卵巢癌患者血清肿瘤干细胞标志物CD133和miR-145的临床价值

王　丹，王　莉，王治洁

(1.同济大学医学院，上海 200092；2.上海市第八人民医院妇产科，上海 200235；3.抚顺市中心医院妇科，辽宁 抚顺 116300)



卵巢癌患者血清肿瘤干细胞标志物CD133和miR-145的临床价值

王丹1,2，王莉3，王治洁2

(1.同济大学医学院，上海 200092；2.上海市第八人民医院妇产科，上海 200235；3.抚顺市中心医院妇科，辽宁 抚顺 116300)

[摘要]目的观察卵巢癌患者血清CD133和miR-145的表达及其对预后的影响。方法选择2010年1月至2014年6月在同济大学医学院、上海市第八人民医院和抚顺中心医院手术的卵巢癌患者84例为卵巢癌组；良性肿瘤手术的患者30例为对照组。用qRT-PCP的方法测定血清CD133和miR-145相对表达量，分析CD133和miR-145表达量与年龄、肿瘤直径、病理类型、分化程度、CA125水平和是否转移分期的关系。结果卵巢癌患者的血清CD133相对表达明显高于对照组(t=5.34，P<0.01)，治疗后明显降低(t=8.25，P<0.01)；而miR-145相对表达量明显低于对照组(t=5.06，P<0.01)，治疗后明显升高(t=10.96，P<0.01)。卵巢癌患者血清CD133和miR-145表达量与年龄、肿瘤直径和病理类型无明显的相关性(t/F值为0.03～0.93，均P>0.05)，血清CD133和miR-145表达量与肿瘤分化程度、CA125水平、淋巴转移和FIGO分期呈明显的相关性(t/F值为2.01～28.96，均P<0.05)。术后随访发现CD133高表达组的1年复发率为76.79%，明显高于低表达组的42.86%(χ2=8.06，P<0.05)。miR-145高表达组的1年复发率为43.59%，明显低于低表达组的84.44%(χ2=13.67，P<0.05)。结论CD133在卵巢癌患者的血清呈高表达，而miR-145呈低表达，两者参与了卵巢癌的发生发展过程，两者联合检测对于诊断和评估预后具有重要的临床价值。

[关键词]卵巢癌；CD133；miR-145；诊断；预后

卵巢癌是妇科的常见肿瘤，其死亡率为妇科肿瘤的首位，由于其位置较深，起病较为隐匿，缺乏特异性的诊断，5年生存率较低[1]。近年来研究表明肿瘤干细胞是肿瘤发生发展的根源。CD133是肿瘤干细胞的常用标记物，与卵巢癌的发生发展具有密切联系[2]。另一类标记物微小RNA(micro RNA，miRNA)参与多种肿瘤发生发展，检测miRNA对肿瘤诊断和预后具有重要意义[3]。miR-145与卵巢癌的诊断和预后是否具有联系尚无定论。本组研究对卵巢癌患者血清CD133和miR-145的检测，探讨两者与卵巢癌的相关性，为卵巢癌的早期诊断和治疗提供理论依据。

1资料与方法

1.1临床资料

选择2010年1月至2014年6月在同济大学医学院、上海市第八人民医院和抚顺中心医院手术的卵巢癌患者84例，为卵巢癌组。所有患者均被病理所证实，平均年龄61.45±9.56(45～80)岁，≥60岁51例，<60岁33例，病理类型：浆液性腺癌37例，黏液性腺癌29例，内膜样腺癌15例和其他类型3例。CA125≥200(IU/mL)30例和<200(IU/mL)54例。按照国际妇科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期分为Ⅰ期18例，Ⅱ期11例，Ⅲ期46例和Ⅳ期9例。根据所有的患者均获得完全随访资料，且在术后30d内未出现患者死亡；肿瘤的最大直径不超过10cm；无远处转移；术中经病理冰冻切片证实未见肿瘤残留。选择同期在上海市第八人民医院因良性肿瘤手术的患者约30例，为对照组，平均年龄60.94±10.32(45～80)岁。两组患者入组时均获得患者同意，经医院伦理委员会通过。两组的年龄等一般资料差异无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1血液标本的保存

所有患者术前2～3天和术后1个月，采集外周静脉血约3mL，离心收集血清放置在-80℃的冰箱中待测。

1.2.2CD133和miR-145的测定

抽提细胞总RNA。根据目标基因的mRNA序列，按照引物设计的原则，用设计软件primer express 3.0设计并合成qPCR检测引物及探针。以逆转录产物为模板，在实时定量PCR仪上进行扩增。采用相对定量的方法对miRNA进行相对量表达进行计算，以2-△△CT法，分析基因相对表达量。所有的操作均严格按照试剂盒操作。

1.2.3观察指标

观察卵巢癌组和对照组血清CD133和miR-145相对表达量，与年龄、肿瘤直径、病理类型、分化程度、CA125水平、是否转移及与FIGO分期的关系；卵巢癌患者术前术后血清CD133和miR-145相对表达量的变化及与预后的关系。

1.3统计学方法

2结果

2.1卵巢癌患者血清CD133和miR-145表达的变化

卵巢癌患者的血清CD133相对表达为8.26±2.73，明显高于对照组的5.38±1.88，两组比较差异有统计学意义(t=5.34，P<0.01)；而miR-145相对表达量为4.39±1.66，明显低于对照组的6.18±1.67，两组比较差异有统计学意义(t=5.06，P<0.01)。

2.2卵巢癌患者血清CD133和miR-145表达量与临床病理特征的关系

卵巢癌患者血清CD133和miR-145表达量与年龄，肿瘤直径和病理类型无明显的相关性(均P>0.05)，血清CD133和miR-145表达量与肿瘤分化程度、CA125水平、淋巴转移和FIGO分期呈明显的相关性(均P<0.05)，见表1。

临床病理特征例数(n)血清CD133表达量t/FP血清miR-145表达量t/FP年龄0.170.860.310.76 ≥60岁518.22±2.814.35±1.81 <60岁338.32±2.194.46±1.25肿瘤直径0.540.590.930.36 ≥3cm478.38±2.494.25±1.57 <3cm378.11±1.924.58±1.68病理类型0.031.020.230.88 浆液性腺癌378.18±2.564.54±1.34 黏液性腺癌298.32±2.084.26±1.78 内膜样腺癌158.34±1.974.31±1.45 其他类型38.28±2.184.28±1.67肿瘤分化程度12.270.0022.390.00 高136.25±2.186.43±1.28 中277.71±2.764.82±1.76 低449.19±1.873.53±1.58CA125(IU/mL)4.260.002.010.04 ≥200309.74±1.763.87±1.56 <200547.44±2.654.68±1.87是否转移6.090.002.4500.02 是3710.72±2.173.72±1.46 否477.44±2.654.62±1.82FIGO分期10.190.0028.960.00 Ⅰ185.89±2.872.27±1.28 Ⅱ117.34±1.813.72±1.67 Ⅲ468.82±2.654.68±1.56 Ⅳ911.26±2.188.00±1.73

2.3卵巢癌除术前后血清CD133和miR-145表达水平的变化

卵巢癌患者的血清术前CD133和miR-145相对表达为8.90±2.46和4.39±1.66，治疗后CD133的相对表达量为5.76±2.18较治疗前明显降低(t=8.25，P<0.01)，而miR-145相对表达为6.86±1.23，较治疗前出现明显的升高(t=10.96，P<0.01)。

2.4术前卵巢癌患者血清miR-224和miR-145表达量与卵巢癌患者预后的关系

术后随访平均时间为26.83±7.92(6～48)月，按照术前的卵巢癌患者血清CD133和miR-145相对表达量的平均值，将卵巢癌患者分为高表达组和低表达组。血清CD133高表达组为56例，其1年复发率为76.79%(43/56)，低水平表达组为28例，其1年复发率为42.86%(12/28)，高表达的复发率明显高于低表达组(χ2=8.06，P<0.05)。血清miR-145高表达39例，其1年复发率为43.59%(17/39)，低表达为45例，1年复发率为84.44%(38/45)，低表达组的1年复发率明显高于高表达组(χ2=13.67，P<0.05)。

3讨论

3.1血清CD133的表达在卵巢癌患者中的临床价值

本组研究结果表明，卵巢癌组的血清CD133相对表达量明显高于对照组(P<0.05)，同时发现CD133血清相对表达量与肿瘤的分化程度具有明显相关性(P<0.05)，肿瘤的分化程度越低，血清的CD133水平表达越高；同时还发现与卵巢癌患者的淋巴转移具有明显的相关性(P<0.05)，出现转移的患者，血清的CD133表达水平也就越高；与肿瘤分期也具有明显的相关性(P<0.05)，肿瘤的分期越高，患者血清表达量也就越高。说明CD133是卵巢癌患者评价肿瘤恶性程度和预后的重要指标，对于早发现卵巢癌，评估卵巢癌的病情具有重要意义。本研究实验还发现，CD133阳性的患者其1年复发率明显高于阴性的患者(P<0.05)，说明CD133是卵巢癌重要的预后指标。与CD133阳性卵巢癌的功能特性具有内在联系，现已知CD133阳性的细胞有利于脉管系统的形成，参与新生血管的生成，对卵巢癌细胞的生长，增殖，浸润，转移和复发的过程中具有重要的意义，越来越多的实验表明CD133可能成为肿瘤干细胞的特异性标记物，CD133表达的卵巢癌更具有增殖和可能形成能力，并且与肿瘤的恶性转化有关[4]。本组研究还发现CD133表达量与血清CA125水平具有明显的正相关性(P<0.05)，大量的研究结果证实CA125与卵巢癌的早期发现和预后监测中具有重要意义，而本组发现血清CD133的检测与CA125具有明显的联系(P<0.05)，CD133可能成为早期发现卵巢癌的肿瘤标记物，并成为评估病情和估计预后的重要指标，其确切的相关性需要进一步的实验研究。

3.2血清miR-145的表达在卵巢癌患者中的临床价值

本组研究结果表明，卵巢癌患者血清表达miR-145水平明显低于对照组(P<0.05)。miR-145最早在结肠癌中发现低表达，随后在其他组织中也发现出现明显的下调如卵巢癌，前列腺癌，肺癌和乳腺癌等[5-6]。本组研究结果发现，miR-145表达与肿瘤的分化程度，肿瘤分期和肿瘤是否有淋巴转移具有明显的相关性(P<0.05)，肿瘤的分化程度越高，分期越早和淋巴结未发生转移的患者血清表达miR-145相对水平较高，故miR-145表达是卵巢癌的保护因素，与文献报道类似[7]。本研究还发现miR-145表达水平与CA125水平呈明显负相关，而CA125为卵巢癌非特异性的肿瘤指标，故 miR-145有可能同样成为卵巢癌的肿瘤指标。现已知miRNA是一类高度保守的非编码单链小分子RNA，广泛存在大多数的真核细胞中。在肿瘤的发生发展中具有重要的作用，对肿瘤发生发展多个环节进行调节，参与细胞增殖，分化，侵袭和转移等过程[8-9]。因此推测miR-145作为一种抑癌基因，在卵巢癌的发生发展中具有重要作用，可能作为新的治疗靶点在卵巢癌的治疗中发挥重要作用。本组研究发现miR-145表达低的卵巢癌患者的1年复发率明显高于表达高的患者，说明miR-145的表达与卵巢癌具有明显的相关性。故miR-145调控着卵巢癌细胞的生长和侵袭，并影响卵巢癌的预后，推测miR-145可能作为卵巢癌新的标记物作为卵巢癌早期诊断和预后的评估。

总之，CD133在卵巢癌患者的血清呈高表达，而miR-145呈低表达，两者参与了卵巢癌的发生发展过程，两者联合检测对于诊断和评估预后具有重要的临床价值。

[参考文献]

[1]Cui L,Kwong J,Wang C C.Prognostic value of circulating tumor cells and disseminated tumor cells in patients with ovarian cancer:a systematic review and meta-analysis[J].J Ovarian Res,2015,8:38.

[2]支小改,吴晓庆,谢静燕,等.肿瘤干细胞在卵巢癌治疗中的进展[J].中国妇幼健康研究.2014,25(4):706-708.

[3]Wuerkenbieke D,Wang J,Li Y,etal.miRNA-150 downregulation promotes pertuzumab resistance in ovarian cancer cells via AKT activation[J].Arch Gynecol Obstet,2015,292(5):1109-1116.

[4]Zhou Q,Chen A,Song H,etal.Prognostic value of cancer stem cell marker CD133 in ovarian cancer:a meta-analysis[J].Int J Clin Exp Med,2015,8(3):3080-3088.

[5]刘龙浩,魏莎莉,余秋波,等.miR-145对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响[J].解剖学杂志,2014,37(3):289-292.

[6]Cui S Y, Wang R, Chen L B.MicroRNA-145: a potent tumour suppressor that regulates multiple cellular pathways[J]. J Cell Mol Med,2014,18(10):1913-1926.

[7]Zhu X,Li Y,Xie C,et al.miR-145 sensitizes ovarian cancer cells to paclitaxel by targeting Sp1 and Cdk6[J].Int J Cancer,2014,135(6):1 286-1 296.

[8]Zhang Z,Zhou B,Gao Q,etal.A polymorphism at miRNA-122-binding site in the IL-1α 3'UTR is associated with risk of epithelial ovarian cancer[J].Fam Cancer,2014,13(4):595-601.

[9]Gu Y,Zhang M,Peng F,etal.The BRCA1/2-directed miRNA signature predicts a good prognosis in ovarian cancer patients with wild-type BRCA1/2[J].Oncotarget,2015,6(4):2397-2406.

[专业责任编辑：张忠明]

[收稿日期]2015-09-24

[基金项目]上海市徐汇区卫生局医学科研课题青年资助项目(编号：SHXp01207)

[作者简介]王丹(1980-)，女，主治医师，主要从事卵巢癌的基础和临床研究。

[通讯作者]王治洁，主任医师。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.015

[中图分类号]R711.7

[文献标识码]A

[文章编号]1673-5293(2016)04-0460-03

Clinical significance of serum tumor stem cell marker CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer

WANG Dan1,2, WANG Li3, WANG Zhi-jie2

(1.Medical College of Tongji University, Shanghai 200092, China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shanghai Eighth People’s Hospital, Shanghai 200235, China; 3.Department of Gynecology,Liaoning Fushun Central Hospital, Liaoning Fushun 116300, China)

[Abstract]Objective To observe the expressions of serum CD133 and miR-145 in patients with ovarian cancer and their impact on prognosis. Methods From January 2010 to June 2014 totally 84 cases of ovarian cancer undergoing surgery in Medical College of Tongji University, Shanghai Eighth People’s Hospital or Fushun Central Hospital were selected in ovarian cancer group. Thirty cases of benign tumor were selected in control group. The serum expressions of CD133 and miR-145 were detected by qRT-PCP method, and the relationship between them and age, tumor size, histological type, degree of differentiation, CA125 level as well as metastasis were analyzed. Results The serum CD133 expression level in ovarian cancer group was significantly higher than that in the control group (t=5.34, P<0.01) and significantly lowered after surgery compared with that before surgery (t=8.25, P<0.01). The expression level of miR-145 was significantly lower than that in the control group (t=5.06,P<0.01) and significantly increased after surgery than that before surgery (t=10.96, P<0.01). CD133 and miR-145 expressions in ovarian cancer patients were not significantly correlated with age, tumor size and histological type (t/F value ranged 0.03-0.93, all P>0.05), but they were obviously correlated with tumor differentiation, CA125 level, lymph node metastasis and FIGO stage (t/F value ranged 2.01-28.96, all P<0.05). Postoperative follow-up revealed that the 1-year recurrence rate was 76.79% in patients with high expression of CD133, which was significantly higher than 42.86% in patients with low expression (χ2=8.06,P<0.05). In patients with high expression of miR-145 1-year recurrence rate was 43.59%, which was significantly lower than 84.44% in those with low expression (χ2=13.63,P<0.05).Conclusion The serum expression of CD133 is high but miR-145 is low in patients with ovarian cancer. They both involve in the development and progression of ovarian cancer, and combining detection of them is of great clinical significance in diagnosis and assessment of prognosis.

[Key words]ovarian cancer; CD133; miR-145; diagnosis; prognosis