核因子κB、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在肾透明细胞癌中的表达意义及相关性

王 彧 张祖文 胡玉纹(海南医学院附属医院血透室，海南 海口 57002)

肾透明细胞癌内有纤细的血管网，也是肿瘤生长及浸润的重要生物学基础〔1〕。核因子(NF)-κB是具有多种功能的调控因子，能调节机体中多种蛋白和基因的转录与表达，其与脉管生成有重要关系〔2〕。而基质金属蛋白酶(MMP)-9作为一种重要的明胶酶，可以有效调节细胞外基质(ECM)降解，对肿瘤进展有促进作用，近年来人们更多关注MMP-9与肿瘤中血管生成的作用，并证实MMP-9与血管生成的相关性〔3〕。本实验应用免疫组织化学技术检测肾透明细胞癌中NF-κB、MMP-9和血管内皮生长因子(VEGF)的表达特点，并关注三者关系，以期为探讨肾透明细胞癌的发生发展提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 2008年1月至2010年12月我院手术治疗后肾透明细胞癌存档蜡块组织110例为观察组，纳入标准均符合WHO关于肾透明细胞癌的诊断标准，并经病理主治医师阅片确诊。年龄50～79(平均60.4)岁，男59例，女51例。手术前均未进行任何放、化疗。选择距肿瘤边缘6 cm以上的正常肾组织50例为对照组，年龄51～80(平均60.3)岁，男女各25例。两组一般临床特征无明显差别。

1.2 免疫组化检测NF-κB、MMP-9和VEGF蛋白表达及判断标准 NF-κB、MMP-9和VEGF抗体浓缩液均购自北京中杉金桥生物工程公司，按不同比例稀释后进行预实验，选择最佳稀释比例。应用免疫组化SP法进行，实验过程均同一病理技师操作完成，严格按照说明书进行，严格质控。结果均由病理主治医师阅片判读，以细胞质中出现棕褐色细颗粒判定为阳性表达，每张病理切片均随机选择10个400倍高倍视野。以染色强度和阳性细胞率进行综合判断。染色强度判定:无细胞质着色0分，细胞质中着色淡者1分，着色深者2分;阳性细胞率判定:阳性细胞百分率 ＜10%为0分，10% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。最终结果以染色强度×染色细胞的百分率来计算。即0～1分为阴性，≥2分为阳性。

1.3 统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行χ2检验和线性相关分析。

2 结果

2.1 两组NF-κB、MMP-9和VEGF表达阳性率比较 观察组三者阳性表达率明显高于对照组(P＜0.000 1)。见表1。

2.2 观察组NF-κB、MMP-9和VEGF阳性表达率在不同临床病理特征中差别 观察组NF-κB、MMP-9和VEGF阳性表达率与肿瘤体积、Fuhrman分级及TNM分期有关。见表2。

2.3 观察组NF-κB、MMP-9和VEGF阳性表达率的关系 经线性相关性分析，观察组 NF-κB和 MMP-9(r=0.43，P=0.028 4)、NF-κB 和 VEGF(r=0.44，P=0.021 4)、MMP-9 和VEGF(r=0.40，P=0.032 0)表达均呈正相关。

表1 两组NF-κB、MMP-9和VEGF阳性表达率比较〔n(%)〕

表2 观察组NF-κB、MMP-9和VEGF阳性表达率在不同临床病理特征中的差别〔n(%)〕

3 讨论

肾透明细胞癌是一种由胞质透明或嗜酸性的肿瘤细胞构成的恶性肿瘤，是肾实质癌中最常见类型，肿瘤生长时常伴有出血、坏死、囊性变和钙化。近来研究显示肾透明细胞癌是富于血管的肿瘤，有关肿瘤血管生成的促进因子对肿瘤进展具有促进作用〔4〕。肿瘤生长依靠血管生成，而在侵袭和转移过程中，肿瘤细胞必须穿过由ECM和基底膜构成的屏障。当前观察降解ECM的重要成分是MMP，而在此过程中起作用的是MMP家族，MMP-9是一种锌离子依赖的蛋白水解酶，也称明胶酶B，可由肿瘤细胞和间质细胞以酶原形式分泌，并经水解后激活，具有较强的降解基底膜成分的功能，被认为与肿瘤恶性进程、侵袭和转移密切相关〔5〕。VEGF具有强大的基质血管生成促进作用，并可以作为蛋白或基因的桥联作用的关键因子〔6〕。VEGF是由2条相对分子量为23 000单链组成的蛋白质，能直接作用于血管内皮细胞(VEC)，引起内皮细胞增殖。NF-κB作为一种在成熟的B淋巴细胞核中提取的物质，可以和免疫球蛋白κ链基因的增强子κB序列特异性结合，可以参与多种蛋白和基因调控，在多种肿瘤中具有促进作用〔4，7〕。

本实验结果提示NF-κB、MMP-9和VEGF对肿瘤发生有重要促进作用，三者表达均与肿瘤体积、Fuhrman分级及TNM分期有关，因为肿瘤体积、Fuhrman分级及TNM分期不仅是传统的判断肿瘤预后相关的指标，也是指导治疗的重要指标，因此提示对于肿瘤组织进行NF-κB、MMP-9和VEGF联合检测，可能有助于临床判断预后及为临床治疗提供依据。本实验结果提示NF-κB、MMP-9和VEGF具有正向协同作用。NF-κB可能作为上游蛋白，调节MMP-9和VEGF高表达，进而促进MMP-9介导的降解ECM作用，也促进VEGF血管新生的作用，进而促进肿瘤生长及播散。NF-κB还可能作为其调节基因或作用的关键桥梁位点，使VEC凋亡并促进内皮细胞增殖，产生大量肿瘤性新生血管。也有观点显示NF-κB高表达可以有效提示异型细胞增殖旺盛，致使肿瘤细胞挤压周围间质，引起局部张力增大，使微血管受到挤压、变形或扭曲，引起局部组织和细胞缺氧，而低氧环境可以启动癌细胞分泌大量VEGF，进而促进VEC增殖，引起微血管延伸，使微血管密度增高，进而保证肿瘤细胞对氧和营养成分的需要，而增生的VEC又能产生大量VEGF，形成环式循环，刺激内皮细胞高速增殖〔8〕。综上，NF-κB、MMP-9和VEGF在肾透明细胞癌中高表达促进疾病进展。三者联合检测可能对判断预后及指导治疗有一定价值。

1 Oka D，Nishimura K，Shiba M，et al.Sesquiterpene lactone parthenolide suppresses tumor growth in a xenograft model of renal cell carcinoma by inhibiting the activation of NF-kappaB〔J〕.Int J Cancer，2007;120(12):2576-81.

2 Meteoglu I，Erdogdu IH，Meydan N，et al.NF-kappaB expression correlates with apoptosis and angiogenesis in clear cell renal cell carcinoma tissues〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2008;19(27):53.

3 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(4):886-7.

4 Guo R，Chang L，Liu Z，et al.Canonical nuclear factor κB pathway links tumorigenesis of synchronous mantle-cell lymphoma，clear-cell renal-cell carcinoma，and GI stromal tumor〔J〕.J Clin Oncol，2011;29(10):e257-61.

5 刘爱东.基质金属蛋白酶-9在胃癌中的表达及意义〔J〕.现代中西医结合杂志，2011;20(18):2226-7.

6 刘爱东.流式细胞术检测胃癌中血管内皮生长因子的表达及意义〔J〕. 中国中医药咨讯，2011;3(5):219，184.

7 Pantuck AJ，An J，Liu H，et al.NF-kappaB-dependent plasticity of the epithelial to mesenchymal transition induced by Von Hippel-Lindau inactivation in renal cell carcinomas〔J〕.Cancer Res，2010;70(2):752-61.

8 沈艳萍，卢国元，乔 青，等.NF-κB、VEGF和CD105在肾癌中的表达及其与血管生成的关系〔J〕.山东医药，2010;50(25):83-4.