高危型人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒-Care HPV用于宫颈癌及癌前病变筛查的临床价值

方　婧，洪　颖

(南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科，江苏 南京 210008)



高危型人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒-Care HPV用于宫颈癌及癌前病变筛查的临床价值

方婧，洪颖

(南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科，江苏 南京 210008)

[摘要]目的评价care HPV用于宫颈癌及癌前病变筛查的临床价值。方法收集2010年至2012年南京鼓楼医院妇科就诊的年龄在30～59岁之间的妇女宫颈样本，行care HPV、第二代杂交捕获技术(HC2)、HPV聚合酶链反应(HPV-PCR)及宫颈液基细胞学(TCT)检查，TCT≥ASC-US者行阴道镜宫颈活检及必要时宫颈管诊刮，以组织病理学为金标准。病理诊断≥CIN2者为高危病变组，炎症/CIN 1为良性病变组。结果共收集404例有效样本。高危组42例、良性组50例，正常组312例。care HPV和HC2检测结果的一致性为Kappa=0.833(P<0.0001)，一致率93.81%；care HPV和HPV-PCR检测结果的一致性为Kappa=0.707(P<0.0001)，一致率88.12%；care HPV检出≥CIN 2的灵敏度为85.71%，特异度为83.15%。结论care HPV与HC2、HPV-PCR试剂具有高度一致性。care HPV在检出HPV感染上具有很好的灵敏度和特异性，检测耗时短，有望成为医疗资源相对贫乏地区子宫颈癌及癌前病变筛查的主要方法。

[关键词]人乳头瘤病毒(HPV)；care HPV检测；宫颈癌；宫颈癌前病变

宫颈癌是导致女性死亡的常见肿瘤之一，2012年全球宫颈癌发病人数52.8万，年死亡人数26.6万。随着宫颈癌筛查技术的发展和普及，在发达国家，宫颈癌的发病率和死亡率在过去50年里降低了75%，而85%的宫颈癌发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例在13万以上[1]。宫颈癌筛查以细胞学为基础，而细胞学检测技术人员需经长期严格培训才能稳定、准确判别结果，在卫生资源较少的国家和地区，实施该方法困难，不适于医疗资源不足地区的大规模人群筛查[2]。如何找到适合发展中国家使用的简单、快速、有效并且便宜的筛查方法成为子宫颈癌防治中亟待解决的问题[3]。

1资料与方法

1.1研究对象

2010年至2012年于南京大学医学院附属鼓楼医院妇科门诊就诊的30～59岁女性，有性行为史，宫颈存在，排除妊娠状态，自愿接受宫颈癌筛查。孕妇在妊娠结束后8周可入组。

1.2标本采集和临床检查

收集2份宫颈脱落细胞标本待检，用于Care HPV、HC2/HPV-PCR检测。依照病人入组顺序依次编号，奇数的研究对象先取care HPV标本，偶数的研究对象先取HC2/HPV-PCR标本。HC2和HPV-PCR检测共用一管标本。接着再采集一份宫颈脱落细胞标本，进行液基细胞学(LBC)检测。LBC结果阴性者，进入正常组； LBC≥ASC-US者，接受阴道镜检查，若镜下发现病变，则进行直接活检。当阴道镜检查不满意时(看不到完整的鳞柱交界，或病变伸入颈管内观察不到其全貌，或活检钳不能触及病变，或疑有腺体病变时)，则进行宫颈管诊刮术(ECC)。阴道镜下正常或活检结果正常者进入正常组，阴道镜下为炎症或活检结果为炎症/CIN 1者进入良性病变组；活检结果≥CIN 2者进入高危病变组。

1.3标本编盲及检测

采用随机盲法编号，care HPV、HC2/HPV-PCR检测各自独立进行。

1.4 Care HPV检测技术原理

Care HPV是一种快速HPV-DNA测定方法。主要原理为抗体结合顺磁性磁珠技术。使用裂解液溶解样本细胞，暴露HPV-DNA并使其解链为单链DNA；将单链DNA与全长的互补RNA杂交，形成HPV-DNA/RNA杂交物；将包被有单克隆抗体的磁珠与HPV-DNA/RNA杂交物混合；加入与单克隆抗体结合的碱性磷酸酶；加入与碱性磷酸酶结合的显色底物，显色底物产生的光强度反映样本中所包含的HPV-DNA数量。诊断结果用相对光单位(RLU)与最小阳性对照的RLU均值的比(RLU/CO)来表示。诊断阳性标准定义为标本中检出的HPV-DNA 0.5pg/mL。截断点为RLU/CO 1.0，≥1.0时认为HPV-DNA检测阳性，<1.0时为阴性。该技术可定量检测14种高危HPV型别(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)，单次检测样本量可达80余份，检测时间约2.5小时。检测过程由中国医学科学院肿瘤医院实验员进行质控。

1.5统计学方法

使用SPSS16.0统计软件分析，计算Kappa值和一致率，比较care HPV检测试剂和已被SFDA批准的HC2、HPV-PCR检测试剂的一致性；以阴道镜活检的病理诊断为金标准，计算care HPV检出≥CIN 2的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。

2结果

最终获得404例有效样本。其中高危组(≥CIN 2)组42例、良性病变组(炎症/ CIN 1)组50例，正常组有312例。

2.1 Care HPV、HC2和HPV-PCR检测的阳性率

Care HPV、HC2和HPV-PCR检测的阳性率分别是24.01%(97/404)、25.25%(102/404)和31.93%(129/404)。

2.2 Care HPV和第二代杂交捕获技术检测结果的一致性

Kappa=0.833(P<0.0001)，一致率=379/404=93.81%(95%CI：91.13%～95.87%)，见表1。

表1Care HPV 检测和HC2检测的一致性[n(%)]

Table 1 Consistency between care HPV test and HC2 test [n(%)]

2.3 Care HPV和HPV-PCR检测结果的一致性

Kappa=0.707(P<0.0001)，一致率=356/404=88.12%(95%CI：84.68%～91.01%)，见表2。

2.4 Care HPV检出≥CIN 2的准确性和有效性

Care HPV检出≥CIN 2的灵敏度为85.71%(95%CI：72.64%～94.00%)；特异度为83.15%(95%CI：79.03%～86.74%)；Yonden指数为68.86%(95%CI：64.34%～73.38%)；阳性预测值为37.11%(95%CI：27.94%～47.04%)；阴性预测值为98.05%(95%CI：95.98%～99.20%)，见表3。

表2Care HPV 检测和HPV-PCR检测的一致性[n(%)]

Table 2 　　Consistency between careHPV test and HPV-PCR test[n(%)]

表3Care HPV检出≥CIN 2的准确性和有效性[n(%)]

Table 3 Accuracy and validity of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2[n(%)]

2.5 Care HPV检出≥CIN 2的ROC曲线

Care HPV检出≥CIN 2的ROC曲线下面积为：Z=0.844(95%CI：0.779～0.909，P<0.0001)。ROC曲线下面积越大，诊断价值越高，见图1。

图1Care HPV检出≥CIN 2的ROC曲线

Fig.1ROC curves of careHPV in detecting lesions ≥CIN 2

3讨论

3.1 HPV-DNA检测作为宫颈癌初筛方法的理论支持

宫颈癌是唯一病因明确的恶性肿瘤，其发病与高危型人乳头状瘤病毒(HPV)持续感染有关[4]。2002-2012年世界卫生组织(WHO)发布的宫颈癌流行病学数据表明，宫颈癌的年死亡病例数近十年没有明显下降，这说明目前以细胞学为基础的宫颈癌筛查方案遇到了瓶颈，以HPV为基础的宫颈癌筛查策略可能带来新的希望[5]。2013年WHO制定最新《宫颈癌前病变筛查和管理指南》，重点推荐HPV-DNA检测作为宫颈癌初筛方法[6]，2015年的《美国宫颈癌筛查过渡期指南》也推荐将高危型HPV初筛作为目前宫颈癌筛查的替代方案，该指南中指出高危型HPV初筛与细胞学筛查相比在相同的时间间隔可以确保更低的罹患宫颈癌的风险[7]。2014年5月，在中国召开的HPV和宫颈癌筛查策略研讨会上，专家达成共识：对以人群为基础的筛查，HPV检测更适用于一线初筛；而对有经济能力的个体筛查，HPV-细胞学联合检测仍是最佳选择。然而，中国广大欠发达地区经济能力有限，细胞学检查医师匮乏，用HPV联合细胞学方法来筛查宫颈癌尚难以推广[8]。国内外均有学者在其研究中指出，HPV检测作为宫颈癌初筛的方法，可以在尚未建立细胞学筛查体系的地区应用[9-10]。

3.2 Care HPV检测的优势

HC2及HPV-PCR是目前临床广泛应用的HPV-DNA检测方法，但该两项方法不仅需要先进的检测设备，而且费用较高，很难在发展中国家的普通人群中推广。2003年到2007年间，在中国和印度开展了一项由Bill & Melinda Gates基金会资助的国际研究，力求研发适用于发展中国家的全新、快速、经济的宫颈癌筛查方法，其中一种方法就是本研究中使用的高危型HPV核酸检测试剂盒-careHPV 检测[11]。careHPV是特别为医疗资源薄弱地区的30岁以上妇女宫颈癌筛查所设计的，该方法可定量检测14种高危HPV型别(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)，2.5小时可以检测80余份标本，提高了检测速度和效率，筛查者当天即可得到HPV检测结果，并采取相应的随访和治疗手段，对于资源贫乏地区成功进行完整的筛查-治疗程序十分重要。与HC2/HPV-PCR相比，其优点在于该检测简单易行，检测时间短，取样人员范围宽。2009年由比尔及梅林达·盖茨基金会资助的、适合于发展中国家和地区的HPV快速筛查技术( careHPV) 在中国获得成功，为发展中国家和地区宫颈癌的早诊早治提供了行之有效的手段[3]。张荣等[12]在对山西襄垣地区妇女运用careHPV进行宫颈癌筛查时指出，careHPV是一种简单、快捷，受检者易于接受的HPV-DNA检测方法，可由新培训的无实验室经验、受教育程度较低的技术员取样，检测时对实验室条件要求较HC2低，只需要适宜的温湿度，充足的光线，一定的空间，对水电设备无特殊要求，价格亦低于HC2。

3.3本次研究结果分析

本研究数据显示care HPV与HC2试剂、HPV-PCR试剂具有高度一致性，care HPV与HC2检测的Kappa值为0.833(P<0.0001)，一致率为93.81%(95%CI：91.13%～95.87%)；与HPV-PCR检测的Kappa为0.707(P<0.0001)，一致率为88.12%(95%CI：84.68%～91.01%)。Care HPV与HC2对HPV感染阳性的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。care HPV检出≥CIN 2的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为85.71%(95%CI：72.64%～94.00%)、83.15%(95%CI：79.03%～86.74%)、37.11%(95%CI：27.94%～47.04%)和98.05%(95%CI：95.98%～99.20%)。Care HPV检出≥CIN 2的灵敏度介于HC2 96.1%与传统巴氏图片53%之间，特异度低于两者。通过绘制ROC曲线和计算ROC曲线下面积来反映care HPV的诊断价值，得出的ROC曲钱下面积为Z=0.844(95%CI：0.779～0.909，P<0.0001)。研究中出现HPV PCR检测和care HPV阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)，HPV-PCR检测高于care HPV，出现以上结果可能与取样顺序及实验室误差有关。因HC2和HPV-PCR共用一个标本，需从HC2管中分出50微升样品用于HPV-PCR检测，同时标本检测过程前后历时数天，标本的反复冻溶也可能会对检测结果造成一定影响。

综上，本研究结果显示care HPV与HC2试剂、HPV-PCR试剂具有高度一致性，筛查和治疗可在一次访视中同时完成，有良好实际应用价值，有希望代替HC2和HPV-PCR技术用于医疗资源贫乏或薄弱地区妇女的宫颈癌筛查，浓缩高危人群，实现早诊早治的二级预防目标。

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[专业责任编辑：安瑞芳]

[收稿时间]2016-01-23

[作者简介]方婧(1986-)，女，住院医师，硕士毕业，主要从事妇科肿瘤的研究。

[通讯作者]洪颖，教授。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.014

[中图分类号]R73.3

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5293(2016)04-0457-03

Clinical value of high-risk HPV nucleic acid detection kit careHPV in screening of cervical cancer and precancerous lesions

FANG Jing, HONG Ying

(Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Drum Tower Hospital Medical College of Nanjing University,Jiangsu Nanjing 210008, China)

[Abstract]Objective To assess the clinical value of careHPV test in screening of cervical cancer and precancerous lesions. Methods From 2010 to 2012 cervical specimens were collected from women aged 30-59 years old visiting department of gynecology of Nanjing Drum Tower Hospital between. They were detected by careHPV test, HC2, HPV-PCR test and TCT. Women with TCT≥ASC-US had colposcopy with directed biopsy and endocervical curettage if necessary. Based on the gold standard of histopathology, patients with CIN2 or higher belonged to high-risk group and those with inflammation/CIN1 belonged to benign group. Results Totally 404 valid samples were collected. There were 42 cases in high-risk group, 50 cases in benign group, and 312 cases in normal group. The value of Kappa was 0.833 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HC2 (P<0.0001) and the concordance rate was 93.81%. The value of Kappa was 0.707 in indicating the consistency of detection results between careHPV test and HPV-PCR (P<0.0001) and the concordance rate was 88.12%. The sensitivity and specificity of careHPV test in detecting lesions ≥CIN 2 were 85.71% and 83.15%, respectively. Conclusion The careHPV test is highly consistent with HC2 and HPV-PCR test. CareHPV has good sensitivity and specificity in the detection of HPV infection with short time consuming, and is expected to be the main method for screening of cervical cancer and precancerous lesions in the areas with relatively insufficient medical resources.

[Key words]human papillomavirus (HPV); careHPV test; cervical cancer; cervical precancerous lesion