联合检测血清CT-IgG60及CHSP60在筛查输卵管不孕中的价值

田红菊，陈建林，施晓波，周　 妮

(1.湖南省职业病防治院妇科，湖南 长沙 410007；2.中南大学湘雅二医院生殖中心，湖南 长沙 410007)



联合检测血清CT-IgG60及CHSP60在筛查输卵管不孕中的价值

田红菊1，陈建林2，施晓波2，周 妮1

(1.湖南省职业病防治院妇科，湖南 长沙 410007；2.中南大学湘雅二医院生殖中心，湖南 长沙 410007)

[摘要]目的探讨联合检测血清沙眼衣原体免疫球蛋白(CTIgG)及衣原体热休克蛋白60，(CHSP60)在初步筛查输卵管不孕中的临床价值。方法收集2011年10至2012年5月在中南大学湘雅二医院和湖南省职业病防治院妇科经腹腔镜诊断的33例输卵管不孕患者(研究组)和15例正常盆腔非输卵管因素不孕患者(对照组)的血清，用酶联免疫法检测CTIgG及CHSP60，分析单个CTIgG、CHSP60指标及联合指标筛查输卵管不孕的灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及约登指数。结果研究组和对照组中CTIgG、CHSP60的阳性率分别为57.58%(19/33)、6.67%(1/15)和54.55%(18/33)、6.67%(1/15)，研究组CTIgG和CHSP60阳性率均高于对照组，经比较差异均有统计学意义(χ2值分别为10.996、9.885，均P<0.05)。研究组中CTIgG、CHSP60的灵敏度和特异度分别为57.58%、93.3%和54.55%、93.3%；两者联合后检测的灵敏度为80.72%，特异度为87.04%，阳性似然比为6.23，阴性似然比为0.07，约登指数为0.68。结论联合检测血清CTIgG及CHSP60在初步筛查输卵管不孕中是一个较好的无创血清学指标，特别是排除非输卵管不孕是一个较好地选择。

[关键词]沙眼衣原体免疫球蛋白；衣原体热休克蛋白60；输卵管不孕；腹腔镜

在不孕症原因中，输卵管因素约占40%；有文献报告最高达53.85%，其中继发性不孕中输卵管因素高达72.07%[1]。因此在女性不孕患者中判断输卵管状况是一个必要的常规步骤。目前被公认的检查方法是子宫输卵管造影术，其对于输卵管不孕患者而言在显示子宫形态及输卵管通畅程度中是较好地选择，但对于非输卵管因素不孕患者来说是一个创伤性检查。本研究通过检测血清沙眼衣原体免疫球蛋白(Chlamydia trachomatis IgG，CTIgG)和抗衣原体热休克蛋白60抗体(Chlamydia heat shock protein 60，CHSP60)，在已行腹腔镜手术证实的输卵管不孕患者及非输卵管不孕患者中的表达，探讨联合检测CTIgG和CHSP60作为初步判断女性不孕患者输卵管状况的无创血清学指标的情况。

1材料和方法

1.1研究对象

收集2011年10至2012年5月在中南大学湘雅二医院和湖南省职业病防治院妇科经腹腔镜手术诊断为输卵管不孕患者(研究组)33例，年龄21～41岁，平均(28.58±6.22)岁，不孕时间为1～8年；输卵管不孕诊断标准指输卵管病理受损(包括输卵管阻塞伴或不伴输卵管积水、闭锁或粘连)，术中确诊只有输卵管因素导致的不孕患者，排除输卵管结扎术、合并子宫内膜异位症、阑尾炎导致盆腹腔炎症；术前排除排卵障碍、宫腔粘连及男方不孕。选择同期经腹腔镜手术后诊断具有正常盆腔及正常输卵管的非输卵管因素不孕患者(对照组)15例的血清标本，年龄21～41岁，平均(27.67±6.56)岁；不孕时间为2～7年，15例患者中因术前子宫输卵管造影术(hysterosalpingography，HSG)异常行手术者9例，因多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)或不明原因不孕行诊断性腹腔镜手术6例。

1.2研究方法

1.2.1标本的采集

取每个对象肘静脉血5mL，室温血液自然凝固10～20分钟，离心20分钟左右(2 000～3 000转/分)，离心后收集血清置于-80℃待测。

1.2.2检测方法与试剂

采用酶联免疫法检测CTIgG及CHSP60Ab。酶联免疫分析试剂盒购于上海恒远生物科技有限公司。检测严格按照说明书操作。

1.2.3检测评价指标

分析CTIgG及CHSP60分别在研究组和对照组中的阳性率；进一步分析CTIgG和CHSP60单个指标及联合指标在经腹腔镜手术证实的48例患者中的灵敏度、特异度、阳性预测值(positive predict value，PV+)、阴性预测值(negative predict value，PV-)及约登指数。

1.3检测结果分析方法

1.3.1平行联合诊断试验

判断原则为两种检测方法中任一阳性即判断为阳性。

1.3.2诊断检测评价指标

阳性预测值是试验诊断为阳性者，确诊为患者的概率。阴性预测值是试验诊断为阴性者，确诊为非患者的概率。似然比(likelihood ratios LRs)：比较阳性预测值及阴性预测值，可不受人群中患病率的影响，因此能用于比较不同人群中的同一试验，或同一疾病的不同试验的比较。阳性似然比是真阳性率与假阳性率之比；阴性似然率是假阴性率与真阴性率之比。阳性似然比=灵敏度/1-特异度；阴性似然比=1-灵敏度/特异度。似然比分值分类如下：阳性似然比2～5分提示一个较好的临床试验，5～10分提示为好的试验，>10分提示为极好的试验；阴性似然比0.5～0.2分提示为较好的试验，0.2～0.1提示好的试验，<0.1提示为极好的试验。约登指数(YI)=灵敏度+特异度-1。约登指数在-1～1之间，其值越大，说明诊断试验的真实性越好，当约登指数≤0时，该诊断试验无任何临床应用价值。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0软件，计数资料用率表示，两组间率的比较采用卡方检验和秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组的沙眼衣原体免疫球蛋白和衣原体热休克蛋白60阳性率检出情况

研究组的CTIgG和CHSP60阳性率均高于对照组，经比较差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

表1两组的CTIgG与CHSP60阳性率比较结果[n(%)]

Table 1 Comparison of positive rate of CTIgG and CHSP60 between two groups[n(%)]

2.2沙眼衣原体免疫球蛋白和衣原体热休克蛋白60单个及联合检测的各评价指标情况

CTIgG和CHSP60联合检测的灵敏度、约登指数均分别高于单个检测结果；CTIgG和CHSP60联合检测的特异度、阳性似然比、阴性似然比均分别低于单个检测结果，见表2。

表2CTIgG和CHSP60单个与联合检测后各评价指标的结果

Table 2 Results of evaluation indicators of single or joint detection of CTIgG and CHSP60

3讨论

3.1沙眼衣原体免疫球蛋白与输卵管不孕的关系

自20世纪90年代以来，沙眼衣原体已超过淋球菌成为泌尿生殖道感染性疾病常见的性传播疾病。沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，CT)感染后侵犯宫颈管黏膜、子宫内膜和输卵管黏膜，可引起宫颈管炎、子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管积水，由于输卵管出现瘢痕、阻塞，可导致不孕症或输卵管妊娠。无症状生殖道沙眼衣原体是造成病原体广泛传播和形成慢性感染，并进一步发生不可逆的纤维化而导致严重后果的主要原因。目前其致病机制尚不十分清楚，目前普遍认为输卵管局部组织的持续性及反复沙眼衣原体感染难以清除是沙眼衣原体感染导致输卵管损伤的主要原因。有研究观察女性生殖道感染CT后，CTIgG在体内至少持续4～7年不会消失。故CTIgG可作为沙眼衣原体持续性或既往感染的证据。本研究中，研究组CTIgG阳性率显著高于对照组，且差异有统计学意义，提示CTIgG与输卵管不孕相关。在有关研究中亦支持衣原体感染与输卵管不孕明显相关[2]，并建议对输卵管不孕进行早期血清学筛查以便及时治疗。Lardenoije等[3]研究认为，对于评估输卵管病理状况而言，沙眼衣原体抗体试验被认为是一种便宜而简单的筛查方法，其研究中显示CTIgG抗体试验阳性预测值为58%，阴性预测值为92%，CTIgG抗体试验被认为是排除输卵管病理的一个较好的方法。本研究中CTIgG的阳性预测值为95.00%，阴性预测值为50.00%。本研究中阳性预测值较高，与Lardenoije等[3]报道的阴性预测值较高不一致，其可能与本资料中选择的研究对象为腹腔镜已诊断的输卵管不孕患者进行回顾性研究方法有关。

3.2沙眼衣原体热休克蛋白60与输卵管性不孕的关系

女性泌尿生殖道感染CT后可诱发机体产生免疫防御反应,在对病原体进行清除的同时，也会给机体造成病理损伤，这是导致输卵管不孕、异位妊娠等严重并发症的主要可能致病机制。沙眼衣原体导致输卵管不孕的致病机制与热休克蛋白的产生及其免疫学效应密切相关。CHSP60可能是导致女性不孕的免疫病理发生的关键介质之一。本研究显示CHSP60在输卵管不孕患者中阳性率为54.55%，对照组中仅有6.67%，两组有显著性差异，提示CHSP60与输卵管不孕相关，CHSP60可能参与了对输卵管的损伤。黄健怡[4]报道CHSP60在输卵管不孕中阳性率占46.43%，本研究中高于其阳性率可能由于诊断输卵管不孕的方法不完全相同有关。

另外本研究结果显示：若作为输卵管不孕筛查试验，血清CHSP60有54.55%的灵敏度及93.30%的特异度；阳性似然比及阴性似然比分别是8.14和0.49，提示检测血清CHSP60对筛查输卵管不孕是一个较好的方法。在Rodgers等[5]的研究中显示，预测衣原体相关性输卵管不孕中CHSP60的灵敏度为71%，特异度为82.6%。本研究中CHSP60在筛查输卵管不孕的灵敏度稍低于其值，但特异度高于其值，这可能与本研究所采用的试验方法不完全相同有关。

3.3沙眼衣原体免疫球蛋白和衣原体热休克蛋白60联合检测筛查输卵管不孕的价值

由于CT感染2～3周后血清中才可检出IgG抗体，而部分患者感染CT后并不产生抗体或仅产生少量抗体，此时也可能显示检测阴性结果，且微量免疫荧光法检测CT重复性差，故Domeika等[6]不建议单独将IgG抗体用于CT的诊断。

CHSP60是沙眼衣原体引起免疫反应和输卵管免疫病理损伤的关键抗原。CHSP60反应是持续或重复衣原体感染的标志。本研究通过检测代表持续或重复衣原体感染的血清标志物CHSP60，并联合CTIgG的检测来相互补充作为输卵管不孕的筛查手段。本研究结果显示，在预测输卵管不孕诊断效能上，若分别单独检测CHSP60及CTIgG，CHSP60的灵敏度为54.55%、特异度为93.30%，阳性似然比为8.14、阴性似然比为0.49；CTIgG的灵敏度为57.58%，特异度为93.30%，阳性似然比为8.59，阴性似然比为0.45。两者比较具有相同的特异度，在阳性预测方面提示是个较好的方法，但在灵敏度及阴性预测方面均欠佳；但若将两个指标联合检测，其灵敏度可提高到80.72%、特异度为87.04%，阳性似然比为6.23，阴性似然比为0.07。阳性似然比在5～10间，阴性似然比<0.1，在阳性预测及阴性预测方面皆为较好的方法，尤其是在阴性预测值方面是一个极好的诊断试验结果。结合临床分析可考虑将CHSP60和CTIgG联合血清学检测指标作为非输卵管因素不孕患者排除输卵管病变的一个较好的筛查手段。这与蒋敏等[7]报道的两种联合检测可显著提高灵敏度至87.3%的结果一致。

综上，本研究结果显示：通过对CTIgG和CHSP60联合检测，对于初诊不孕患者可提高筛查输卵管不孕的敏感度，对非输卵管因素不孕患者作为排除输卵管不孕是一个简单、无创、方便、价廉、可行的血清学指标。本资料由于样本数较小，且为回顾性分析，其价值还有待更大样本数及前瞻性研究进一步证实。对于衣原体相关输卵管不孕患者，许多其他体液免疫、细胞免疫和众多细胞因子亦参与其中，至于是否能找到更多、更好、更全面、更价廉无创筛查输卵管不孕的因子还有待进一步探讨。对于输卵管不孕患者，沙眼衣原体感染只是其中因素之一，还有其他感染相关因素也值得探索。

[参考文献]

[1]黄江涛,唐运革,王奇玲,等.广东省新婚夫妇不孕症流行的横断面研究[J].中国计划生育学杂志,2010,18(12):721-725.

[2]Surana A, Rastogi V, Nirwan P S.Association of the serum anti-chlamydial antibodies with tubal infertility[J].J Clin Diagn Res,2012,6(10):1692-1694.

[3]Lardenoije C M,Land J A.Chlamydia antibody testing for tubal factor subfertility [J].Ned Tijdschr Geneeskd,2007,151(36):1981-1985.

[4]黄健怡.血清沙眼衣原体及其热休克蛋白60抗体反应与输卵管性不孕的相关性[J].中外医学研究,2013,11(12):39-40.

[5]Rodgers A K, Budrys N M, Gong S,etal.Genome-wide identification of Chlamydia trachomatis antigens associated with tubal factor infertility[J].Fertil Steril,2011,96(3):715-721.

[6]Domeika M, Savicheva A, Sokolovskiy E,etal.Guidelines for the laboratory diagnosis of Chlamydia trachomatis infections in East European countries[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2009,23(12):1353-1363.

[7]蒋敏,孟艳辉,何聚莲,等.沙眼衣原体相关抗体在筛查输卵管性不孕中的应用探讨[J].热带医学杂志,2014,14(1):64-66.

[专业责任编辑：吕淑兰]

[收稿日期]2015-08-24

[基金项目]湖南省自然科学基金资助项目(2015JJ4071)

[作者简介]田红菊(1975-)，女，副主任医师，硕士，主要从事生殖内分泌与不孕不育的研究。

[通讯作者]陈建林，副教授。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.009

[中图分类号]R711.6

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5293(2016)04-0442-03

Clinical value of joint detection of serum CT-IgG60 and CHSP60 in the screening for tubal infertility

TIAN Hong-ju1, CHEN Jian-lin2, SHI Xiao-bo2, ZHOU Ni1

(1.Department of Gynecology, Hunan Prevention and Treatment Center for Occupational Diseases, Hunan Changsha 410007, China;2.Reproductive Center, Second Xiangya Hospital of Central South University, Hunan Changsha 410007, China)

[Abstract]Objective To investigate the clinical value of joint detection of serum Chlamydia trachomatis IgG (CTIgG) and Chlamydia heat shock protein 60 (CHSP60) in the preliminary screening for tubal infertility. Methods Serums were collected from 33 cases of patients with tubal infertility (study group) and 15 cases of infertile patients with normal pelvic cavity and non-tubal factors (control group). All those patients were diagnosed at the Second Xiangya Hospital of Central South University or gynecology department of Hunan Prevention and Treatment Center for Occupational Diseases by laparoscope from October 2011 to May 2012. Enzyme-linked Immunosorbent Assay was used to detect CTIgG and CHSP60. Single or joint detection of CTIgG and CHSP60 were carried out to explore the sensitivity, specificity, positive likelihood ratio, negative likelihood ratio and Youden index of the screening for tubal infertility. Results The positive rate of CTIgG in the study group and control group was 57.58% (19/33) and 6.67% (1/15), respectively. In addition, the positive rate of CHSP60 in the study group and control group was 54.55% (18/33) and 6.67% (1/15), respectively. Thus, the positive rate of CTIgG and CHSP60 in the study group was higher than that of the control group, and the difference was statistically significant (χ2 value was 10.996 and 9.885, respectively, both P<0.05). The sensitivity and specificity of CTIgG in the study group was 57.58% and 93.3%, respectively. Besides, the sensitivity and specificity of CHSP60 in the study group was 54.55% and 93.3%, respectively. The sensitivity, specificity, positive likelihood ratio, negative likelihood ratio and Youden index of joint detection was 80.72%, 87.04%, 6.23, 0.07 and 0.68, respectively. Conclusion Joint detection of serum CTIgG and CHSP60 is a relatively good and non-invasive serological indicator in the preliminary screening for tubal infertility, especially for the exclusion of infertility of non-tubal factors.

[Key words]Chlamydia trachomatis immunoglobulin (CTIgG); Chlamydia heat shock protein 60 (CHSP60); tubal infertility; laparoscope