的获得率分别为16.9%、19.8%及12.3%。各冻干粉放于-20℃冰箱里储存备用,临用时用蒸馏水配成所需浓度。

盐酸氟西汀胶囊(Fluoxetine Hydrochloride Capsules,FLU)为加拿大奥贝泰克制药有限公司生产,批号HD0560。1.2 动物 SD大鼠,雄性,体质量180～200 g,由中国药科大学实验动物中心提供。动物分笼饲养,保持昼夜节律,室温(22±1)℃,食水自由。

2 方法

2.1 动物分组、造模及给药方法 所有大鼠适应饲养7d后,用Open-Field法[1]作行为学评分,选择得分相近的90只大鼠随机分为9组,即正常组(Normal);模型组(M ode l);阳性药对照组(FLU,20 mg◦kg-1);CLMD高、低(500、200 mg◦kg-1)剂量组;小柴胡汤高、低(800、320 mg◦kg-1)剂量组;龙牡桂苓军组高、低(200、80 mg◦kg-1)剂量组。除正常组外,其余各组均连续接受各种不同的应激以复制慢性应激抑郁模型。动物模型根据文献[2]方法改进,每天随机选取以下应激中的任意一种:冷水游泳(4℃,5 m in)、热应激(45℃,5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、夹尾(1 m in)、水平摇晃(60 HZ,15 min)和昼夜颠倒等刺激,平均每种刺激各3次,使大鼠不能预料刺激的发生,以避免发生适应性。各组每日上午8:00给药,连续21 d,正常组和模型组给予等量蒸馏水。各组动物于1 d、7 d、14 d、21 d称体质量。

2.2 行为学观察指标

2.2.1 开野实验[3]:所有动物于21 d后1～2 h,置于安静、黑暗的屋子里进行实验。水平运动得分:大鼠置于敞箱中央格,以穿越1格为1分(四爪均进入方格才计数);垂直运动得分:两前爪腾空或攀附墙壁次数。水平活动得分反映大鼠的运动活动性水平;垂直活动得分则反映其兴趣高低。

2.2.2 糖水消耗实验[4]:所有大鼠于实验d 19起禁食水24 h(期间灌胃1次),于20d予食物及1%蔗糖水溶液200m L,观测大鼠在24 h内的饮用蔗糖水溶液量。比较正常组大鼠、模型组以及各给药组大鼠在糖水消耗及糖水偏爱方面的差异。

糖水偏爱(Sucrose Preference,SP)以蔗糖水溶液的消耗量(m L)/总液体的消耗量(m L)×100%表示。

2.3 各组大鼠海马比值的测定 实验最后1 d各组大鼠称质量,股动脉取血处死,取双侧的海马,称质量。取海马与大脑质量的比值,以消除各组体质量差异的影响。

2.4 各组大鼠肾上腺指数的测定 实验最后1 d各组大鼠称质量,股动脉取血处死,剖开腹腔,把肾上腺连同周围少量脂肪组织一起摘出,浸入生理盐水中洗净附着的血液,并将残余的脂肪组织剔除干净,用滤纸吸干表面水份,迅速称质量。

3 结果

3.1 对动物行为学指标的影响

3.1.1 对开野实验的影响:见表1。经过21 d不可预见性慢性应激,模型组与空白组相比较,大鼠的水平运动、垂直运动均明显减少;与模型组相比,氟西汀、柴胡加龙骨牡蛎汤(全方组)高、低剂量组及龙牡桂苓军高剂量组均能明显增加大鼠的水平得分、垂直得分,高剂量小柴胡汤组的水平得分明显增加。

3.1.2 对糖水消耗试验的影响:见表1。模型组与空白组相比,24 h糖水消耗量明显减少;柴胡加龙骨牡蛎汤高低剂量组、龙牡桂苓军高低剂量组、小柴胡汤高剂量组以及氟西汀组可显著增加24 h糖水消耗量。

3.2 对海马比值的影响 见表1。与空白组相比,模型组的海马体积明显减小(P＜0.01),提示慢性应激可造成大鼠海马的缩小。氟西汀组、柴胡加龙骨牡蛎汤高低剂量组以及龙牡桂苓军高低剂量组能明显对抗慢性应激大鼠的海马萎缩。

3.3 对肾上腺指数的影响 见表1。模型组与空白组相比,肾上腺指数明显升高,氟西汀组、柴胡加龙骨牡蛎汤高低剂量组、龙牡桂苓军高低剂量组可明显降低慢性应激大鼠的肾上腺指数,龙牡桂苓军低剂量组的效果尤为明显。

4 讨论

传统中医认为,抑郁症属郁证范畴。由情志不舒,肝气郁结,渐致五脏不和,化火、生痰、瘀阻、耗气、伤阴等而致,临床多从肝脏论治,常用柴胡剂。其中柴胡加龙骨牡蛎汤被认为是最适合于治疗抑郁症的古方之一,甚至有“抑郁状态为柴胡加龙骨牡蛎汤之证”之说[5]。虽然柴胡加龙骨牡蛎汤是由小柴胡汤演变而来的,但是临床上鲜有用小柴胡汤原方治疗抑郁症的报道。抑郁症的病因尚未彻底阐明,目前认为慢性、低水平、长期的应激源是促进抑郁发生、加重病情的主要原因。慢性轻度不可预见性应激抑郁模型就是根据此理论依据建立,其特点是应激因子的多变性和不可预见性,已成为国内外学者探讨抑郁症的发病机制及抗抑郁剂作用机制而广泛应用的动物模型[6]。慢性应激模型中大鼠活动减少、快感缺失与抑郁证患者表现出的情绪低落、兴趣丧失有一定程度的相似性。海马是在众多脑区中被认为与抑郁症的关系最为密切的脑区之一。重症抑郁病人左右侧海马较正常人显著缩小,且缩小程度与抑郁持续时间呈正相关。Rubin等[7]研究发现,与健康者相比,抑郁患者的肾上腺皮质增生约38%,增生的程度与皮质醇的浓度有关,且随着抑郁的恢复,这种增生似乎也随着皮质醇的正常化而逐步消失。

本实验采用慢性应激模型,通过大鼠活动能力、糖水消耗、肾上腺指数以及海马体积的变化,考察了小柴胡汤、柴胡加龙骨牡蛎汤及龙骨牡蛎桂枝茯苓大黄的抗抑郁作用。发现龙骨牡蛎桂枝茯苓大黄与柴胡加龙骨牡蛎汤具有相似的抗抑郁作用,均能提高慢性应激大鼠的水平运动及垂直运动、抵抗慢性应激造成的快感缺失、抑制海马体积的减小以及降低慢性应激大鼠的肾上腺指数,而小柴胡汤则没有表现出明显的抗抑郁作用。实验提示龙骨牡蛎桂枝茯苓大黄部分可能是柴胡加龙骨牡蛎汤抗抑郁的主要有效部分,柴胡加龙骨牡蛎汤中抗抑郁作用的最佳配伍药物组合还有待于进一步的研究。

表1 柴胡加龙骨牡蛎汤及其相关组方对小鼠开野实验、糖水消耗、海马比值以及肾上腺指数的影响

[1] 库宝善.开野实验[M]//徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学.第3版.北京:人民卫生出版社,2001:802.

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[3] Kohler U,Raucac.Effect of BCH325 on open field behavior after chronic stress procedure[J].Peptides,1992,13:141-144.[4] Harro J,Hidkind R,Harro M,et al.Chronicmild unpredictable stress after noradrenergic denervation:attenuation of behavioural and biochemical effects of DSP-4 treatment[J].Eur Neuropsychopharmacology,1999,10(1):5-16.

[5] 金子善彦.柴胡加龙骨牡蛎汤治疗抑郁状态[J].日本医学介绍,1981,11:31.

[6] Pariante CM,Miller AH.Glucocorticoid receptors in major depression:relevance to pathophysiology and treatment[J].Biol Psychiatry,2001,49:391-404.

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